张骞
- 作品数：26 被引量：83H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所更多>>
- 发文基金：艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人博卡病毒TaqMan探针实时定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：1
- 2010年
- 目的:建立人博卡病毒(HBoV)核酸特异、快速、敏感的TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并对临床样本进行检测。方法:比对编码HBoV非结构蛋白NP-1的基因序列,选取其保守片段设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测方法,并与传统PCR方法进行比较,然后分别对两者的灵敏性、特异性、稳定性及临床样本检验的适用性等进行评价。结果:所建立的实时定量PCR检测方法可用于HBoV的特异性检测;相对于传统PCR所达到的250拷贝/反应的检测灵敏度,实时定量PCR的检测灵敏度可高达10拷贝/反应,检测范围为109～101拷贝/反应,且具有良好的特异性和重复性;初步用于76份临床呼吸道标本检测,检出阳性5例,高于普通PCR方法(3/76)。结论:建立了HBoV TaqMan探针实时定量PCR检测方法,并可用于临床鼻咽拭子样本的检测,为开展HBoV流行病学监测及早期临床诊断提供了技术手段。
- 薛鹏浩张淼涛张骞张钫袁武梅麻粉莲王翔郑丽舒
- 关键词：人博卡病毒TAQMAN探针实时定量PCR
- 人偏肺病毒DNA疫苗的构建和小鼠免疫反应的研究被引量：3
- 2009年
- 目的构建人偏肺病毒（hMPV）DNA疫苗，小鼠免疫后评价其细胞和体液免疫水平。方法利用PCR方法，从hMPV的cDNA中扩增融合蛋白FATM（缺失跨膜区）基因和基质蛋白M基因，构建DNA疫苗pcDNA3．1His．FATM和pcDNA3．1His—M，瞬时转染后用WesternBlot和间接免疫荧光方法检测F、M蛋白表达。疫苗肌内注射免疫小鼠，ELISA和ELISPOT方法分别检测血清IgG抗体和小鼠脾细胞CTL水平。结果WesternBlot和间接免疫荧光（IFA）方法证明构建的疫苗可表达FATM和M蛋白。pcDNA3．1His—FATM单独免疫小鼠，血清抗体滴度为1：44；与pcDNA3．1His-M联合免疫后，血清抗体滴度为1：64。ELISPOT检测证明，联合免疫组小鼠脾细胞产生IFN．7的效应CD8＋T细胞数为42±8．9，高于单独免疫组32±7．4的水平。结论DNA疫苗pcDNA3．1His—FATM可以诱导产生特异性的体液和细胞免疫，与pcDNA3．1His-M联合免疫，可以提高免疫水平。
- 刘文培郑丽舒段招军谢志萍张骞张万菊侯云德
- 关键词：变性肺病毒疫苗DNA免疫抗体生成
- 人博卡病毒VP2蛋白单克隆抗体的制备被引量：2
- 2012年
- 目的表达纯化人博卡病毒（human Bocavirus，HBoV）VP2蛋白，采用杂交瘤方法制备抗HBoVVP2蛋白的单克隆抗体。方法应用原核表达载体pET-30a和大肠埃希菌表达VP2蛋白，并用固定化金属亲和层析，纯化后的蛋白作为抗原免疫BALB／c小鼠，利用杂交瘤技术和间接ELASA方法筛选阳性的杂交瘤细胞，并对单克隆抗体进行分型检测和滴度测定。结果表达并纯化获得了重组HBoVVP2蛋白，利用杂交瘤技术得到单克隆IgG抗体，抗体效价达到1：4×10^5。结论利用HBoVVP2蛋白免疫制备了单克隆抗体，并具有较高的效价。本研究为快速诊断和研究HBoV打下基础。
- 赵智慧薛鹏浩魏建民张骞郑文芝麻粉莲袁武梅郑丽舒
- 关键词：人博卡病毒
- 人白细胞介素7在CHO细胞中的表达及活性鉴定被引量：2
- 2015年
- 目的:用CHO细胞表达人白细胞介素7(IL-7),并验证其促细胞增殖功能。方法:构建表达质粒pc DNA5/FRT-IL-7,用Lipo2000将辅助质粒p OG44和表达质粒共转染Flp-In-CHO细胞,潮霉素B筛选并单克隆化稳定表达目的蛋白的细胞;通过Western印迹、ELISA方法验证上清中的目的蛋白,并对其定量;用流式细胞仪检测该蛋白促外周血单核细胞增殖的能力。结果:获得了2株稳定表达IL-7的细胞,IL-7的表达量均为3 mg/(L·d);流式细胞术检测表明,所表达的IL-7的促外周血单核细胞增殖能力强于R&D原核系统表达的IL-7。结论:获得了稳定表达人IL-7的CHO细胞系,且表达的蛋白具有促外周血单核细胞增殖的功能。
- 李金松麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：CHO细胞外周血单核细胞
- 北京地区呼吸道感染住院儿童中人博卡病毒流行病学和基因进化分析被引量：4
- 2022年
- 目的分析北京地区呼吸道感染住院儿童人博卡病毒1型(human bocavirus 1,HBoV1)的流行病学特征,阐明遗传进化特点。方法采用real-time PCR方法对2017—2019年北京友谊医院呼吸道感染住院患儿的2848份鼻咽抽吸物样本进行HBoV1核酸检测,结合临床信息进行流行病学分析;利用巢氏PCR方法扩增HBoV1的NP1和VP1基因,分析序列同源性;构建VP1的最大分支可信度树和种群进化图,进行时间进化分析。结果2848份样本中检出HBoV1阳性样本90份,感染率为3.16%,5岁以下患儿居多(93.33%,84/90)。HBoV1感染全年可见,10月份病例数最多,检出率为7.23%(18/249)。HBoV1阳性病例多与其他呼吸道病毒混合感染(48.89%,44/90),临床症状多为咳嗽和发热。巢氏PCR扩增获得NP1区序列55条和VP1序列47条,核酸同源性分别为98.9%~100%和99.1%~100%。HBoV1 VP1时间进化分析显示本研究获得的HBoV1基因序列出现在两个进化分支上,HBoV1种群动态平稳。结论HBoV1是导致北京地区儿童呼吸道感染的常见病毒之一,其基因进化相对稳定,但仍需持续监测。
- 张骞王超黄益曼麻粉莲郑丽舒
- 关键词：呼吸道感染人博卡病毒基因进化
- JY佐剂对人乳头瘤病毒18型L1蛋白病毒样颗粒黏膜免疫效果的影响
- 2013年
- 目的探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)18型L1蛋白病毒样颗粒(Virus-like parti-cle,VLP)黏膜免疫效果的影响,并观察鼻腔反复免疫后与HPV58、11和6型的免疫交叉反应。方法用含或不含JY佐剂的HPV18 L1 VLP分别经肌肉和鼻腔免疫BALB/c小鼠,并设PBS对照组,于第0、3、6周各免疫1次,免疫后第2、5、8周采血,ELISA法检测血清IgG抗体滴度;于第8周分离脾淋巴细胞并收集呼吸道灌洗液,采用IFNγELISPOT试剂盒检测细胞免疫效果,ELISA法检测黏膜免疫效果;鼻腔免疫各组取5只小鼠,继续免疫10次,每次间隔3周,收集第14、20、26、32和38周的血清,ELISA法检测HPV18 L1蛋白与HPV58、11和6型的免疫交叉反应。结果免疫3次后,不含或含有佐剂的HPV18 L1蛋白经肌肉免疫后的血清IgG抗体滴度(均为104.6)高于经鼻腔免疫后的血清IgG抗体滴度(分别为101.9和102.8)。含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后呼吸道灌洗液中sIgA抗体浓度(30.06μg/ml)明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(23.47μg/ml)(P<0.01),但肌肉免疫组未检测到sIgA抗体。含有佐剂的HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫诱导的细胞斑点数明显高于不含佐剂的HPV18 L1蛋白鼻腔免疫组(P<0.01),不含佐剂与含佐剂的HPV18 L1蛋白肌肉免疫组诱导的细胞斑点数差异无统计学意义(P>0.05)。HPV18 L1免疫小鼠后的血清与HPV58、11和6型之间均有交叉反应,在第32周血清特异性IgG抗体滴度最高。结论 HPV18 L1 VLP经肌肉免疫后,其血清抗体水平高于鼻腔免疫组,但该蛋白鼻腔免疫后细胞免疫反应和黏膜sIgA抗体水平均高于肌肉免疫组;JY佐剂能增强HPV18 L1蛋白经鼻腔免疫后的小鼠细胞反应及黏膜sIgA抗体应答,但肌肉免疫组佐剂作用不明显;HPV18 L1蛋白反复鼻腔免疫后,可拓宽抗原保护谱。
- 麻粉莲袁武梅张骞郑文芝赵智慧郑丽舒
- 关键词：人乳头瘤病毒18L1蛋白病毒样颗粒黏膜免疫
- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白的包涵体和可溶性表达及纯化被引量：2
- 2014年
- 目的:原核表达系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白,建立包涵体和可溶性表达的L1蛋白的纯化方法。方法:构建重组表达质粒p GEX-4T-1-HPV18 L1,在大肠杆菌BL21中以包涵体和可溶性方式表达HPV18 L1蛋白。通过超声波破碎菌体、洗涤包涵体、碱变性、透析复性和谷胱甘肽(GST)琼脂糖凝胶4B亲和层析纯化包涵体蛋白;在菌体中加入三磷酸腺苷(ATP)和3.5 mol/L尿素孵育后,GST 4B亲和层析纯化可溶性蛋白,凝血酶酶切。SDS-PAGE和Western印迹鉴定表达和纯化产物。结果:SDS-PAGE结果表明,HPV18 L1蛋白以包涵体和可溶性方式在大肠杆菌BL21内高效表达,均产生相对分子质量约为86 000的HPV18 L1-GST融合蛋白。Western印迹结果显示,包涵体纯化后获得的融合蛋白降解条带较多;而可溶性蛋白纯化后获得的融合蛋白未降解,凝血酶酶切后得到HPV18 L1蛋白,可与HPV18 L1蛋白单克隆抗体结合。结论:采用原核系统表达了HPV18 L1-GST融合蛋白,分别建立了包涵体和可溶性蛋白的纯化方法,获得HPV18 L1蛋白,为其进一步应用奠定了基础。
- 麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：包涵体可溶性蛋白纯化
- JY佐剂对HPV16和18型L1病毒样颗粒黏膜免疫效果的影响
- 2015年
- 目的 探讨JY佐剂对人乳头瘤病毒16和18型L1病毒样颗粒（HPV16 ＋18 L1 VLP）黏膜免疫效果的影响.方法 用含或不含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP分别经鼻腔和肌内注射免疫小鼠3次,检测血清IgG抗体、中和抗体和肺灌洗液sIgA抗体滴度与细胞免疫反应.结果 含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫组血清IgG抗体滴度明显高于不含佐剂组（P＜0.01）,含或不含佐剂的VLP肌内注射组抗体滴度相同;含JY佐剂的HPV16＋ 18 Ll VLP肌内注射免疫组血清中和抗体滴度高于不含佐剂组,仅在含有佐剂的VLP鼻腔免疫组检测到血清中和抗体;含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫组肺灌洗液sIgA抗体浓度明显高于不含佐剂组（P＜0.05）;含JY佐剂的HPV16＋ 18 L1 VLP鼻腔免疫和肌内注射组细胞斑点数均明显高于不含佐剂组（P ＜0.01,P＜0.05）.结论 JY佐剂能增强HPV16＋ 18 L1 VLP经鼻腔免疫后的小鼠的细胞、体液和黏膜免疫应答,但肌内注射免疫组佐剂作用不明显.
- 麻粉莲郑文芝张骞袁武梅郑丽舒侯云德
- 关键词：乳头状瘤病毒病毒粒子免疫黏膜
- 基因芯片技术的发展和应用被引量：40
- 2008年
- 自基因芯片出现以来,这种同时具有信息量大、操作简单、速度快捷等优点的技术就迅速引起人们的注意。随着分子生物学的迅猛发展和人们对越来越多物种的基因组进行研究,得以大量应用的基因芯片技术也在不断完善、成熟,并广泛运用于生命科学的各个领域。本文重点介绍基因芯片技术的进展、应用现状及发展前景。
- 张骞盛军
- 关键词：基因芯片技术分子生物学
- 人乳头瘤病毒18型L1蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达被引量：1
- 2015年
- 目的:利用昆虫杆状病毒系统表达人乳头瘤病毒18型(HPV18)L1蛋白。方法:将L1基因与p Fast Bac1(p FB1)载体连接,构建转移载体p FB1-L1,转化含Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,获得穿梭质粒r Bacmid-L1;r Bacmid-L1转染Sf9细胞,获得重组病毒r Bac-L1;PCR法检测重组杆状病毒基因组L1基因,间接免疫荧光法和Western印迹检测L1蛋白的表达。结果:穿梭质粒r Bacmid-L1经PCR鉴定构建正确;感染r Bac-L1的Sf9细胞经PCR扩增可见1629 bp的特异性条带,间接免疫荧光检测可见绿色荧光,Western印迹鉴定与小鼠抗L1单克隆抗体发生特异性反应,在相对分子质量约60 000处可见特异性条带。结论:利用昆虫杆状病毒表达系统表达了HPV18 L1蛋白。
- 麻粉莲张骞郑丽舒
- 关键词：L1蛋白人乳头瘤病毒18型杆状病毒SF9细胞
