朱宛宛
- 作品数：14 被引量：41H指数：4
- 供职机构：中国科学院动物研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途
- 本发明公开了一种表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途，属于医学生物技术领域。表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体，其保藏号为CGMCCNo.2086。本发明的优点是：本发明构建的慢病毒载体含有两个启动子结构，可同...
- 王淑艳关云谦任萍朱宛宛王旸徐艳玲张愚
- 文献传递
- 国际新格局下的干细胞研究发展与展望被引量：9
- 2009年
- 干细胞具有自我更新和多分化潜能。随着研究的不断深入,干细胞已成为生命科学领域最令人瞩目的研究项目之一,在为基础研究做出巨大贡献的同时也为再生医学展现了美好的应用前景。然而由于国家、民族、宗教信仰及政党等不同,干细胞在各地区发展程度并不一致。最近美国总统奥巴马宣布联邦政府将支持干细胞的研究,这势必会对目前干细胞研究领域的发展格局产生深远的影响。而我国对干细胞及治疗性克隆的研究一直持支持态度,并且在该领域取得了一定的原创性成果。因此面对新的研究格局,我国应继续积极制定相应对策,不断推动干细胞的研究,并且加速干细胞在产业化领域中的应用。
- 朱宛宛于洋周琪
- 关键词：干细胞
- 小鼠胚胎干细胞分化扩增期连续低密度传代对原始细胞中Oct-4阳性细胞比例及神经分化能力的影响被引量：2
- 2009年
- 目的:探讨在分化扩增期采用连续低密度传代的方法是否能降低小鼠胚胎干细胞向神经细胞分化的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例,以及对神经分化能力的影响。方法:采用"五步法"将小鼠胚胎干细胞向神经元分化,进入扩增期后采用连续低密度传代的方法连续传10代。然后应用细胞免疫组化鉴定Oct-4阳性细胞、神经元与胶质细胞、流式细胞仪检测Oct-4阳性细胞比例、凋亡试剂盒测定细胞凋亡。结果:流式细胞仪检测出扩增期连续低密度传代得到的前体细胞中Oct-4阳性细胞的比例由16.17±4.8%降至4.33±1.63%,扩增期低密度传代细胞和正常高密度传代细胞的细胞凋亡率鉴定分别为15.16±3.64%和11.88±2.63%,步骤5诱导分化后的细胞GFAP和Tuj-1免疫组化染色呈阴性。结论:低密度传代培养可以减少分化后Oct-4阳性细胞的比例,且该比例下降不是由Oct-4阳性细胞的凋亡引起的。同时可能是因为低密度传代培养和高密度相比引起了细胞的质变、或者改变了前体细胞向神经元分化的某种微环境,导致了前体细胞不能分化为神经细胞。提示高密度培养在前体细胞向神经元分化过程中具有重要作用,高密度和低密度培养的比较,提供了研究ES细胞向神经元分化机制的新平台和研究方向。
- 王芳杜庆安朱宛宛吴迪徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：神经分化
- 免疫磁珠分选去除分化体系中鼠胚胎干细胞的方法
- 本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA-1IgM抗体，使总...
- 关云谦朱宛宛任萍王淑艳徐艳玲张愚
- 文献传递
- 免疫磁珠分选降低分化体系中胚胎干细胞的比例被引量：1
- 2009年
- 研究目的:采用免疫磁珠分选系统(magnetic activated cell sorting,MACS)分离去除小鼠胚胎干细胞(murine embryonic stem cells,mES)向神经细胞分化时培养体系中的ES细胞,即对分化细胞进行纯化,以期减少移植致瘤性。方法:诱导mES细胞向神经细胞分化,取分化第四期的细胞,胰酶消化制成单细胞悬液,用mES特异性表面抗原SSEA-1(special stage embryonic antigen-1)单抗标记,间接免疫磁珠分选系统分离去除SSEA-1阳性细胞,流式细胞仪检测分选前后细胞中mES细胞的比例,台盼蓝染色检测分选前后细胞存活率。结果:经MACS分选后的阴性细胞中的SSEA-1阳性率可以由分选前的(7.19±1.36)%下降到(1.34±0.80)%,结果具有显著性差异;分选后的细胞存活率仍为92%左右,与分选前存活率无明显变化。结论用SSEA-1作为表面标志,用MACS方法能有效地去除胚胎干细胞分化细胞中残存的胚胎干细胞,得到高纯度的分化细胞,并且细胞存活率不受影响,为下一步进行移植实验奠定基础。
- 朱宛宛杜庆安王淑艳徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：免疫磁珠分选胚胎干细胞神经前体细胞分化
- 不同滋养层对维持人胚胎干细胞的生长作用被引量：1
- 2009年
- 目的比较不同滋养层对保持连续传代培养的人胚胎干细胞(hESC)不分化和高增殖能力作用的差异。方法分别用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、人包皮成纤维细胞(hFF)、人骨髓间充质细胞(hMSC)作为滋养层培养hESC系H9细胞,采用碱性磷酸酶染色和台盼蓝染色观察不同滋养层支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率,并采用免疫荧光染色对传代5代以后的hESC进行生物学鉴定。结果3种滋养层细胞均可维持hESC呈克隆样生长,但是不同滋养层支持的克隆的形态差异大。3种滋养层细胞支持的hESC的大鼠抗阶段特异性胚胎抗原-3及碱性磷酸酶染色均呈阳性。MEF支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量和细胞存活率均显著高于人来源滋养层(均P<0.01)。hMSC支持的hESC的碱性磷酸酶阳性克隆数、细胞产量均显著高于hFF的hESC(均P<0.01)。结论3种滋养层细胞均可支持hESC的正常生长。MEF最有利于hESC的增殖,但是两种人来源滋养层细胞为去除动物源性的hESC培养体系奠定了基础。在维持hESC增殖方面,hMSC优于hFF。
- 朱宛宛李宁王芳付琳琳徐艳玲关云谦张愚
- 关键词：人胚胎干细胞滋养层包皮成纤维细胞骨髓间充质干细胞
- 含GDNF基因的慢病毒载体的构建和其在人胚胎神经干细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体转染了人胚胎来源的神经干细胞,探讨了转染后GDNF在神经干细胞中的体外表达水平及其影响因素。首先GDNF基因被克隆入慢病毒载体,通过瞬时转染法包装出病毒上清,经滴度鉴定后分别按拷贝数为1、2.5、5、10转染神经干细胞。转染后细胞经过潮霉素筛选得到均一表达GDNF的神经干细胞体系。其后分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR方法测定不同转染组细胞在不同时间点GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。实验中构建了表达GDNF基因的慢病毒载体,包装出的病毒上清在体外培养条件下成功转染了神经干细胞,经潮霉素筛选可以得到均一的持续表达分泌GDNF的人胚胎皮层神经干细胞体系。实验结果表明转染拷贝数可以影响GDNF的分泌水平,相同条件下转染拷贝数越高,GDNF分泌量越多,其基因表达水平越高。因此,含GDNF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的神经干细胞,使其持续表达GDNF,转染过程中可以通过拷贝数在一定水平上控制GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。
- 王淑艳任萍谢淑朱宛宛王暘关云谦张愚
- 关键词：胶质源性神经营养因子神经干细胞慢病毒载体
- 利用巢式聚合酶链反应检测单个胚胎小体细胞中时钟基因的表达被引量：2
- 2006年
- 目的建立一组灵敏的检测时钟基因(c lock gene)的巢式聚合酶链反应(nested PCR)方法,并检测小鼠胚胎小体(EB)来源的单细胞中重要时钟基因的表达情况。方法培养小鼠胚胎干细胞(mESC),体外诱导分化为EB,提取总RNA并进行反转录,用BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因特异引物进行巢式聚合酶链反应,电泳检测扩增产物,从而建立相应的巢式PCR反应体系。利用膜片钳获取胚胎小体来源的单个细胞,通过巢式PCR反应检测相应时钟基因的表达情况。结果确定了BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2基因的扩增参数。证明在此条件下无非特异扩增,并且能够检测到至少两个拷贝的目的分子。利用此检测体系发现,部分胚胎小体细胞中BMAL1、CLOCK、CRY1和CRY2时钟基因环路不完整。结论巢式PCR方法能够灵敏地、而且特异地从单细胞中检测出一组时钟基因的表达,时钟基因的转录在胚胎小体细胞中并不一致,即时钟基因的环路不完整。时钟基因可能在细胞分化过程中发挥着某种作用。
- 关云谦蔡彦宁谢淑朱宛宛徐艳玲张愚陈彪
- 关键词：巢式聚合酶链反应时钟基因单细胞
- 食蟹猴胚胎干细胞向间充质前体细胞诱导分化及鉴定被引量：1
- 2011年
- 间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可以诱导分化成脂肪、软骨、骨骼和骨骼肌细胞,并可作为骨骼、软骨或肌肉移植中的再生干细胞,广泛应用于细胞治疗和组织工程。胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)具有体外培养无限增殖和多向分化的特性,能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。该研究通过无血清条件下诱导食蟹猴ESCs形成类胚体(embryoid bodies,EBs),然后在血清条件下贴壁分化EBs成间充质前体细胞(mesenchymal precursor cells,MPCs),再经过长期体外培养,纯化和扩增MPCs。结果显示,纯化后的MPCs具有MSCs生物学特征,并能在体外诱导分化成脂肪细胞和骨细胞。将这些细胞皮下注射给SCID小鼠,并未发现形成肿瘤,提示食蟹猴ESCs来源的MPCs具有一定的安全性。
- 任振华王佳茵朱宛宛邹春林张愚
- 关键词：分化
- 慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞及其培养被引量：7
- 2008年
- 目的稳定培养人胚胎干细胞,并通过慢病毒载体对其进行绿色荧光蛋白标记。方法利用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层或Matrigel作为基质培养人胚胎干细胞,包装带有GFP序列的慢病毒转染人胚胎干细胞。对转染前后的人胚胎干细胞进行了碱性磷酸酶和SSEA-3免疫组化鉴定。结果在MEF饲养层和Matrigel上均可培养出呈克隆样生长,表达标志抗原的人胚胎干细胞,经慢病毒转染及抗生素筛选后仍可稳定表达GFP。结论成功地培养了人胚胎干细胞系,并进行了GFP标记。
- 李宁朱宝长朱宛宛王淑艳任萍关云谦张愚
- 关键词：人胚胎干细胞绿色荧光蛋白慢病毒
