任萍
- 作品数：11 被引量：24H指数：4
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- 含GDNF基因的慢病毒载体的构建和其在人胚胎神经干细胞中的表达被引量：4
- 2008年
- 利用含胶质源性神经营养因子(Glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)基因的慢病毒载体转染了人胚胎来源的神经干细胞,探讨了转染后GDNF在神经干细胞中的体外表达水平及其影响因素。首先GDNF基因被克隆入慢病毒载体,通过瞬时转染法包装出病毒上清,经滴度鉴定后分别按拷贝数为1、2.5、5、10转染神经干细胞。转染后细胞经过潮霉素筛选得到均一表达GDNF的神经干细胞体系。其后分别利用酶联免疫吸附(ELISA)方法和Real-time PCR方法测定不同转染组细胞在不同时间点GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。实验中构建了表达GDNF基因的慢病毒载体,包装出的病毒上清在体外培养条件下成功转染了神经干细胞,经潮霉素筛选可以得到均一的持续表达分泌GDNF的人胚胎皮层神经干细胞体系。实验结果表明转染拷贝数可以影响GDNF的分泌水平,相同条件下转染拷贝数越高,GDNF分泌量越多,其基因表达水平越高。因此,含GDNF的慢病毒载体可以成功转染人胚胎来源的神经干细胞,使其持续表达GDNF,转染过程中可以通过拷贝数在一定水平上控制GDNF的蛋白分泌水平和基因表达水平。
- 王淑艳任萍谢淑朱宛宛王暘关云谦张愚
- 关键词：胶质源性神经营养因子神经干细胞慢病毒载体
- 人胚皮层神经干细胞培养方法的探讨(简报)被引量：7
- 2007年
- 神经干细胞是一类具有多向分化潜能、自我复制能力，在特定条件诱因下：能够向特定类型神经元或神经胶质细胞分化的未分化或低分化细胞。神经干细胞的研究对于我们阐明神经发生机制，进行神经变性疾病的细胞替代治疗都有重要意义。目前．从人胚组织分离神经干细胞的方法不尽相同，对于大脑皮层神经干细胞的分离．一些学者认为机械分离即能达到分离细胞的效果，采用消化酶可能会引起细胞存活率的下降且对于分离大量细胞并无明显效果：另外一部分文献报道则主张通过一种或多种酶消化结合机械吹打达到分离细胞进行原代培养的目的。由于人胚组织来源有限，而且人胚神经细胞特别是皮层神经细胞对缺血、缺氧和损伤非常敏感，如何在完全分离细胞的同时减少细胞死亡率成为影响实验成败的关键问题：本实验进一步对两种常用基础培养基对神经干细胞成球的作用进行了比较，并采用两种消化酶进行传代。探索高效规范的人胚皮层神经干细胞培养方法．为进一步利用神经干细胞进行基因治疗和细胞移植奠定基础。
- 任萍关云谦张愚
- 关键词：干细胞皮层
- 表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途
- 本发明公开了一种表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体及其用途，属于医学生物技术领域。表达胶质源性神经营养因子的慢病毒载体，其保藏号为CGMCCNo.2086。本发明的优点是：本发明构建的慢病毒载体含有两个启动子结构，可同...
- 王淑艳关云谦任萍朱宛宛王旸徐艳玲张愚
- 文献传递
- 胶质源性神经生长因子在人胚胎神经干细胞中的表达调控被引量：1
- 2012年
- 胶质源性神经生长因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF)对帕金森病等神经退行性疾病的治疗有广泛的应用前景,而人胚胎神经干细胞已被证实是一种将GDNF安全而有效地携带到受损脑区的良好细胞载体.本研究利用含有GDNF基因的可调控慢病毒载体转染人胚胎神经干细胞,实现了GDNF在人胚胎神经干细胞在体外培养条件下的表达调控.实验中首先利用含有GDNF基因的慢病毒载体成功转染人胚胎神经干细胞,其中GDNF基因受四环素操纵子7(tetracy cline operator7,tetO7)调控,由延长因子1(elongation factor1,EF1-)驱动;转染后的神经干细胞经过潮霉素筛选后同时转入对下游基因起抑制作用的慢病毒载体TTS(tetra-cycline repressorfusi onprotein,TTS),TTS蛋白表达后可与tetO7相互作用抑制GDNF在人神经干细胞中的表达.当加入强力霉素(doxycycline,DOX)后,TTS与tetO7解离,GDNF表达可恢复到未调控前水平.转染GDNF后的人胚胎神经干细胞仍然表达神经干细胞特异性抗原nestin,Sox2;放线菌素D诱导凋亡后,转染GDNF组较正常对照组凋亡细胞比例有显著降低;同时,转染GDNF的神经干细胞分化成神经元的比例有显著提高.利用可调控的慢病毒调控GDNF在人胚胎神经干细胞中的表达为GDNF应用于神经退行性疾病的治疗提供了实验数据.
- 王淑艳任萍关云谦邹春林付琳琳张愚
- 关键词：神经干细胞胶质源性神经营养因子慢病毒载体四环素调控
- 慢病毒介导绿色荧光蛋白转染人胚胎干细胞及其培养被引量：8
- 2008年
- 目的稳定培养人胚胎干细胞,并通过慢病毒载体对其进行绿色荧光蛋白标记。方法利用小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层或Matrigel作为基质培养人胚胎干细胞,包装带有GFP序列的慢病毒转染人胚胎干细胞。对转染前后的人胚胎干细胞进行了碱性磷酸酶和SSEA-3免疫组化鉴定。结果在MEF饲养层和Matrigel上均可培养出呈克隆样生长,表达标志抗原的人胚胎干细胞,经慢病毒转染及抗生素筛选后仍可稳定表达GFP。结论成功地培养了人胚胎干细胞系,并进行了GFP标记。
- 李宁朱宝长朱宛宛王淑艳任萍关云谦张愚
- 关键词：人胚胎干细胞绿色荧光蛋白慢病毒
- 脑片培养在神经科学中的应用被引量：4
- 2006年
- 任萍张愚
- 关键词：电生理神经发育
- OTX1基因慢病毒载体的构建及过表达研究被引量：1
- 2007年
- OTX1基因是神经发育调控中关键转录因子之一。实验构建表达OTX1基因慢病毒载体,探讨慢病毒介导OTX1基因体外过表达的可行性。将OTX1基因克隆到慢病毒穿梭质粒DUET101内,构建表达OTX1以及GFP-OTX1基因的慢病毒载体;将pDUET-OTX1、pDUET-GFP-OTX1及pDUET101(空载体对照)质粒分别与慢病毒包装质粒pCMVΔR8.91、pMD.G共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OTX1基因、GFP-OTX1基因的重组慢病毒DUET-OTX1、DUET-GFP-OTX1以及仅携带GFP基因的DUET-GFP;用重组慢病毒分别转导293T细胞、SY5Y细胞、小鼠胚胎干细胞及大鼠胚胎15天皮层神经干细胞,证实慢病毒载体能够将外源基因转导入不同细胞,且转导的OTX1或GFP-OTX1在不同细胞中均仅在细胞核内表达;培养OTX1单克隆抗体细胞,浓缩抗体上清,通过Westernblot以及细胞免疫荧光法证实慢病毒介导的OTX1基因及GFP-OTX1基因转导入293T细胞后的过表达。证实了慢病毒载体是高效的基因转移载体;OTX1作为发育过程中至关重要的转录因子,经过重组慢病毒体外转导后均只在细胞核内表达。
- 任萍王淑艳关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：慢病毒基因表达
- 中小学心理健康测评的新要求与关键工作
- 2023年
- 中小学心理健康测评是掌握学生心理健康动态、衡量心理健康工作质量的必要举措,是“四位一体”学生心理健康工作体系的关键一环。但在当前的中小学生心理健康测评工作中,存在测评内容不够全面、工具选择存在问题、组织过程把控不严、结果应用出现偏差等各环节误区。学校可以从明确测评目的、完善指标框架、改进测评工具、优化测评组织、推动结果应用这五个方面全流程进行提升,从而科学有效地开展心理健康测评工作。
- 任萍
- 免疫磁珠分选去除分化体系中鼠胚胎干细胞的方法
- 本发明公开了一种免疫磁珠分选去除分化体系中胚胎干细胞的方法，属于医学生物技术领域。本发明包括如下步骤：(1)制备单细胞悬液；(2)MACS分离纯化分化细胞：按1∶100的稀释比例加入小鼠抗小鼠SSEA-1IgM抗体，使总...
- 关云谦朱宛宛任萍王淑艳徐艳玲张愚
- 文献传递
- 皮层神经发生的分子调控机制
- 2007年
- 在高等动物神经发育过程中,背侧端脑神经上皮细胞在多种调控基因及环境调控因子的作用下经历了错综复杂的发育事件,逐步形成具有精细的分层结构和高级功能的神经皮层。这些发育中的调控具有严格的时间和区域特性。本文主要就皮层形成中神经干细胞增殖、分化方向及皮层神经元亚型的特化等方面的调控机制予以论述。
- 任萍关云谦徐艳玲张愚
- 关键词：皮层发育神经干细胞
