李刚
- 作品数：133 被引量：355H指数：10
- 供职机构：河北北方学院更多>>
- 发文基金：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学政治法律更多>>
- CPV-2a型犬细小病毒免疫学检测方法的建立及应用
- 王净史利军李刚王鹏张立军魏海龙孙秀芳张德明吴占军邓小军等
- 该项目通过培养CPV-2a型犬细小病毒并纯化，免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，兔血清的抗体效价达1:2×105；免疫Balb/c小鼠制备单克隆抗体，经亚克隆得到1H9、2B5、2B7和2C7共4株单抗。以多抗-抗原-单抗...
- 关键词：
- 关键词：免疫学检测方法
- 犬细小病毒VP2基因的原核表达及纯化被引量：2
- 2009年
- 参照GenBank中犬细小病毒VP2基因序列设计了一对添加EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,对CPV VP2基因进行PCR扩增,克隆至pGM-T载体,获得重组质粒pGM-T-VP2,将重组质粒亚克隆到表达载体pET-32a上,获得表达重组子pET-32a-VP2,经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定后,序列分析确定该重组子YM株VP2基因ORF正确,转化至E.coli Rosetta(DE3)中,获得了基因工程菌株E.coli Rosetta(CVP2),并对重组菌进行了诱导表达,鉴定及纯化。结果表明纯化样品中含有87kDa目的蛋白,Western blot检测发现该蛋白与犬细小病毒多克隆抗体发生反应,出现特异条带。E.coli Rosetta(CVP2)以包涵体形式表达出了CPV-YM株VP2,从而为进一步制备检测抗体效价的胶体金检测试剂盒的开发研究打下了良好的基础。
- 张坤马丽娟李刚黄伟李伟贾凤琴
- 关键词：犬细小病毒原核表达纯化
- 一种用于检测犬、猫的狂犬病毒抗体的胶体金试纸卡及其制备方法和应用
- 本发明涉及一种用于检测犬、猫狂犬病病毒抗体的胶体金试纸卡，通过在硝酸纤维素膜上同时包被狂犬病病毒相关抗原、金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)抗体两个条带，并采用胶体金标记SPA，得到了一种通用型检测试纸卡，应用免疫层析原理检...
- 李刚范晓娟张坤
- 记忆性T细胞亚类的研究进展被引量：2
- 2014年
- T细胞免疫对于调节抗体的生成及清除受感染的细胞均发挥相当重要的作用。记忆性T细胞的特点是在初次免疫反应完成后仍能长期存活,并形成不同的亚类,每一亚类细胞又分为中枢记忆性T细胞和效应记忆性T细胞。这些记忆性T细胞在宿主体内长期存在,当宿主受到再次感染时可提供有效的保护作用。本文结合最新研究进展,对主要的记忆性T细胞(如CD8+和CD4+记忆性细胞)类型及其功能作一综述。
- 史利军袁维峰王净李刚
- 关键词：记忆性T细胞
- 减蛋综合征病毒NE4株全基因组序列测定与分析
- 2010年
- 根据减蛋综合征病毒(EDSV-76)AV-127株的全基因序列(序列号BK000404),用Premier5.0软件设计22对引物,利用PCR方法对EDSV-76病毒NE4株的全基因组进行了分段扩增、克隆和序列测定,并用DNAStar分析软件对各片段的测序结果进行拼接,将该序列与GenBank中已登录的相应序列进行同源性分析,并用六邻体蛋白构建进化树.结果表明:NE4株基因组序列全长33214bp,GC含量为43%,与国际标准株AV-127相比,核苷酸序列同源性为99.6%.碱基的插入或缺失主要在非编码区,在100K蛋白编码区距羧基端1/10处插入了1个碱基C,其ORF编码696个氨基酸,而AV-127株100K蛋白编码709个氨基酸,预计其发挥功能的基团在N端.蛋白同源性分析表明,EDSVNE4株主要蛋白与羊腺病毒OAV(Ovine adenovirusD)、牛腺病毒BAV(Bovine adenovi-rusD)和蛇腺病毒SAV(Snake adenovirus)有较高的同源性,而与禽腺病毒Ⅰ群(CELO)的同源性较低,说明NE4株与禽腺病毒Ⅰ群亲缘关系较远,进化树分析也证实了此特性.
- 董春娜李刚邱文英张坤哈小琴
- 关键词：减蛋综合征病毒基因组同源性
- 高龄患者餐后低血压合并体位性低血压1例
- 2023年
- 1临床资料患者91岁女性,以“血压升高20余年,间断头晕、黑蒙3年,加重半年”为主诉入院。现病史:患者20余年前出现血压升高,血压最高达180/110 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa),曾口服多种药物降压治疗(具体不详),血压控制不佳,且未规律监测。3年前患者无明显诱因出现间断头晕并伴有一过性黑蒙症状,每次持续时间数分钟至1 h不等,发作时无意识不清、抽搐,无大小便失禁,无头痛,无视物旋转、耳鸣耳聋、恶心呕吐等症状。
- 范晨阳李刚
- 关键词：体位性低血压餐后低血压老年高血压
- 狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。
- 宫苗苗曾妮程朝飞李刚
- 关键词：狂犬病病毒基质蛋白原核表达蛋白纯化酶联免疫吸附试验
- SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测水泡性口炎病毒方法的建立被引量：2
- 2022年
- 本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法。通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)和新泽西型水泡性口炎病毒(VSVNJ)的G基因,然后将其连接到克隆载体pMD19-T上,构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-NJG。根据GenBank中VSV-IN和VSV-NJ的G基因保守序列设计引物,利用SYBR GreenⅠ法进行实时荧光定量RT-PCR,建立标准曲线,并进行特异性、敏感性和重复性试验。结果,在拷贝数6.82~6.82×10^(8)copies/μL范围内,C;值与质粒拷贝数的对数值呈良好的线性关系,pMD-VSV-IN-G标准曲线的R;值为0.99812,p MD-VSV-NJ-G标准曲线的R^(2)值为0.99748;检测其他病毒均无特异性扩增曲线,特异性良好。pMD-VSVIN-G的检测灵敏度为6.82 copies/μL,pMD-VSV-NJ-G的检测灵敏度也为6.82 copies/μL,是普通RTPCR方法的10倍。用该方法对实验室保存的VSV-IN和VSV-NJ各5份攻毒小鼠样品进行检测,检测结果与普通RT-PCR检测一致。上述结果表明,本检测方法的建立对快速、灵敏鉴别诊断IN型和NJ型水泡性口炎病毒具有重要的应用价值。
- 李嘉阳赵佳男秦彤季芳李刚王承民
- 《老年高血压的诊断与治疗中国专家共识(2017版)》要点介绍被引量：30
- 2018年
- 我国已步入老龄化社会，高血压是导致心脑血管病的独立危险因素，是老年人致死、致残的重要原因。与中青年患者相比，相同程度的血压升高，老年人发生心脑血管事件的风险显著升高。老年人高血压有着特殊的发病机制、临床表现等，我们应重视群体特征和治疗措施的个体化。
- 李稳李刚
- 关键词：老年高血压老年人高血压独立危险因素心脑血管事件
- 猪圆环病毒2型间接ELISA抗体检测试剂盒的研制及初步应用被引量：7
- 2011年
- 以大肠杆菌原核表达系统表达的猪圆环病毒2型Cap蛋白为抗原,建立猪圆环病毒2型间接ELISA检测方法,优化ELISA反应条件,研制猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒。与商品化试剂盒相比,该检测试剂盒敏感性、特异性和符合率分别为95.12%、92.86%和94.55%;同时与猪圆环病毒1型(PCV1)、猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)等多种病毒阳性血清无交叉反应。试剂盒具有较好的重复性,在-20℃至少可保存1年以上,将其应用于临床血清样品的检测,结果安徽、广东、广西采样猪场的PCV2阳性率分别为100%、48.39%、100%。
- 胡小华李刚史利军张坤贾凤芹
- 关键词：猪圆环病毒2型CAP蛋白间接ELISA抗体检测试剂盒
