李刚
- 作品数：73 被引量：165H指数：8
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自动化与计算机技术更多>>
- 生物素标记文库筛选与cDNA快速终末端扩增技术克隆HRNT-1新基因被引量：8
- 2000年
- 目的：大鼠ZA73基因(GenBank accession number：AF011363)是本实验室从大鼠支气管上皮恶性转化细胞模型中采用mRNA差异显示技术克隆到的EST片段，与支气管上皮细胞恶性转化相关。根据此EST序列，克隆人全长基因。材料与方法：运用生物素标记探针筛选人cDNA文库、将筛选基因进行cDNA快速终末端扩增(Rapid amlification of cDNA ends)，直至获得全长序列。结果：HRNT-1 cDNA总长4256 bp，开放阅读框架2760 bp，5′非编码序列253bp，3′非编码序列1240 bp，已被GenBank收录于Nr数据库中(Accession number：AF223393)。结论：采用生物素标记cDNA文库筛选和cDNA快速终末端扩增相结合的技术是克隆全长cDNA快速而有效的方法，尤其适用于那些长度超过2kb的基因。
- 李刚葛世丽胡迎春吴德昌张开泰
- 关键词：文库筛选CDNA
- Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞系的差异表达蛋白质组分析
- 2008年
- 目的:研究PTEN缺失细胞的蛋白表达规律。方法:用双向电泳技术比较Pten+/+MEFs与Pten-/-MEFs细胞的蛋白表达差异;用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异蛋白进行质谱分析;用肽质量指纹图谱检索数据库对差异蛋白进行鉴定;用Northern印迹和Western印迹验证蛋白的差异表达。结果:与Pten+/+MEFs细胞相比,Pten-/-MEFs细胞有明显的差异性蛋白表达谱,Pten-/-MEFs细胞中表达下降的蛋白有铜锌超氧化物歧化酶、过氧化物氧化还原酶5和6等,表达增加的蛋白有低分子量蛋白酪氨酸磷酸酶和丝切蛋白(coffilin)1。结论:PTEN的缺失引起细胞内多种蛋白表达改变,这些表达改变的蛋白可能与PTEN缺失后细胞癌变相关。
- 段瑞峰傅春玲李刚杨柳胡迎春吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN双向电泳
- α粒子诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化的变化
- 目的：应用甲基化芯片技术,分析α粒子辐射诱发永生化人支气管上皮细胞恶性转化过程中DNA甲基化谱的变化.方法：选用北京博奥生物有限公司的晶芯⑧人DNA甲基化谱检测cDNA芯片,分别提取α粒子诱发永生化人支气管上皮恶性转化细...
- 胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：Α粒子恶性转化BEP2D细胞
- Smad7基因沉默对细胞增殖的影响
- 目的:Smads蛋白家族在转化生长因子β(transforming growth factor-βs,TGF-βs)家族信号通路中发挥不同的作用,参与调控细胞的增殖、转化和凋亡。其中,Smad7具有与其它信号分子不同的负...
- 霍艳英王莹张开泰王莉项晓琼胡迎春徐勤枝李刚米粲吴德昌
- 文献传递
- Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨被引量：8
- 2004年
- 目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c myc顺式增强子元件pMyc SEAP共转染 ,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT PCR方法 ,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2细胞内c myc、p15、p2 1表达水平的变化 ,调查Smad7基因对TGF β介导的抗增殖基因反应的调控。 结果 报告基因检测结果表明 ,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c myc顺式增强子元件活性增强。RT PCR结果表明 ,在稳定转染Smad7基因的细胞中 ,c myc表达上调 ,p15表达降低 ,对TGF β刺激的应答丧失 ,p2 1表达降低。 结论Smad7基因可通过调控TGF β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长。
- 霍艳英张开泰李邦印徐勤枝段瑞峰胡迎春项晓琼李刚吴德昌
- 关键词：SMAD7基因P21表达人支气管上皮细胞系稳定转染
- 基因芯片技术分析siRNA抑制多效生长因子表达后Pten^(-/-)MEF241细胞基因表达谱的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化。方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组)。差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5。部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证。结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个。其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等。RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合。结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础。
- 胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：寡核苷酸序列分析基因表达逆转录聚合酶链反应
- Pten缺失小鼠胚胎成纤维细胞中活性氧和氧化损伤水平的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究Pten缺失后小鼠胚胎成纤维细胞抗氧化能力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、脂质以及DNA氧化损伤水平的变化。方法:采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力检测、ROS荧光发光分析、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测和.γ-H2AX免疫荧光染色技术,分别比较Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞SOD活力、ROS、MDA和γ-H2AX水平的差异。结果:Pten^(-/-)MEFs细胞中SOD活力明显减弱,ROS、MDA和γ-H2AX水平均显著增高。结论:Pten可能通过调控细胞抗氧化能力影响ROS水平,从而拮抗脂质和DNA氧化损伤以及由此产生的染色体不稳定性。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN活性氧染色体缺失脂质过氧化作用DNA氧化损伤成纤维细胞
- 伯氏疟原虫抗本芴醇株抗性转化相关基因的克隆
- 2001年
- 目的 :研究药物敏感虫株伯氏疟原虫K173株及其在本芴醇压力下产生的本芴醇抗性株之间基因表达的差异状况 ,克隆抗性相关基因。方法 :采用mRNA差异显示技术寻找相关基因 ,并用Northern杂交证实。结果 :采用 2 4种引物组合进行mRNA差异显示 ,克隆到 30余个差异表达基因片段 ,对其中 8个进行了Northern杂交鉴定及测序。结果表明 ,与敏感株相比 ,克隆CB52在本芴醇抗性株中表达明显增多 ,而在氯喹抗性株中的表达有所减少 ,说明克隆CB52确与本芴醇抗性相关 ,序列同源性检索表明CB52序列与恶性疟原虫环亲蛋白基因有微弱同源性。向GenBank登录 8条新基因序列。结论 :克隆CB52基因表达水平的改变与伯氏疟原虫本芴醇抗性的产生相关 。
- 魏晓莉李刚李国福赵京花吴德昌时云林
- 关键词：伯氏疟原虫本芴醇氯喹基因表达抗药性
- Smad7对Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用被引量：11
- 2005年
- 研究人永生化支气管上皮BEP2D细胞中,作为Smad蛋白家族的抑制分子,Smad7对TGF-β信号通路中Smad2、Smad3、Smad4核转位的抑制作用。培养BEP2D细胞,瞬时转染Smad7真核表达载体pCISmad7.neo,TGF-β刺激,提取细胞核蛋白及总蛋白,用Westernblot方法比较瞬时转染Smad7基因前后细胞核中Smad2、Smad3、Smad4蛋白表达的差异。结果,Smad3在TGF-b作用下有明显的核转位;转染Smad7后Smad3、Smad4的核转位显著受到抑制。表明在BEP2D细胞中,Smad7对TGF-β/Smads信号通路的拮抗作用主要通过抑制Smad3的活化、Smad3/Smad4异源复合物的形成及核转位,从而拮抗TGF-β对细胞的生长抑制效应。
- 王莉霍艳英张开泰王莹项晓琼胡迎春余刚李刚米粲吴德昌
- 关键词：SMAD7SMAD2SMAD3SMAD4核转位支气管上皮细胞
- 乳腺癌组织中PTEN的表达及其临床意义被引量：7
- 2006年
- 目的研究肿瘤抑制基因PTEN在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化染色检测146例乳腺癌组织和10例乳腺癌癌旁正常组织PTEN蛋白的表达情况。结果10例乳腺癌癌旁正常组织均有PTEN表达,免疫组化染色较强PTEN表达于乳腺小叶腺泡上皮细胞及导管上皮细胞的胞质和胞核。146例乳腺癌组织的PTEN阳性表达率为57·5%(84/146)PTEN蛋白表达于癌细胞的胞质和胞核,PTEN表达与乳腺癌原发肿瘤的大小、病理分期以及雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)有关,PTEN高表达的乳腺癌患者2年生存情况明显优于低表达者(P<0·05),且ER、PTEN同时表达的乳腺癌患者2年无病生存率高于其中之一未表达或均未表达者(P<0·05)。结论乳腺癌组织中存在肿瘤抑制基因PTEN的表达缺失或减弱,可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关。
- 张宏艳宋三泰江泽飞郑晓玲黄焰李刚
- 关键词：乳腺肿瘤免疫组织化学
