吴德昌
- 作品数：161 被引量：446H指数：11
- 供职机构：军事医学科学院放射与辐射医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学环境科学与工程核科学技术更多>>
- 永生化人支气管上皮细胞中TGF-β_1对MAPK家族ERK通路的活化效应
- 2007年
- 目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)在永生化人支气管上皮细胞BEP2D信号转导中MAPK家族ERK通路的激活情况及其引起的细胞增殖、凋亡和形态学的改变。方法用Western blot方法检测TGF-β1对ERK的活化特点;用荧光染料染色分析和流式细胞术检测TGF-β1引起ERK活化时细胞的凋亡变化;用细胞克隆形成率分析TGF-β1引起ERK活化时细胞的增殖情况;观察TGF-β1引起ERK活化时细胞的形态改变。结果TGF-β1可在短时间内激活ERK1/2,1h达峰值,然后逐渐减弱;TGF-β1诱导BEP2D细胞凋亡,抑制其增殖,使其体积和间距增大;用U0126抑制ERK通路,能促进TGF-β1对细胞在凋亡、增殖方面的作用,但抑制其对细胞形态的影响。结论TGF-β1诱导的ERK1/2的磷酸化在调节BEP2D细胞的增殖和凋亡间的平衡方面起着重要作用。
- 苟巧宋博强胡迎春吴德昌霍艳英
- 关键词：人支气管上皮细胞转化生长因子Β
- Smad7基因过表达的促增殖作用机制探讨被引量：8
- 2004年
- 目的 研究Smad7过表达使人支气管上皮细胞系增殖能力增强的机制。方法 用Smad7真核表达载体PCISmad7.neo同携带有报告基因碱性磷酸酶的c myc顺式增强子元件pMyc SEAP共转染 ,检测Smad7基因对增殖信号通路的影响。用RT PCR方法 ,检测稳定转染Smad7基因前后永生化及恶性化的人支气管上皮细胞系BEP2D和BERP35T2细胞内c myc、p15、p2 1表达水平的变化 ,调查Smad7基因对TGF β介导的抗增殖基因反应的调控。 结果 报告基因检测结果表明 ,Smad7基因可使参与增殖信号通路的c myc顺式增强子元件活性增强。RT PCR结果表明 ,在稳定转染Smad7基因的细胞中 ,c myc表达上调 ,p15表达降低 ,对TGF β刺激的应答丧失 ,p2 1表达降低。 结论Smad7基因可通过调控TGF β介导的抗增殖基因应答来影响细胞的生长。
- 霍艳英张开泰李邦印徐勤枝段瑞峰胡迎春项晓琼李刚吴德昌
- 关键词：SMAD7基因P21表达人支气管上皮细胞系稳定转染
- 基因芯片技术分析siRNA抑制多效生长因子表达后Pten^(-/-)MEF241细胞基因表达谱的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:应用基因芯片技术,分析siRNA抑制Pleiotrophin基因表达后,Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化。方法:选用Agilent公司的小鼠oligo芯片,分别提取siRNA抑制Pleiotrophin基因表达前后Pten-/-MEF241细胞的RNA,反转成cDNA,进一步荧光标记后进行芯片杂交,杂交结果经扫描及软件分析,最后Ration值为cy3/cy5(即实验组/对照组)。差异基因筛选标准为正标Ratio(Cy3/Cy5)≥2同时反标Ratio(Cy3/Cy5)≤0.5。部分上调及下调基因的表达水平用RT-PCR及Northern杂交进行了验证。结果:siRNA介导Pleiotrophin基因沉默后,表达上调2倍以上的基因有240个,下调0.5倍以上的基因有129个。其中,上调10倍以上的基因有与DDK综合征相关的Schlafen家族成员Slfn2、3、4,基质蛋白金属酶Mmp3、10、13,白介素IL-1a、IL-f6等;下调5倍以上的基因有钙结合蛋白S100a8、视黄醇结合蛋白Rbp4、二肽酶Dpep1等。RT-PCR及Northern杂交验证结果与芯片结果吻合。结论:应用基因表达谱芯片成功分析了RNAi抑制Pleiotrophin基因表达后Pten-/-MEF241细胞基因表达谱的变化,挑选并鉴定出一批有意义的基因,为后续的深入研究提供了基础。
- 胡迎春周乔丹张博杨柳宋博强李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：寡核苷酸序列分析基因表达逆转录聚合酶链反应
- 伯氏疟原虫抗本芴醇株抗性转化相关基因的克隆
- 2001年
- 目的 :研究药物敏感虫株伯氏疟原虫K173株及其在本芴醇压力下产生的本芴醇抗性株之间基因表达的差异状况 ,克隆抗性相关基因。方法 :采用mRNA差异显示技术寻找相关基因 ,并用Northern杂交证实。结果 :采用 2 4种引物组合进行mRNA差异显示 ,克隆到 30余个差异表达基因片段 ,对其中 8个进行了Northern杂交鉴定及测序。结果表明 ,与敏感株相比 ,克隆CB52在本芴醇抗性株中表达明显增多 ,而在氯喹抗性株中的表达有所减少 ,说明克隆CB52确与本芴醇抗性相关 ,序列同源性检索表明CB52序列与恶性疟原虫环亲蛋白基因有微弱同源性。向GenBank登录 8条新基因序列。结论 :克隆CB52基因表达水平的改变与伯氏疟原虫本芴醇抗性的产生相关 。
- 魏晓莉李刚李国福赵京花吴德昌时云林
- 关键词：伯氏疟原虫本芴醇氯喹基因表达抗药性
- Pten缺失小鼠胚胎成纤维细胞中活性氧和氧化损伤水平的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究Pten缺失后小鼠胚胎成纤维细胞抗氧化能力、细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、脂质以及DNA氧化损伤水平的变化。方法:采用超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力检测、ROS荧光发光分析、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量检测和.γ-H2AX免疫荧光染色技术,分别比较Pten^(+/+)MEFs与Pten^(-/-)MEFs细胞SOD活力、ROS、MDA和γ-H2AX水平的差异。结果:Pten^(-/-)MEFs细胞中SOD活力明显减弱,ROS、MDA和γ-H2AX水平均显著增高。结论:Pten可能通过调控细胞抗氧化能力影响ROS水平,从而拮抗脂质和DNA氧化损伤以及由此产生的染色体不稳定性。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN活性氧染色体缺失脂质过氧化作用DNA氧化损伤成纤维细胞
- Pten基因对小鼠胚胎成纤维细胞中Cu／Zn-SOD基因表达的调控被引量：2
- 2009年
- 目的研究Pten基因对抗氧化蛋白Cu/Zn-SOD基因表达的调控,初步探索其调控机制。方法运用North-ern blot比较Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中基础Cu/Zn-SOD mRNA表达差异,以及0.1mmol/LH2O2诱导后Pten+/+ MEFs与Pten-/- MEFs细胞中Cu/Zn-SOD mRNA表达差异;运用Western blot分析PI3K/AKT通路抑制剂LY294002作用Pten-/- MEFs细胞不同时间(30min,1、2、6、24h)后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,磷酸化AKT及Cu/Zn-SOD蛋白表达变化;利用Northern blot分析LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min,1、2、6、24h后,与空白Pten-/- MEFs细胞相比,Cu/Zn-SOD mRNA表达变化。结果Pten-/- MEFs细胞中,基础Cu/Zn-SOD mRNA表达水平降低,H2O2诱导的Cu/Zn-SOD mRNA表达明显受到抑制;在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,AKT磷酸化水平明显降低,2h时基本没有表达;与此对应,在LY294002作用Pten-/- MEFs细胞30min时,Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA表达均增强,并持续增强至24h。结论小鼠胚胎成纤维细胞中,Pten基因可通过拮抗PI3K/AKT信号通路调控Cu/Zn-SOD蛋白及mRNA的表达。
- 苟巧米粲胡迎春李刚吴德昌霍艳英
- 关键词：PTEN超氧化物歧化酶AKT信号通路
- 环境毒理学的现状及展望被引量：2
- 2000年
- 吴德昌
- 关键词：环境毒理学环境污染
- 人微丝相关蛋白hHBRK1突变体的亚细胞定位被引量：3
- 2007年
- hHBrk1是本研究室利用抑制性消减杂交手段,从人支气管上皮细胞恶性转化株BERP35中克隆到的差异高表达基因.hHBRK1蛋白家族序列在动、植物界高度保守,含有一个7重复(heptadrepeat,HR)结构域.利用绿色荧光蛋白(GFP)报告系统,发现野生型hHBRK1蛋白在胞浆中弥散分布,在细胞运动前沿富集,与细胞片状伪足的微丝共定位.hHBRK1-R54和hHBRK1-S56G57蛋白在胞浆弥散分布,但失去了在细胞运动前沿富集的特征.hHBRK1ΔN(1-45)在细胞内弥散分布,而hHBRK1ΔC(46-75)选择性地在高尔基体富集.研究提示,hHBRK1蛋白为微丝相关蛋白,结构的完整性是其发挥功能的前提.hHBRK1蛋白可能通过HR结构域调控微丝聚合,从而参与微丝依赖性的细胞运动或物质运输.
- 徐勤枝丁新民颜贤忠霍艳英隋建丽白贝吴德昌周平坤
- 关键词：肌动蛋白绿色荧光蛋白高尔基体
- 非小细胞肺癌中MTAP与p16纯合缺失与突变分析
- 2007年
- 目的研究非小细胞肺癌中MTAP与p16纯合性缺失与点突变发生频率,探讨MTAP与肺癌的相关性。方法提取44例原发性非小细胞肺癌标本(21例腺癌和23例鳞癌)的基因组DNA;设计MTAP、p16基因外显子及其参照基因MTAP的引物,以基因组DNA为模板,进行PCR扩增,通过SSCP分析基因点突变现象,通过PCR-ELISA分析基因纯合性缺失现象。结果SSCP方法分析发现在44例原发性肺癌标本中,p16和MTAP没有点突变现象;PCR-ELISA分析发现p16基因的纯合性缺失频率为6.8%,MTAP的纯合性缺失频率9.1%,统计学分析表明二基因之间的缺失频率无显著性差异,但二者均与非小细胞肺癌显著相关。结论与p16类似,MTAP纯合性缺失是原发性非小细胞肺癌中发生的重要事件之一,有其肿瘤生物学基础。
- 李邦印张开泰霍艳英胡迎春徐勤枝周平坤吴德昌
- 关键词：MTAPP16非小细胞肺癌纯合性缺失
- 多效生长因子对基质金属蛋白酶3,10的负调控作用被引量：1
- 2008年
- 目的:研究多效生长因子对基质金属蛋白酶(MMP)3、10的负调控作用。方法:用RT-PCR、Northern印迹比较对照与多效生长因子沉默细胞中MMP3、MMP10的表达;在多效生长因子沉默细胞培养液中加入50 ng/mL多效生长因子,检测MMP3、MMP10的表达。结果:多效生长因子缺失细胞中MMP3、MMP10高表达;而在其中添加多效生长因子之后,MMP3、MMP10的表达基本被完全抑制。结论:多效生长因子对MMP3、MMP10有负调控作用。
- 张博胡迎春杨柳李刚李晓兵吴德昌霍艳英
- 关键词：多效生长因子基质金属蛋白酶负调控
