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李华春: 作品数：121 被引量：339H指数：11; 供职机构：云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室更多>>; 发文基金：公益性行业(农业)科研专项云南省应用基础研究基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程化学工程更多>>

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猪繁殖与呼吸综合征病毒通用型实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用被引量：7: 2012年; 根据GenBank登录的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美型毒株和欧洲型毒株N蛋白基因保守序列,设计1对特异性引物和1条探针,以ABI公司PRRSV RNA为标准品,优化了PRRSV实时荧光定量RT-PCR检测方法,25μL反应体系引物prrsv-f/prrsv-r(20μmol/L)各0.5μL,探针prrsv-p(10μmol/L)0.5μL为反应最佳工作浓度,标准曲线Ct值和模板启始浓度的log值之间具有良好的线性相关性。特异性、敏感性和重复性检测结果显示,该方法能特异的检测PRRSV北美型毒株和欧洲型毒株,与其他主要猪病病原检测无交叉反应;针对PRRSV RNA标准品检测,灵敏度可以达到10拷贝;重复性检测Ct值变异系数为0.74%～1.52%。用建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法,对40份临床样品检测,与商品化试剂盒检测结果完全一致。; 宋建领高华峰信爱国李华春; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR

规模猪场仔猪沙门氏菌病的诊断检测被引量：1: 2017年; 2017年4月6日,云南省宣威市某规模化猪场新购进的部分仔猪开始出现呕吐、腹泻症状,接下来的数日发病数量不断增多并出现死亡。死亡仔猪皮肤发绀,解剖可见脾脏肿大呈深蓝色,有出血点,胃黏膜广泛性脱落、胃底部弥漫性出血,肝脏肿大,可见瘀血斑块。截至采集病料送检时,已死亡56头,仍有20多头处于发病状态中。为了尽快对疫情进行确诊,对送检病料进行猪瘟、伪狂犬、猪蓝耳病、猪红斑丹毒丝菌、多杀性巴氏杆菌、刚地弓形虫及猪流行性腹泻RT-PCR/PCR/qRT-PCR检测,同时无菌采集肠系膜淋巴结样品进行致病菌的分离培养及鉴定。最终猪瘟、伪狂犬、猪蓝耳病、猪红斑丹毒丝菌、多杀性巴氏杆菌、刚地弓形虫及猪流行性腹泻检测结果均为阴性,分离获得1株细菌,经细菌形态学分析、昆明小白鼠致病性试验、生化鉴定及16SrRNA序列分析,确诊引起此次疫情的病原体为沙门氏菌属细菌。药敏鉴定结果显示该菌株仅对头孢哌酮、氟甲喹、卡那霉素、奥索利酸、庆大霉素、依氟沙星、安普霉素、呋喃妥因敏感,对其余药物均耐药。笔者及时选用敏感药物对猪群进行预防和治疗,有效控制了死亡率,最大程度地减少了经济损失,并为猪沙门氏菌病的诊断及防治提供参考及借鉴。; 岩锐何于雯郑碧妞王建聂陈建华刘吉锐字品文李华春姚俊; 关键词：规模化猪场仔猪沙门氏菌病确诊

云南省中山病毒的分离鉴定被引量：3: 2020年; 为掌握云南省虫媒病毒的流行情况及基因分型,本试验在云南省师宗、江城和芒市设立监控点,对哨兵动物定期采血来监测其血清转阳情况,将阳性样品在BHK上传代以分离病毒,用RT-PCR及MNT鉴定病毒,通过特异性引物扩增分离毒株的Segment2(Seg-2)及Segment7(Seg-7)基因片段来分析其遗传特性。结果显示,在2014年从师宗监控点分离得到4株帕利亚姆病毒(PALV),经鉴定均为中山病毒(Chuzan virus,CHUV),并掌握了分离株Seg-2及Seg-7基因片段的遗传特征。本试验确认了CHUV在云南省的分离,为进一步掌握CHUV在中国的流行病学、致病性以及疫苗研究奠定良好基础。; 朱沛孟锦昕牛保生姚萍芬杨恒朱建波肖雷李华春

肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立被引量：7: 2014年; 为建立肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR检测方法,根据肺炎克雷伯菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及临床样品的检测,建立了肺炎克雷伯菌TaqMan荧光定量PCR。结果显示,该方法与猪肺炎支原体、猪鼻支原体、臭鼻克雷伯菌、鼻硬结克雷伯菌、多杀性巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽胞杆菌、猪丹毒杆菌、奇异变形杆菌和化脓隐秘杆菌共15种细菌无交叉反应;标准品浓度在2.29×109~2.29×104 copies/μL范围内具有良好的线性关系,最低可检测到2.29×102 copies/μL的标准品阳性质粒;批内和批间变异系数均小于3%。临床样品的检测结果表明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和检测快速的优点,可用于肺炎克雷伯菌感染的早期诊断、样品的快速检测以及肺炎克雷伯菌的定量分析。; 李富祥廖德芳姚俊熊和丽李华春; 关键词：肺炎克雷伯菌 16SRRNA基因

副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：6: 2013年; 根据副猪嗜血杆菌16SrRNA基N的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针，通过反应条件优化和特异性、敏感性、重复性试验以及对临床样品的检测，建立了副猪嗜血杆菌TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果表明，该方法与猪肺炎支原体、巴氏杆菌、链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、乳杆菌、解淀粉芽孢杆菌、奇异变形杆菌以及猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒无交叉反应；标准品浓度在6．92×10^8-6．92×10^3 copies／μL范围内具有良好的线性关系，最低可检测到6．92×10^1copies／μL的标准品阳性质粒；批内和批间变异系数均小于3％。临床样品检测结果表明，该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强和快速的优点，可用于副猪嗜血杆菌感染的早期诊断和流行病学调查以及副猪嗜血杆菌的定量分析。; 李富祥熊和丽姚俊李华春; 关键词：副猪嗜血杆菌 16SRRNA基因流行病学调查

ELISA用于口蹄疫病毒146S抗原快速定量的研究被引量：12: 2008年; 口蹄疫病毒的146S抗原是口蹄疫的主要免疫性抗原,对该抗原进行快速准确的定量对口蹄疫疫苗质量监测、新型疫苗开发和抗原研究有重要的意义。本研究利用酶联免疫吸附实验快速敏感的特性建立了定量146S抗原的检测方法,证明抗原含量和OD值表示的ELISA结果有对数线性关系,相关系数为0.98。实验建立了计算机自动计算程序,可以利用统计学方法快速计算出抗原含量,ELISA进行146S抗原定量的方法使用方便,结果准确,具有较高的实用价值。; 李乐苗海生信爱国廖德芳胡骑李华春; 关键词：口蹄疫 ELISA

口蹄疫疫苗中免疫原含量和中和抗体滴度的关系被引量：2: 2009年; 为了更好的进行口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)疫苗研制,本试验进行了口蹄疫疫苗免疫原含量和免疫效果的关系研究。试验中提取了口蹄疫疫苗中的主要免疫原、沉降系数为146S的口蹄疫完全病毒颗粒,分不同剂量免疫豚鼠,分别采集1次免疫和加强免疫的血清,用细胞微量中和试验检测中和抗体滴度,研究免疫效果。结果表明,当免疫的口蹄疫病毒颗粒含量大于1.5μg时,增加免疫量不能增加中和抗体滴度,当免疫量大于7.5μg时,中和抗体滴度有所下降。该研究结果对于开发口蹄疫疫苗具有指导意义。; 李乐苗海生廖德芳胡骑信爱国朱明旺李华春; 关键词：口蹄疫抗体滴度

蓝舌病Ⅰ型灭活疫苗免疫绵羊后中和试验和cELISA检出抗体的特点与关系被引量：2: 2019年; 为比较蓝舌病病毒(BTV)cELISA和血清中和试验(SNT)检测方法的特点与关系,通过灭活、浓缩,制备抗原含量为1、5、10、50、100μg/mL的BTV-1型灭活疫苗。每个含量为1组,并设对照组,每组6只绵羊,分别在0、3周免疫。每周采血1次,共采血6次。对所采血样分别用cELISA和SNT方法进行抗体检测。cELISA检测结果显示,免疫后第1周,抗体阳性率达到80.00%,第4周全部免疫羊转为抗体阳性,抗体产生较为迅速;SNT检测结果显示,中和抗体阳性率从免疫后第1周的6.67%持续上升至第3周的36.67%,至第4周达到70.00%,中和抗体产生持续而缓慢。随着时间延长,2种检测方法的符合率由23.33%增加到76.67%。当绵羊同时产生中和抗体和cELISA抗体时,中和抗体效价与cELISA抑制率间有显著的线性相关关系(r=0.63),相关方程为y=0.38+0.05χ。分析认为,中和抗体出现的时间之所以晚于cELISA抗体,可能是因为与宿主细胞识别并吸附的主要部位VP7蛋白位于病毒衣壳的中间位置,其主要表面抗原位点暴露需要时间。; 苗海生李乐廖德芳寇美玲孟锦昕杨振兴李华春; 关键词：中和抗体

口蹄疫兔化弱毒疫苗ZB株L蛋白N^2D、M^(143)L和E^(147)G氨基酸突变对病毒毒力影响的研究被引量：1: 2018年; 口蹄疫病毒(FMDV)前导蛋白L^(pro)是病毒的毒力因子之一。前期研究发现,FMDV兔化弱毒疫苗ZB株传代减毒致弱后,前导蛋白L^(pro)内仅存在3个氨基酸点突变(N^2D、M^(143)L和E^(147)G)。为确定这3个突变对病毒生物学特性的影响,本研究利用弱毒疫苗ZB株感染性分子克隆为骨架,构建获得含有这3个氨基酸回复突变的重组病毒r ZBatt-L,并比较其与亲本病毒r ZBatt生物学特性。结果显示,r ZBatt-L和r ZBatt在BHK-21细胞中均可以产生细胞病变效应,形成大小相似的噬斑,而在牛原代肾细胞(BK)中均不产生CPE;二者在BHK-21细胞中的生长曲线与病毒RNA复制动态相似(p>0.05),对乳鼠的致病性也无显著差异;测定了r ZBatt-L和r ZBatt分别感染BK诱导I型干扰素(IFN-α和β)能力,结果显示r ZBatt-L和r ZBatt均可以在感染早期诱导IFN-α表达,而感染晚期抑制IFN-α表达。相对的是,r ZBatt-L和r ZBatt感染细胞后均可以诱导IFN-β含量增加,并且二者诱导IFN-β含量无差异(p>0.05)。结果表明,FMDV弱毒疫苗ZB株L^(pro)蛋白中的N^2D、M^(143)L和E^(147)G突变不改变病毒的生物学特性,对病毒毒力不产生明显的影响。本研究明确了L^(pro)蛋白突变不是ZB株致弱的关键氨基酸位点。; 赵国洪赵国洪李华春何于雯李华春信爱国; 关键词：兔化弱毒疫苗株

国内猪源卡他莫拉菌的首次分离与鉴定被引量：2: 2017年; 2015年1月昆明市郊区某规模化种猪场饲养的后备种猪发生一种以高热,呼吸急促、窘迫,皮肤发绀及猝死为特征的疫情。分离细菌培养后获得1株形态呈双肾形的革兰氏阴性双球菌。经昆明小白鼠致病性实验、本动物回归实验、细菌生化鉴定及16S r RNA和Usp A1基因序列分析显示,该分离菌株为毒力极强的卡他莫拉菌。与卡他莫拉菌参考菌株BBH18株(Gen Bank登录号:NC_014147.1)的16S r RNA和Usp A1基因序列同源性达100%。药敏实验结果显示,该菌株对头孢噻肟高度敏感,对妥布霉素、庆大霉素、头孢曲松、头孢呋辛、头孢他啶、呋喃妥因及四环素中度敏感。猪场选用敏感药物进行紧急预防和治疗,及时有效地控制了本病的扩散及蔓延。; 余桃樱石於友李国华沙丽东刘宁李美荃宋聪杨荣丽李华春姚俊; 关键词：卡他莫拉菌

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