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长双歧杆菌抗毒素基因mazE细菌双杂交诱饵质粒的构建与鉴定: 2016年; 目的构建细菌双杂交系统中的诱饵载体pBT-mazE，为长双歧杆菌的压力调控机制研究奠定基础。方法PCR扩增抗毒素蛋白MazE的编码基因，插入到带有XcI基因的载体pBT构建诱饵质粒pBT-mazE。将pBT-mazE转化至大肠杆菌报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan，检测诱饵蛋白maze-λcI的表达。将pBT-mazE和pTRG空载体共转化报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan，通过3-氨基-1，2，4-三氮唑（3-amino-1，2，4-triazole，3-AT）选择性筛选平板检测诱饵质粒的自激活作用。结果酶切和测序结果显示MazE蛋白编码序列成功克隆入载体pBT，融合区读码框正确。诱饵质粒pBT-mazE能够表达诱饵蛋白maze-λcI。pBT-mazE和pTRG空载体共转化的报告菌株XL-1 BlueMRF’Kan在含有3-AT的选择性筛选平板上无菌落生成，而在no3-AT非选择性筛选平板上生长良好，表明诱饵质粒pBT-mazE在细菌双杂交系统中无自激活作用。结论所构建的诱饵载体pBT-mazE可以用于细菌双杂交的进一步实验。; 李阳杨帆韦艳霞郑葵阳汤仁仙; 关键词：诱饵载体长双歧杆菌

双歧杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统-MazEF的分子进化分析: 2014年; 目的:对双歧杆菌属编码的Ⅱ类毒素-抗毒素(TA)系统MazEF进行分子进化分析。方法:利用PSI-BLAST在NCBI中搜索获得双歧杆菌编码的MazF分子序列,在NCBI蛋白数据库、核酸数据库分别下载其他菌属基因组编码的MazF蛋白序列和本研究所涉及菌属的16 S rRNA序列,应用Clustal X2和MEGA4软件对Maz F做分子进化分析。结果:共搜索到双歧杆菌株染色体编码毒素蛋白MazF 26个。分子进化分析显示:整个双歧杆菌属的MazF保守性不好;MazF与16 S rRNA的共进化仅在个别菌种中发现,大部分MazF的聚类结果与相应菌种16 S rRNA的聚类结果不同。结论:双歧杆菌中的TA系统MazEF可能是通过基因的水平转移整合入基因组中,属于菌株非核心基因组部分。; 韦艳霞刘佃滨郑纪伟尤红娟张鹏李阳汤仁仙; 关键词：毒素-抗毒素系统分子进化双歧杆菌

Nrf2和Trx1在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中表达的初步研究被引量：1: 2014年; 目的分析华支睾吸虫感染小鼠肝脏中Nrf2和Trx1编码基因的表达情况,初步探讨Nrf2及Trx1在华支睾吸虫致病过程中的作用。方法选用健康Balb/c小鼠建立华支睾吸虫感染模型,分别在实验第0、3、5、7、10、14、21、28和35d摘除小鼠眼球采血,分离血清,检测血清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)活性;颈椎脱臼处死小鼠取肝脏,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测肝脏中Nrf2和Trx1的m RNA表达情况。结果与对照组相比,感染组小鼠在感染第5、7、10、14、21和35d血清ALT活性显著升高(P<0.05);分别为(19.9332±1.98180)U/L、(64.3699±14.53874)U/L、(46.7455±6.27572)U/L、(99.0038±25.34329)U/L、(46.7590±8.85478)U/L和(50.3374±14.19886)U/L。感染组小鼠抗氧化应激通路上游基因Nrf2和下游Trx1的m RNA表达升高;其中Nrf2在感染第5天升高显著(P<0.05);Trx1在感染第21d升高显著(P<0.05)。结论 Nrf2和Trx1 m RNA在华支睾吸虫感染过程中表达升高,提示Nrf2/Trx1通路可能在华支睾吸虫致病过程中发挥一定的作用。; 韦艳霞于倩李阳刘宜升王庆苓汤仁仙郑葵阳; 关键词：华支睾吸虫硫氧还蛋白-1 天冬氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶

大肠埃希菌MG1655 Lon蛋白酶编码基因敲除株的构建: 2014年; 目的构建Lon蛋白酶编码基因缺失的大肠埃希菌（E．coli MG1655）菌株。方法PCR扩增基因序列，该序列两端与Lon蛋白酶基因部分序列同源，中间部分为氯霉素抗性基因。电转化法将该片段转入大肠埃希菌MG1655。利用宿主菌-大肠埃希菌MG1655内pKIM6编码的入重组系统，以PCR产物中的氯霉素抗性基因替代靶基因-Lon编码基因。氯霉素抗性平板筛选阳性重组体，琼脂糖凝胶电泳和DNA测序两种方法鉴定lon敲除突变株。结果氯霉素抗性平板成功筛选出重组菌株，基因检测结果表明Lon编码基因被氯霉素抗性基因替代。结论本研究通过该方法成功获得了E．coliMG1655蛋白酶编码基因lon敲除突变株，为探讨大肠埃希菌Lon在牙菌斑形成中的作用奠定了基础。; 韦艳霞李阳刘佃滨; 关键词：基因敲除大肠埃希菌牙菌斑

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李阳