杨小亮
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
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- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国际科技合作与交流专项项目更多>>
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- 绵羊基因组MHCClassⅢ区段部分基因的分离与鉴定
- 2012年
- 绵羊基因组MHC段分为ClassⅠ、ClassⅢ和ClassⅡ(含Ⅱa和Ⅱb两个亚区)3个区段,与另外2个区段相比,ClassⅢ区的基因信息远少于ClassⅠ和ClassⅡ区.为丰富绵羊基因组MHC ClassⅢ区段基因信息.本研究用位于中国美利奴羊基因组BAC文库中MHC ClassⅢ区段4个BAC克隆的酶切片段制备32P标记探针,继而采用噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库,并对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定及生物信息学分析.本实验共筛选出31个cDNA阳性克隆,对其序列进行了测定及分析,确定了序列在ClassⅢ区段上的位置,并通过在NCBI中的同源检索对其功能做了初步鉴定.由实验可知,利用BAC文库与cDNA文库杂交筛选法对较大区段基因的筛选和分离是有效的.同时,对分离到的表达序列结合生物信息学进行分析,这将有助于对该序列功能的深入研究.
- 杨小亮高剑峰白大章邱巍董慧芹李大全陈芳马润林Hugh T Blair
- 关键词：CDNA文库
- 中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区349I12 BAC克隆插入片段基因组成与结构分析被引量：1
- 2011年
- 利用已测序的中国美利奴绵羊细菌人工染色体(BAC)文库MHC区段阳性克隆插入片段制备探针,筛选中国美利奴绵羊(新疆军垦型)混合组织cDNA文库,以期获得该MHC片段的基因组成与结构信息。用中国美利奴绵羊MHC ClassⅡb区域内的349I12 BAC克隆,BsaJⅠ酶切后制备α-32P放射性探针,以噬菌斑原位杂交筛选正常中国美利奴绵羊cDNA文库,并将分离所得的cDNA阳性克隆测序后进行基因结构分析。以349I12 BAC克隆制备探针经过两轮的噬菌斑原位杂交筛选,获得19个cDNA阳性克隆,经测序、比对等进一步分析确定获得17条不同序列,其中7条序列与免疫相关。绵羊20号染色体上的MHC区段包含表达序列,且多为断裂基因,对其基因结构的分析将有助于相应基因功能及调控方面的研究。
- 白大章李桂芳董慧芹邱巍杨小亮陈芳马润林高剑峰
- 关键词：CDNA表达文库
- 中国美利奴细毛羊MHC Class Ⅱa区段的基因组成分析与表达被引量：1
- 2013年
- 为了深入了解绵羊主要组织相容性复合体(MHC)ClassⅡa区段基因组结构,利用已构建的中国美利奴细毛羊细菌人工染色体(BAC)文库和MHC区段高密度物理图谱研究ClassⅡa的基因组成。ClassⅡa亚区包括BAC克隆225J15、283N15和271H22,基因组大小为333 962bp。对ClassⅡa已知的基因座DRB1、DRA、DQB1、DQB2、DQA1和DQA2设计特异性引物,克隆出这6个基因的全长序列。将这6个基因定位在ClassⅡa基因组上,6个基因的基因组长度分别为10.8、3.5、8.7、9.4、3.5和5.7kb。选取编码MHC-Ⅱ类分子α链的DQA1和编码MHC-Ⅱ类分子β链的DRB1进行原核表达,SDS-PAGE检测蛋白质大小分别为28ku和30ku。
- 邱巍杨小亮岳远瑞李涛剧乐乐高剑峰
- 关键词：MHCDRADRB1DQA1DQB1
- 以绵羊MHC区段BAC克隆酶切片段为探针杂交筛选绵羊混合组织cDNA文库
- 2012年
- 在已知中国美利奴羊MHC(Major histocompatibility complex)区段BAC(Bacterial artificial chromosome)克隆序列信息和预测的基因注释前提下,用位于中国美利奴羊基因组BAC文库MHC区段的6个BAC克隆酶切片段为探针,以噬菌斑原位杂交筛选法筛选中国美利奴羊混合组织cDNA文库(库库杂交),对分离到的cDNA阳性克隆进行全序列测定,并与相应的已知序列信息和基因注释的BAC克隆比对以及在NCBI Blastn数据库中序列相似性检索,旨在验证基因注释结果的准确性和对基因(序列)功能的初步分析。实验中,经过两轮杂交共筛选出27个cDNA阳性克隆(序列),并发现这些序列均可定位到相应的BAC克隆上,且25条序列处在注释基因的外显子部分;在NCBI数据库中经Blastn序列相似性检索发现,23条序列与牛基因的序列相似性最高,且与免疫功能密切相关。
- 杨小亮白大章邱巍董慧芹李大全陈芳马润林Hugh T Blair高剑峰
- 关键词：CDNA文库
