王伟强
- 作品数：9 被引量：11H指数：2
- 供职机构：第三军医大学西南医院更多>>
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- PinX1可通过Mad1/c-Myc途径抑制端粒酶活性
- 2009年
- 目的探讨PinX1基因抑制端粒酶活性可能的新机制。方法设计针对靶基因的干扰序列和阴性对照序列,应用脂质体法导入胃癌细胞中,G418筛选出抗性克隆;结合前期已建立稳定表达PinX1基因的细胞系,检测各细胞系中PinX1、Mad1及c-Myc的表达;应用流式细胞技术检测转染入PinX1基因后,胃癌细胞凋亡的改变。结果转染入PinX1基因后,Mad1的水平发生上调性改变;反之,抑制PinX1基因的表达后,Mad1的水平发生下调性改变;而c-Myc的变化与之相反。转染入PinX1基因后,胃癌细胞发生早期凋亡的改变。结论PinX1基因能通过Mad1/c-Myc抑制端粒酶活性。
- 王洪斌汪兴伟孙勇刚王伟强周纲杨仕明房殿春
- 关键词：胃癌细胞端粒酶活性
- 酸对食管鳞状细胞骨形态发生蛋白表达的影响
- 2009年
- 目的探讨酸对食管鳞状细胞骨形态发生蛋白4(BMP4)表达的影响。方法原代培养食管鳞状上皮细胞,采用不同pH值酸处理细胞,RT-PCR、实时荧光定量PCR与蛋白印迹分析方法测定BMP4、细胞内第二信使Smad1表达的变化,然后对其进行相关性分析。结果强酸刺激可明显增强食管鳞状上皮细胞表达BMP4、Smad1。结论酸可能通过促进BMP4及BMP信号通路相关蛋白表达而参与Barrett食管的发生。
- 周钢房殿春孙永刚汪兴伟王洪斌王伟强
- 关键词：骨形态发生蛋白4BARRETT食管
- 食管腺癌组织中核干细胞因子表达的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究核干细胞因子在食管腺癌中的表达情况,探讨其与食管腺癌临床病理的关系。方法应用RT-PCR和West-ern blotting方法检测40例食管腺癌中核干细胞因子的表达情况。结果核干细胞因子阳性表达率在食管腺癌中为95%(38/40),而癌旁组织无核干细胞因子表达,差异有显著性(P<0.05);核干细胞因子阳性表达率与患者年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无关,与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论核干细胞因子在食管腺癌中异常表达,有望为食管腺癌的早期诊断和治疗提供新的手段。
- 孙永刚周钢王伟强杨仕明汪荣泉房殿春
- 关键词：核干细胞因子食管腺癌逆转录-聚合酶链反应
- 程序性细胞死亡因子4RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制
- 2009年
- 背景：程序性细胞死亡因子4（PDCD4）是-种新的抑癌基因，在肿瘤的发生、发展、治疗和预后中起重要作用。目的：探讨PDCD4RNA干扰对胃癌细胞株MKN28凋亡的影响及其调控机制。方法：设计PDCD4短发夹RNA（shRNA）干扰序列，构建干扰质粒并转染MKN28细胞，设立阴性对照组和空白对照组。以蛋白质印迹法检测PDCD4和凋亡相关蛋白FLIP、Caspase-8和Cleaved—Caspase-8的表达，以AnnexinV—FITC／PI双染法检测细胞凋亡。结果：PDCD4shRNA干扰质粒转染MKN28细胞后．获得稳定低表达PDCD4的细胞模型，干扰效率为86％。与阴性对照组和空白对照组相比，干扰组PDCD4蛋白表达显著降低（0．11±0．01对0．86±0．18和0．81±0．12．P〈0．01），MKN28细胞凋亡率亦显著降低（7．13％±0．86％对13．16％±2.35％和12．02％±2．11％，P〈O．05）。与空白对照组相比，干扰组FLIP表达显著增高（1．25±0．34对0．63±0．11，P〈0．01），而Caspase-8和Cleaved—Caspase-8表达显著降低（0．26±0．08对0．76±0．12，0．11±0．03对0．36±0．09，P〈0．01）。结论：干扰PDCD4表达可抑制胃癌细胞MKN28的凋亡，且这种抑制作用可能是由于干扰PDCD4促进抗凋亡蛋白FLIP的表达，从而抑制Caspase-8的活性引起的。
- 王伟强孙永刚王宏斌汪兴伟房殿春
- 关键词：程序性细胞死亡因子4RNA干扰胃肿瘤
- 重组PinX1真核表达载体的构建及其对胃癌MKN28细胞增殖的抑制作用被引量：3
- 2009年
- 目的探讨PinX1基因对胃癌MKN28细胞生长及周期的作用,初步探讨该基因用于胃癌治疗方面的可能性。方法构建重组PinX1真核表达载体,酶切及测序鉴定无误后,应用脂质体转染法转染入胃癌MKN28细胞,建立稳定转染PinX1基因的MKN28细胞系;应用Western blot技术从蛋白水平检测转染前后目标蛋白PinX1的改变;MTT法检测转染前后细胞生长曲线的变化;流式细胞仪检测转染目的基因后细胞生长周期的改变。结果成功构建重组PinX1真核表达载体;建立了稳定转染入PinX1基因的胃癌MKN28细胞系;转染PinX1基因后,胃癌细胞细胞生长明显减缓(P<0.05),增殖变慢(P<0.05),细胞生长阻滞于G0/G1期。结论PinX1基因可抑制胃癌MKN28细胞的生长和增殖。
- 王洪斌王伟强汪兴伟孙勇刚周钢杨仕明房殿春
- 关键词：胃癌细胞增殖
- 脱氧胆酸在酸性环境下促进正常食管鳞状上皮细胞表达BMP4被引量：2
- 2009年
- 背景:骨形态发生蛋白4(BMP4)是Barrett食管(BE)上皮的标记性蛋白,可调节CDX2表达以及促进肠化生,但其在BE中表达上调的机制尚不明脱氧胆酸(DCA)是BE发生的重要环境因素。目的:探讨DCA对正常食管鳞状上皮细胞BMP4及其第二信使Smadl表达的影响方法:培养原代正常食管鳞状上皮细胞,采用不同浓度DCA与pH值酸处理细胞。分别以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和蛋白质印迹法检测BMP4、Smadl mRNA和蛋白表达。结果:DCA在酸性环境下可呈浓度依赖性地增性正常食管鳞状上皮细胞表达BMP4,同时100μmol/L DCA可促进Smadl表达,200μmol/L
- 周钢房殿春汪兴伟孙永刚王洪斌王伟强
- 关键词：脱氧胆酸骨形态发生蛋白质类BARRETT食管
- 实时荧光定量RT-PCR和寡核苷酸芯片方法分析食管腺癌组织中基因的表达
- 2009年
- 目的采用实时荧光定量RT-PCR和寡核苷酸芯片技术分析食管腺癌基因表达的特征。方法应用寡核苷酸芯片筛选6例食管腺癌基因表达谱,实时荧光定量RT-PCR验证其中8个基因的表达变化。结果2倍差异表达基因(DEGs)中,上调基因共212个,下调基因共126个;涉及细胞周期相关基因、信号转导相关基因、血管生成相关基因、细胞增殖相关基因、凋亡抑制基因、抑癌基因、黏附和代谢等。实时荧光定量RT-PCR和寡核苷酸芯片技术对8个基因的检测结果一致,不仅变化方向相同,而且表达值非常接近。结论食管腺癌的发生、发展涉及多基因多步骤,是一个复杂的过程。寡核苷酸芯片和实时荧光定量RT-PCR分析基因表达变化都是可信的,基因芯片筛选基因表达谱具有高通量大规模的特点,而实时荧光定量RT-PCR则适合单个基因表达变化的研究,两者互为补充和印证。
- 汪兴伟徐梅周刚孙永刚王伟强王洪斌赵晶京陈磊房殿春郜恒骏
- 关键词：食管腺癌寡核苷酸芯片基因表达谱
- 程序性细胞死亡4基因在消化系肿瘤中的作用及机制研究进展被引量：1
- 2007年
- 王伟强房殿春
- 关键词：肿瘤消化系
- 程序性细胞死亡因子4过表达对胃癌细胞BGC823凋亡及凋亡调控蛋白的影响被引量：1
- 2009年
- 目的通过稳定转染程序性细胞死亡因子4(programmed cell death 4,PDCD4)基因至胃癌细胞BGC823中,观察过表达PDCD4对BGC823凋亡的作用及对凋亡相关调控蛋白Akt/p-Akt、FLIP、caspase-8及cleaved-caspase-8的影响。方法构建针对人PDCD4的真核表达载体并转染至BGC823细胞,Annexin V-FITC/PI联合流式细胞仪检测细胞凋亡,Western Blot检测蛋白的表达。结果成功构建PDCD4真核表达载体并转染至BGC823中,获得稳定过表达PDCD4的细胞模型,过表达PDCD4的BGC823细胞凋亡率(10.82%±1.29%)较未转染组(5.06%±0.83%)明显升高(P<0.05)。转染PDCD4后,Akt/p-Akt表达(0.25±0.04/0.06±0.01)较未转染组(0.65±0.09/0.18±0.02)明显降低(P<0.01),FLIP蛋白在转染组中的表达(0.12±0.01)较未转染组中的表达(0.48±0.06)明显降低(P<0.01),而转染组caspase-8(0.36±0.07)及cleaved-caspase-8(0.24±0.05)较未转染组caspase-8(0.18±0.04)及cleaved-caspase-8(0.11±0.02)明显升高(P<0.05)。结论PDCD4过表达可促进胃癌细胞BGC823的凋亡,并且抑制Akt和FLIP的表达,从而促进caspase-8的活性。
- 王伟强汪兴伟孙永刚王洪斌房殿春
- 关键词：程序性细胞死亡因子4凋亡胃癌凋亡相关蛋白
