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王海林: 作品数：15 被引量：45H指数：4; 供职机构：中国预防医学科学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家攀登计划更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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丙型肝炎病毒核心蛋白抑制乙型肝炎病毒转录的分子机理被引量：1: 1998年; 为研究丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白抑制乙型肝炎病毒 (HBV)表达的分子机理 ,从HCV和HBV共感染中国病人血清中分离了 5个含HCV 5′非编码区 ( 5′NCR)和核心区 (CR)cDNA序列的克隆 .序列比较和系统发育分析显示 :从共感染病例中分离的HCV序列与其它已发表的从单独HCV感染病例中分离的序列没有显著差异 .共转染实验证实采用从其中 1例共感染病人中分离的核心蛋白cDNA基因所表达的核心蛋白 ,可抑制HBV表面抗原 (HBsAg)和HBVe抗原 (HBeAg)的表达 ,缺失突变分析说明HCV核心蛋白的C端疏水区对这种抑制作用是必需的 ,报道基因产物分析进一步说明了HBVC启动子和增强子Ⅱ是HCV核心蛋白的效应靶序列之一 ,而HCV核心蛋白在肝细胞和非肝细胞中均对HBV和其他细胞和病毒的基因的转录起负调节作用 .因此 ,认为HCV核心蛋白是一种多功能的负调节因子。; 王海林夏宁邵颜子颖侯云德金冬雁; 关键词：丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒核心蛋白基因调节; 全文增补中

丙型肝炎病毒核心区优势抗原表位基因的化学合成及其表达产物的抗原性分析: 1996年; 依据丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）多蛋白核心区Ｎ端氨基酸序列和密码子简并性，人为设计并采用半化学半酶促的方法合成了一个ＤＮＡ片段。经核酸杂交检测以及ＤＮＡ序列分析证实，该片段的核苷酸序列与设计完全一致。将合成的ＤＮＡ片段插入融合表达载体ｐＧＥＸ－２Ｔ中，表达产物经亲和层析纯化后进行Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹实验和间接ＥＬＩＳＡ分析，结果表明，融合蛋白具有ＨＣＶ核心区抗原的免疫反应性，可望用于ＨＣＶ抗体的检测．此外，编码ＨＣＶ优势抗原表位的化学合成基因有可能为ＨＣＶ嵌合抗原的研究提供一条捷径。; 王海林金冬雁颜子颖周园白植生侯云德; 关键词：丙型肝炎病毒抗原合成基因抗原性

一种通过表皮生长因子受体介导的基因转移系统被引量：4: 1998年; 目的发展一种针对表皮生长因子过量表达的肿瘤细胞的基因转移系统。方法人工合成了一种Ｎ端含多个赖氨酸残基，Ｃ端为人表皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合域的３３肽，此合成肽（Ｋ９Ｅ肽）既具有ＤＮＡ结合活性，又能为细胞表面ＥＧＦ受体所识别并内在化。Ｋ９Ｅ肽与萤火虫荧光素酶表达质粒ｐＥＢｌｕｃ按一定比例结合形成核酸复合物，以此为基础，利用受体介导的基因转移技术，组建了外源基因转移系统。结果核酸复合物直接加入于类上皮癌细胞Ａ４３１的培养液中，４８小时后可从细胞裂解液中测出荧光素酶的显著表达。结论该系统可特异性地将外源基因导入ＥＧＦ受体过量表达的肿瘤细胞。; 贡惠宇吴小兵舒跃龙王海林侯云德颜子颖; 关键词：合成肽表皮生长因子受体介导基因转移

丙型肝炎病毒C蛋白和NS3蛋白双表位嵌合型重组抗原的表达被引量：4: 1994年; 应用基因工程技术构建了两种可表达丙型肝炎病毒Ｃ蛋白和ＮＳ３蛋白双表位嵌合抗原Ａ（Ｃ７５－ＮＳ３ａ）和Ｂ（ＮＳ３ａ－Ｃ７５）的质粒，并在大肠杆菌中进行了表达。采用经过盐析和离子交换层析纯化的表达产物进行Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹、抗Ｃ和抗ＮＳ３双抗体夹心ＥＬＩＳＡ试验，并用以检测Ｃ或ＮＳ３表位单特异性血清及系列血清，结果表明Ａ或Ｂ抗原均同时具备Ｃ和ＮＳ３抗原的免疫反应性，而且两种抗原的性能基本相似。在ＨＣＶ抗体检测中这类抗原可望替代配伍的Ｃ＋Ｃ３３ｃ混合抗原。; 王海林金冬雁周园颜子颖侯云德; 关键词：丙型肝炎病毒 C蛋白 NS3蛋白

中国庚型肝炎病毒NS3区部分基因的克隆与基因特点的分析被引量：3: 1996年; 利用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ），从我国一输血后丙型肝炎病人血清中克隆到了庚型肝炎病毒ＮＳ３区的部分基因。经序列分析表明：我国庚型肝炎病毒ＮＳ３区与已知的ＧＢＶ－Ｃ及ＨＧＶ的核苷酸同源性在８１．７—８８．０％之间，而氨基酸同源性均大于９６％，氨基酸序列与ＨＣＶ、ＧＢＶ－Ａ、ＢＧＶ－Ｂ具有一定的结构相似性及数个共有的保守位点。; 谭文杰夏宁邵王海林候云德曾定詹美云; 关键词：庚型肝炎病毒 CDNA克隆病毒

多抗原肽在抗HCV血清学诊断中的应用: 1994年; 应用八分支的多抗原肽（Ｍｕｌｔｉｐｌｃａｎｔｉｇｅｎｉｃｐｅｐｔｉｄｅ，ＭＡＰ）树脂，通过固相肽合成技术，合成一系列源于ＨＣＶ核心蛋白和ＮＳ４蛋白的八分支多抗原肽。经ＥＬＩＳＡ检测表明，八分支多抗原肽具有较强的免疫反应性。与相应的单拷贝寡肽相比较，多抗原肽对弱阳性血清的检出率有所提高。中和ＥＬＩＳＡ试验也表明，多抗原肽与抗体的亲合力及包被效率均优于单拷贝寡肽。多抗原肽不仅可以提高检测的灵敏度和可靠性，而且可以降低抗原的包被浓度，故在抗ＨＣＶ血清学诊断中具有一定的应用优势。; 王海林金冬雁颜子颖周园白植生侯云德; 关键词：丙型肝炎丙型肝炎病毒多抗原肽血清诊断

两例丙型肝炎病毒(HCV)和乙型肝炎病毒(HBV)重叠感染者的HCV核心区cDNA序列分析被引量：3: 1996年; 从临床肝病患者中选择两例ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染者ＨＳＱ和ＳＺＨ，他们血清中的生化指标丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）持续异常，肝活检病理示有严重的肝损伤。在ＡＬＴ异常期，血清学检测结果为ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ阳性，抗ＨＣＶＩｇＧ（包括Ｃ２２、Ｃ３３ｃ）阴性，但套式ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ阳性，核心区ｃＤＮＡ序列分析发现该区有１个密码子（ＧＧＣｎｔ３８５—３８７）缺失，对应缺失的氨基酸是甘氨酸（ＧＬＹ），从血清学检测和序列分析结果推测，在ＨＣＶ和ＨＢＶ重叠感染中，ＨＢＶ和ＨＣＶ均可处于持续复制状态，抗ＨＣＶＩｇＧ抗体阴性可能是ＨＣＶ的多蛋白前体翻译和病毒颗粒装配受到ＨＢＶ干扰的结果。; 王海林夏宁邵洪宁胡黎明郑延硕刘敏金冬雁毕胜利侯云德; 关键词：丙型肝炎病毒乙型肝炎病毒

中国株丙型肝炎病毒(HCV)感染猕猴后5'NTR—C区基因组的cDNA序列分析被引量：5: 1996年; 从用于接种猕猴的受ＨＣＶ感染的２份献血员的血清，第一代猕猴感染ＨＣＶ１１个月的１＃食蟹猴血清和第二代猕猴受第一代猕猴ＨＣＶ血清感染ＨＣＶ３个月后的１４＃恒河猴血清，提取ＫＮＡ，用自行设计的ＨＣＶ５＇非编码区和核心区（５＇ＮＴＲ—Ｃ区）引物进行逆转录ＰＣＲ，将扩增的７７９ｂｐｃＤＮＡ片段克隆到ｐＵＣ１９质粒上；每一株挑３个克隆用双脱氧链终止法测定其序列并矫正偏差。４株ＨＣＶ的５＇ＮＴＲ—Ｃ区序列，原代人Ａ株（ＣＸ１）ｃＤＮＡ全长７７９ｂｐ，原代人Ｂ株（ＣＸ２）ｃＤＮＡ全长７７８ｂｐ，第一代猕猴株（ＣＸ３）ｃＤＮＡ全长７７６ｂｐ，第二代猕猴株（ＣＸ４）ｃＤＮＡ全长均为７７７ｂｐ，ＣＸ１株和ＣＸ４株均在５＇ＮＴＲｎｔ—２１６有—Ｃ的插入，ＣＸ３和ＣＸ４Ｃ区ｎｔ３８５—３８７处的３个硷基缺失；ＣＸ１株与ＣＸ２、ＣＸ３、ＣＸ４比较，同源性分别为９８．０７％。９６．１５％、９５．２５％：ＣＸ２与ＣＸ３、ＣＸ４的同源性分别为９６．２８％、９５．７６％；ＣＸ３与ＣＸ４的同源性为９７．５６％。由克隆的ＨＣＶＣ区ｃＤＮＡ推导的氨基酸序列，从ＨＣＶ的启始密码起，ＣＸ１株、ＣＸ２株序列全长１６８个氨基酸。; 夏宁邵王海林毕胜利洪宁田保平郑延硕刘敏季维智候云德; 关键词：丙型肝炎病毒基因组 CDNA序列分析

利用合成肽进行丙型肝炎病毒（HCV）的线性抗原表位分析被引量：3: 1996年; 首先利用固相多肽合成技术对ＨＣＶ多蛋白中可能含有优势抗原表位的１４个肽段进行了化学合成，并用合成肽作包被抗原进行间接ＥＬＬＳＡ试验来分析它们的抗原性，结果表明，所有合成肽中除ＮＳ３区的Ｐ７、Ｐ８和ＮＳ５区的Ｐ１３无抗原性外，其余肽段均具有抗原活性，其中Ｃ区的Ｐ１，ＮＳ４区和Ｐ９和ＮＳ５区的Ｐ１２三个肽段的抗原性较好，与相应的重组蛋白Ｃ２２，Ｃ１００和ＮＳ５Ａ比较，它们之间的抗原性比较接近，随后选择抗原性较好的几个肽段合成了含八分支的多抗原肽（ＭＡＰ）ＭＰ１、ＭＰ２、ＭＰ３、ＭＰ１０和嵌合多肽ＣＰ１５等工程肽抗原，前者不仅保持了相应单体肽的抗原性，而且与抗体反应的敏感性有显著提高；后者含双表位改善了常规合成肽抗原表位单一的缺陷，为研究ＨＣＶ工程肽抗原进行了有益的尝试。; 王海林颜子颖夏宁邵侯云德金冬雁; 关键词：丙型肝炎

组建重组腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制载体及应用: 能用于组建腺病毒伴随病毒包装系统的自主复制型载体，它是由腺病毒伴随病毒基因组编码所有病毒蛋白基因的191-4484核苷酸序列元件EB病毒质粒型复制子及其反式作用因子、真核细胞抗性选择标志、和带大肠杆菌复制子和氨苄青霉素抗...; 颜子颖侯云德张桐王海林舒跃龙; 文献传递

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