王琳芳
- 作品数：90 被引量：88H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学自然科学总论文化科学更多>>
- 多组学分析发现LAMC2是调节泛癌微环境的关键因子被引量：2
- 2022年
- 目的利用多种数据库对多黏连细胞外基质蛋白LAMC2进行了系统分析,多组学数据证明LAMC2是影响患者肿瘤发生和临床预后的关键分子。方法利用数据库分析了各种肿瘤及正常组织中LAMC2的蛋白质和RNA的表达量。并且比较了不同肿瘤类型间的LAMC2表达量与肿瘤患者生存间的关系,并进行免疫浸润分析;比较了在不同肿瘤类型中LAMC2的表达量与肿瘤微环境免疫浸润的关系。结果通过对LAMC2进行泛癌分析,发现LAMC2的mRNA和蛋白表达在多种肿瘤中表达量高于癌旁组织,并在部分肿瘤中集中表达于恶性肿瘤细胞上。此外,还发现LAMC2的表达不利于泛癌的临床预后,并跟多种肿瘤免疫浸润相关。结论LAMC2是一种重要的致癌基因,可能是有效治疗肿瘤的重要靶点。该结果为后续的分子靶向治疗提供理论依据。
- 苏路瑛黄容邹定峰许富李凯卢艳缪时英王琳芳宋伟
- 关键词：预后分析
- 殷切关怀 诚挚祝福
- 2020年
- 张金哲张金哲郭应禄郭应禄王琳芳汪忠镐
- 人结直肠癌细胞Drosha基因敲除细胞模型的构建
- 2014年
- 目的为研究核酸酶Drosha与结直肠癌的关系,利用腺相关病毒(AAV)介导的染色体同源重组技术,构建Drosha基因敲除的HCT116结直肠癌细胞模型。方法设计引物通过PCR扩增Drosha基因的同源臂,构建Drosha的AAV病毒打靶载体,通过病毒的包装、感染、抗生素新霉素(G418)药物筛选、PCR以及Western blot鉴定获得基因敲除阳性细胞株,通过Cre病毒感染去除抗性基因,最终建立敲除Drosha基因的结直肠癌细胞模型。结果经过两轮打靶,分别将DNA双链上的Drosha基因去除并经Western blot鉴定,获得Drosha-/-阳性的HCT116细胞株。结论通过AAV病毒介导的染色体同源重组技术,成功构建Drosha基因敲除的HCT116细胞系。
- 李芸侨李尚泽宋伟王任先张晓东王琳芳
- 关键词：基因敲除同源重组结直肠癌
- 一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型及其方法
- 本发明公开了一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型及其方法。具体地，本发明公开了一种以RHBDD1为靶点的抗肿瘤药物筛选模型，其包括RHBDD1蛋白或其截短体蛋白、荧光标记的底物短肽、脂质体转染试剂以及模型缓冲液。...
- 宋伟赵宏王晓娟阿曼尼萨·图尔荪托合提杜伯雨缪时英王琳芳
- 文献传递
- 睾丸特异表达蛋白质RNF138的表达纯化及抗体制备
- 2011年
- 目的:制备RNF138的多克隆抗体,为进一步研究其功能奠定基础.方法:通过RT-PCR从小鼠睾丸cDNA文库中扩增mRNF138的开放阅读框,并克隆至原核表达载体pET-30a中;将测序正确的pET-30a(+)/mRNF138重组质粒转化大肠杆菌Rosseta菌株,经IPTG诱导表达后通过镍离子螯合柱(Ni-NTA)亲和纯化得到重组的mRNF138蛋白;用纯化的mRNF138蛋白免疫新西兰大白兔得到多克隆抗体.结果:ELISA检测结果显示,制备抗体的滴度达到1∶32万;Western Blot实验结果显示,所制备抗体不仅能识别原核表达的融合蛋白,也可以有效识别小鼠源的RNF138蛋白.
- 梁俊波程筱雯缪时英王琳芳
- 关键词：基因克隆蛋白表达纯化WESTERNBLOT
- 编码人精子膜蛋白YWK-Ⅱ基因在人睾丸组织表达的研究被引量：4
- 1997年
- 抗人精子膜蛋白的单克隆抗体YWK-Ⅱ,能引起人精子凝集和抑制体外穿卵,并发现在睾丸组织中至少有4种形式的mRNA对应于YWK-Ⅱ抗原,可能是同一基因转录而不同方式剪切的产物.从人睾丸λgt10 5’Stretch cDNA文库中筛选,得到1个4kb大小的cDNA,命名为 C211.在 C211的 5’变异区和 3’相对稳定区中选择了2段.DNA分别作为转录探针的模板,5’端为943 bP和3’端为1.5kb的片段,将以上二个片段与含SP6和T7启动子的PGEM3Z载体进行重组,采用体外转录,地高辛标记的方法,分别合成2,tRNA探针,对人睾丸组织进行原位杂交.人睾丸YWK-ⅡC211基因片段地高辛(Dig)标记的5’端和3’端Antisense cRNA探针均与支持细胞质中的mRNA杂交,证明YWK-Ⅱ抗原蛋白在Sertoli细胞中合成,并又镶嵌在生精细胞膜上,最终定位于精子头部赤道极.
- 吴燕婉宗书东于同德缪时英王琳芳
- 关键词：基因表达睾丸
- 人源Fank1蛋白质FN3结构域多肽的原核表达，纯化及晶体筛选被引量：2
- 2009年
- 目的纯化人源Fank1（fibronectin type Ⅲ and ankyrin repeat domain1）蛋白质N端FN3（fibronectin typeⅢ，Ⅲ型纤黏连蛋白）结构域蛋白，用于晶体生长的三维结构分析。方法将FN3结构域基因片段克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中，将菌落PCR和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21（DE3）后获得表达菌株。该菌株经IPTG诱导高效表达出带有GST标签的可溶性的融合蛋白，经过Glutathione Sepha-rose^TM 4B亲和层析、Hiload16／60 superdex200分子筛层析纯化后，蛋白纯度达到95％以上。结果纯化蛋白采用悬滴气相扩散法得到棒状晶体。结论成功制备了高纯度FN3蛋白，获得FN3蛋白质晶体，为进一步的三维结构解析及Fank1功能研究奠定了基础。
- 黄海涛宋伟缪时英王琳芳
- 关键词：蛋白质纯化晶体生长
- 睾丸高表达蛋白质HSD13调节CHO细胞系周期进程
- 2013年
- 目的研究HSD13蛋白的组织表达定位及其对细胞周期的影响。方法利用王琳芳教授实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD13。通过Northern和Western印迹方法检测HSD13蛋白在不同组织中的表达,并用免疫组化观察其在小鼠睾丸组织中的表达定位。通过构建HSD13过表达的CHO稳定细胞系,用双胸苷阻断法并结合流式细胞术检测对细胞周期的影响。结果电子克隆获得HSD13基因。HSD13蛋白在睾丸组织中高表达,主要定位于生精细胞中的精原细胞和初级精母细胞。成功构建HSD13过表达和对照的CHO稳定细胞系,过表达HSD13蛋白可以显著加快细胞G2/M期进程。结论 HSD13蛋白于睾丸中精子发生早期表达,其过表达能够加速细胞周期进程。
- 宋伟胡廷徽缪时英王琳芳
- 关键词：精子发生细胞周期流式细胞术
- 睾丸高表达蛋白质HSD-14对小鼠精子发生的影响
- 2009年
- 目的研究睾丸高表达基因HSD-14及其编码蛋白质对小鼠精子发生的影响。方法利用本实验室构建的人睾丸特异ESTs文库,通过电子克隆方法获得一新基因命名为HSD-14基因。纯化原核表达的HSD-14蛋白,并制备兔多克隆抗体。通过HE染色观察腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后小鼠睾丸组织的生精变化,并进行TUNEL凋亡检测。结果电子克隆获得HSD-14基因,在原核表达系统中表达成功。小鼠腹腔注射HSD-14纯化蛋白或睾丸曲细精管显微注射HSD-14纯化抗体后,均发现曲细精管中生精细胞大量脱落,生精细胞的层次紊乱,管腔内有时可见成团脱落的生精细胞,附睾中几乎观察不到成熟精子。TUNEL凋亡检测结果表明,抗体注射组小鼠曲细精管中生精细胞(以精母细胞为主)凋亡程度较正常小鼠睾丸和免疫前血清注射组明显,且多数细胞停留在精母细胞甚至精原细胞的阶段。结论HSD-14通过诱导精母细胞凋亡抑制小鼠精子发生。
- 宋伟胡廷徽陈叙缪时英王琳芳
- 关键词：精子发生精母细胞细胞凋亡
- 一种人精子膜蛋白基因的克隆与鉴定
- 1990年
- 应用本实验室制备的抗人精子膜蛋白的单克隆抗体(YWK-Ⅱ),自大鼠睾丸λgtll表达型cDNA库中表位筛选了一个阳性克隆,其插入cDNA长度为1.8kb,命名为RSD-2。RSD-2片段的部分酶谱分析确定该片段具有PstⅠ及BglⅡ的单一酶切位点和PvuⅡ等酶的多个位点。此外,采用RNA-DNA杂交技术还研究了RSD-2片段的种属特异性,表明人及大鼠睾丸间有较高的同源性。
- 缪时英李月华周荔申陈雅娣白云王琳芳严缘昌
- 关键词：CDNA精子膜蛋白单克隆抗体精子
