- 体外研究人LOX-1受体功能的细胞模型建立被引量：3
- 2009年
- 目的研究LOX-1受体在早期动脉粥样硬化中的作用,建立体外LOX-1高表达细胞模型,用于探讨LOX-1与Ox-LDL的相互作用及参与泡沫细胞形成的机制。方法根据人类cDNA文库设计引物,采用巢式PCR技术用人单核细胞转化的巨噬细胞中扩增出LOX-1完整编码区,克隆至pEGFP-C1重组真核表达载体,经测序证实后,用脂质体转染法转染至293T细胞,采用RT-PCR鉴定外源基因的表达,倒置荧光显微镜检测质粒转染效率和融合蛋白的细胞膜上定位情况,流式细胞技术检测EGFP-LOX-1融合蛋白表达情况以及其对Ox-LDL的结合能力。结果pEGFP-LOX-1重建质粒经测序证实克隆的LOX-1序列完整,插入方向正确,转染后实验组LOX-1 mRNA大量表达,融合蛋白正确定位在细胞膜表面,并显示结合配体Dil-Ox-LDL的功能提高到6.3倍。表明所克隆的LOX-1受体具有特异性结合Ox-LDL的功能,从而建立了高表达LOX-1受体的细胞。结论成功克隆人类LOX-1基因,使其在293T细胞中高度表达并获得了相应的功能,为进一步研究LOX-1提供有利工具。
- 徐婷戴亚蕾尹岚杨红田菲陈春霞
- 关键词：LOX-1基因克隆真核表达
- 核糖核酸酶L的功能研究进展被引量：3
- 2007年
- 核糖核酸酶L(ribonuclease L,RNase L)属于2-5腺苷酸(2-′5′oligoadenylate,2-5A)系统,以往研究表明干扰素(interferon,IFN)抗病毒作用以及前列腺癌等多种疾病的发生都与RNase L有关,近期研究表明此酶有诱导凋亡的功能,这一功能是其控制病毒感染以及抵抗肿瘤作用的基础。关于RNase L功能的研究在国外已受到关注,但国内报道尚不多。本文就RNase L的结构及功能作一综述。
- 田菲戴亚蕾
- 关键词：凋亡肿瘤
- 白细胞介素10对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中SR-A表达的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:本研究旨在观察白细胞介素-10(IL-10)对人THP-1源巨噬细胞泡沫化过程中清道夫受体A(SR-A)表达的影响,探讨在动脉粥样硬化形成中IL-10对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导巨噬细胞泡沫化的干预作用。方法:体外建立泡沫细胞培养体系,将细胞分为5组即THP-1单核细胞组,巨噬细胞组,IL-10刺激巨噬细胞组,ox-LDL刺激巨噬细胞组(泡沫细胞组),ox-LDL和IL-10联合刺激巨噬细胞组。采用RT-PCR和Westernbloting分别检测SR-A的mRNA和蛋白表达变化,脂质油红O化学染色方法检测各组细胞脂质摄取量的情况。结果:当THP-1分化为巨噬细胞时,SR-A开始大量表达;IL-10刺激可显著抑制巨噬细胞组SR-A的表达,其mRNA和蛋白分别下降为未刺激前的0.6倍和0.7倍,泡沫细胞形成率也下降为未刺激前的0.6倍。巨噬细胞经ox-LDL刺激形成泡沫细胞时,SR-A的表达进一步升高,其mRNA和蛋白分别增加为巨噬细胞组的1.5倍和1.4倍,泡沫细胞形成率提高为巨噬细胞组的1.7倍。在此过程中加入IL-10联合刺激,观察到SR-A的表达量有显著降低,其mRNA和蛋白均下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.4倍,ox-LDL的摄取量也下降为单用ox-LDL刺激巨噬细胞组的0.3倍。结论:IL-10抑制巨噬细胞SR-A表达,IL-10对ox-LDL诱导巨噬细胞SR-A的表达具明显干预作用。IL-10通过抑制SR-A表达可能在抗动脉粥样硬化的发生中发挥重要作用。
- 杨红戴亚蕾徐婷田菲
- 关键词：白细胞介素10清道夫受体氧化型低密度脂蛋白
- 人清道夫受体SR-AⅠ过表达对293T细胞摄脂和黏附功能的影响
- 2008年
- 目的:构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-SR-AⅠ在293T细胞上获得高表达,并对A类Ⅰ型清道夫受体(SR-AⅠ)相应的功能进行鉴定。方法:依据人A类Ⅰ型清道夫受体基因MSR1的cDNA设计引物,用PCR等分子克隆技术构建重组真核表达载体pEGFP-C1-SR-AⅠ,测序证实后,用脂质体法转染293T细胞。用RT-PCR和Western blotting检测SR-AⅠ受体的表达,脂质油红O化学染色法检测实验组细胞的脂质摄取量的变化,通过细胞黏附性实验检测其黏附性的改变。结果:转染后实验组SR-AⅠmRNA表达及蛋白合成明显高于对照组和空载体组,同时发现泡沫细胞转化率由对照组和空载体组的10%显著增加到实验组的20%,且细胞黏附性也提高2倍以上。结论:成功构建了重组真核表达质粒,并在293T细胞获得了高表达,提高了293T细胞的摄脂能力和黏附性,为进一步研究此受体功能的改变对动脉粥样硬化病理发生过程的影响奠定基础。
- 杨红戴亚蕾徐婷田菲
- 关键词：泡沫细胞
- 清道夫受体SR-AⅡ基因定点突变的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:利用聚合酶链反应技术对清道夫受体SR-AⅡ基因进行定点突变的研究。方法:利用聚合酶链反应定点突变技术,首先设计4条(其中2条包含预定突变位点)引物,通过3轮PCR反应扩增出含有所需突变位点的片段,通过酶切连接方法将其重组到pEGFP-C1中形成pEGFP-SR-AⅡ-335质粒。结果:在真核表达载体pEGFP-SR-AⅡ-335基础上获得了SR-AⅡcDNAA1201G和A1202C的突变体,测序结果表明在序列中发生了预期的突变,使SR-AⅡ受体蛋白第335位的赖氨酸变为丙氨酸。结论:SR-AⅡ定点突变体的构建为进一步的功能研究奠定了基础。
- 杨红陈士超田菲戴亚蕾
- 关键词：受体聚合酶链反应定点突变
