- 一种大肠杆菌表达菌株及用其生产N-乙酰-D-神经氨酸的方法
- 本发明涉及一种基于基因组的酶催化合成N-乙酰-D-神经氨酸的方法。本方法采用的是将分别置于T7强启动子之下的来源于多形拟杆菌VPI-5482基因组中的异构酶基因BT0453和来源于大肠杆菌的醛缩酶基因nanA整合至大肠杆...
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- 基于重组工程法高转化效率的大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株构建被引量：2
- 2015年
- [目的]提高最常用的异源蛋白表达宿主菌E.coli BL21(DE3)的转化效率。[方法]利用基于质粒的重组工程系统和双链断裂修复功能。[结果]敲除了编码降解外源DNA的I型限制性内切酶的hsdR基因,获得了高转化效率以及其他功能与BL21(DE3)仍保持一致的LS1928菌株。[结论]获得的LS1928菌株可能会作为获得催化用酶的关键材料,进而在蛋白质工程等研究领域有着重要的作用。
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- 关键词：基因敲除大肠杆菌BL21(DE3)
- 一种重组工程介导的大肠杆菌基因组点突变的方法
- 本发明涉及一种基于重组工程的大肠杆菌基因组点突变的方法。本方法是先通过重叠－延伸聚合酶链式反应获得一个两端为与靶位点两侧序列一致的各50bp同源臂，中间为突变位点、与靶位点下游序列一致的30bp同源片段、两侧为两个归巢核...
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- 基于基因组的TEV蛋白酶的高表达被引量：1
- 2014年
- TEV蛋白酶由于其高酶切活性、酶切位点的专一性和酶切条件的宽容性而在蛋白分离和蛋白质组学研究等领域有着广泛的应用.目前获得TEV蛋白酶的方法是将克隆在质粒上的TEV基因在大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)中实现过表达.但本方法有一定缺点,如需使用抗生素,这就可能在后续的纯化中引入杂质,菌株群体中不均一性而降低产量等.本研究通过重组工程方法将受T7强启动子驱动的,与麦芽糖结合蛋白MBP融合的TEV蛋白酶基因整合至BL21(DE3)的基因组上进行过表达.MBP-TEV在细胞内自剪切获得分离的TEV.NiNTA亲和层析得到纯化的TEV,产量可达4.2 mg/L.所分离的TEV表达出良好的酶切活性.本菌株有着以之大规模获得TEV的潜力,所建立的通过重组工程将外源基因整合至BL21(DE3)基因组的进行表达的方法也可成为通用的平台技术.
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- 关键词：基于基因组TEV蛋白表达
- 重组工程介导的定点突变方法
- 本发明涉及一种基于重组工程的定点突变的方法。本方法是先通过重叠－延伸聚合酶链式反应获得一个含有与克隆在质粒上的待突变靶位点上游50bp序列一致的左端50bp同源臂、突变位点、靶基因突变位点的下游片段、与质粒所含的抗性基因...
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- 一种高转化效率的大肠杆菌表达菌株
- 本发明涉及一株高转化效率的大肠杆菌表达菌株CGMCCNo.7123。该菌株是将大肠杆菌异源蛋白表达菌株BL21(DE3)基因组中编码I型限制性内切酶的hsdR基因通过重组工程法敲除后而获得。hsdR基因敲除后不携带任何外...
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- 基于染色体的重组工程系统的改进
- 2013年
- 重组工程是指通过重组酶催化DNA之间的同源重组,实现DNA克隆和修饰的一种基因工程技术.本研究从重组酶基因整合至大肠杆菌DH10B所获得的基于染色体的重组工程系统菌株LS-GR出发,利用菌株自身的重组工程系统和双链断裂修复功能,敲除了编码5'->3'单链DNA外切酶的recJ基因和编码3'->5'DNA外切核酸酶的sbcB基因,获得重组效率得以提高的菌株LS2002和LS2004.单链寡核苷酸修复和双链断裂修复实验表明所得菌株较LS-GR的重组效率有明显提高,对需要重组效率高的重组工程实验具有重要的应用价值.
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- 关键词：基因敲除
- 一种重组工程介导的大肠杆菌基因组点突变的方法
- 本发明涉及一种基于重组工程的大肠杆菌基因组点突变的方法。本方法是先通过重叠－延伸聚合酶链式反应获得一个两端为与靶位点两侧序列一致的各50bp同源臂，中间为突变位点、与靶位点下游序列一致的30bp同源片段、两侧为两个归巢核...
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- 一种大肠杆菌表达菌株及用其生产N-乙酰-D-神经氨酸的方法
- 本发明涉及一种基于基因组的酶催化合成N-乙酰-D-神经氨酸的方法。本方法采用的是将分别置于T7强启动子之下的来源于多形拟杆菌VPI-5482基因组中的异构酶基因BT0453和来源于大肠杆菌的醛缩酶基因nanA整合至大肠杆...
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- BL21(DE3)重组工程体系的建立和自剪切系统的探索
- 随着分子生物学的发展，同源重组工程已经成为基因工程实验中常用的技术手段，广泛的应用在大肠杆菌基因组修饰，例如点突变，基因敲除等实验。相对比于传统同源的RecA重组系统，Red同源重组技术具有同源序列短(40-60 bp)...
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- 关键词：同源重组基因敲除
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