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成年转基因小鼠嗅鞘细胞的培养、纯化及生物学特性被引量：3: 2005年; 已有多项研究表明,嗅鞘细胞具有修复中枢及外周神经损伤的潜能。我们选用了表达增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,eGFP)的成年小鼠,分离其双侧嗅球嗅神经纤维层及嗅小球层细胞,体外原代培养并予以纯化。同时结合共聚焦、相差显微镜,细胞增殖分析及免疫组织化学鉴定等技术,对其生物学活性进行研究。结果表明:(1)原代培养转基因成年小鼠嗅球嗅鞘细胞(Olfactoryensheathingcells,OECs)15d后,主要存在两种不同形态和免疫组织化学特征的细胞。一种是带有长突起的双极或多极OECs,表达P75^(NIR)(P75lowaffinityneurotrophicreceptor)S100和胶质原纤维酸性蛋白(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)。另一种则是对Thy1.1抗体免疫反应阳性,呈扁平或内皮样形态的成纤维细胞。(2)根据不同类型细胞在未覆层的培养器皿上贴壁速度的差异,我们建立了一种简单易行、不需任何抗体或昂贵仪器的细胞纯化方法,获得了大量高纯度的OECs。(3)在连续纯化培养22d后,OECs仍能保持较高的增殖活性。本实验支持和丰富了OECs发育的相关理论,为进一步体内移植修复CNS损伤提供了理想的材料。; 王春婷贺诗华杨浩张萍费玲玲游思维鞠躬; 关键词：嗅鞘细胞纯化生物学特性中枢神经系统

一个新的凋亡相关基因APMCF1的克隆及组织分布的初步研究: 目的克隆人类凋亡新基因 APMCF1,制备其特异性多克隆抗体,研究 APMCF1在各种肿瘤和正常组织中的表达。方法利用RT-PCR方法,从人乳腺癌MCF-7凋亡细胞的总RNA中扩增APMCF1的成熟蛋白区段, 克隆入pG...; 晏伟王文亮张萍费玲玲; 关键词：克隆原核表达抗体; 文献传递

一个新的人信号识别微粒受体基因APMCF1的克隆、表达和抗体制备被引量：2: 2003年; 目的 :克隆人类新基因APMCF1 ,原核表达并制备其特异性多克隆抗体 .方法 :运用 5′末端快速扩增方法 ,结合Genbank数据库进行电子拼接 ,完善APMCF1的 5′端序列 ;利用RT PCR方法 ,扩增出APMCF1的蛋白编码cDNA序列 ,克隆入pGEX KG中 ,构建APMCF1的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达后获得了GST APMCF1融合蛋白 ,以此融合蛋白为免疫原制备兔抗血清 ,用Westernblot鉴定抗体特异性 .结果 :通过RACE及电子拼接 ,完善了APMCF1的 5′端序列 ,其cDNA长度为 1 74 5bp,与鼠信号识别微粒受体 β亚基序列同源性较高 ,染色体定位于 3q2 2 .2 ;克隆了APMCF1 81 6bp的开放读框序列并表达了GST APMCF1融合蛋白 .制备了特异性兔抗GST APMCF1多克隆抗体 .结论 :APMCF1可能是编码人类信号识别微粒受体β亚基的基因 .该分子多克隆抗体的初步制备。; 晏伟王文亮张萍费玲玲; 关键词：克隆原核表达多克隆抗体

大鼠Nogo基因片段的克隆及与GST融合蛋白的表达和纯化被引量：4: 2003年; 目的 :获取大鼠Nogo基因片段并高效表达纯化 .方法 :用RT PCR技术 ,从成年SD大鼠脊髓的总RNA中 ,获得编码Nogo基因功能片段的DNA .测序后 ,通过酶切亚克隆至表达载体pGEX 4T 1,构建重组表达载体 ,并导入E .coliDH5α中 ,IPTG诱导表达重组的GST融合蛋白 .对重组融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化 .结果 :获得成年SD大鼠Nogo(5 70～ 6 91和 10 2 8～ 10 89氨基酸残基 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致 .重组GST融合蛋白经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr) 390 0 0和 32 0 0 0处 ,有特异的蛋白条带 .重组蛋白经谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化后 ,得到了高纯度的融合蛋白 .结论 :成功克隆成年大鼠No go基因片段 ,并在E .coliDH5α中高效表达。; 张萍程希平费玲玲王春婷杨浩陈镔复鞠躬; 关键词：NOGO基因克隆纯化

大鼠IL-6受体基因的克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：1: 2002年; 目的　获取大鼠IL 6受体 (IL 6R)的基因并高效表达。方法　用PCR技术 ,从正常成年大鼠脑的cDNA文库中 ,获得编码IL 6R基因的序列。测序后 ,通过PCR扩增和基因重组 ,分别构建IL 6R基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体 ,并导入大肠杆菌DH5α中 ,通过IPTG诱导表达重组融合蛋白。对表达的羧基端序列编码的融合蛋白过谷胱甘肽琼脂糖柱进行纯化。结果　获得正常成年大鼠IL 6R(98～ 1493位 )的基因 ,测序结果与已发表的基因序列相一致。重组蛋白以包涵体的形式进行表达。经SDS PAGE分析 ,在相对分子质量 (Mr)为 740 0 0和 430 0 0处 ,各有 1条特异的蛋白带。对羧基端基因表达的包涵体形式的蛋白进行变性、重折叠及纯化后 ,得到了高纯度融合蛋白。结论　成功地克隆正常成年大鼠IL 6R基因 ,并在E .coliDH5α中高效表达 ,为进一步制备抗IL; 李改丽王百忍张萍费玲玲段晓莉鞠躬; 关键词：大肠杆菌 IL-6受体克隆 PCR技术

COX-2的基因克隆和多克隆抗体制备被引量：8: 2003年; 环氧合酶 2 (COX 2 )是一种具有多种功能的神经调节物质 ,它的许多功能细节仍不十分清楚 ,还需要进一步深入研究 .用PCR技术从大鼠脑cDNA文库中 ,扩增到正常成年大鼠COX 2的cDNA序列 ,测序结果与已发表的序列一致 .通过PCR扩增和基因重组 ,分别构建COX 2编码基因全长和羧基端部分编码序列的表达载体 ,并导入大肠杆菌DH5α中 ,通过IPTG诱导表达重组融合蛋白 ,结果导入全长编码基因表达载体的DH5α无COX 2融合蛋白表达 ,而羧基端部分基因编码的COX 2融合蛋白在DH5α中以包涵体的形式进行表达 .经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析 ,在相对分子质量 (Mr)为 44 0 0 0处有 1条特异的蛋白质条带 .对以包涵体形式表达的蛋白质进行变性、重折叠及纯化后 ,得到了高纯度融合蛋白 .以重组融合蛋白免疫新西兰种大白兔 ,制作了抗COX 2多克隆抗体 ,经酶联免疫吸附测定、蛋白质印迹和免疫细胞化学方法检测 ,此抗体具有较高效价和特异性 .COX 2基因和多克隆抗体的获得 ,为进一步研究COX; 李改丽王百忍费玲玲张萍杨浩鞠躬; 关键词：COX-2 基因克隆多克隆抗体环氧合酶-2 前列腺素第二信使

人PDGF-A基因的克隆、表达及表达产物的纯化被引量：2: 2002年; 目的　克隆血小板衍生的生长因子A链 (PDGF A)的基因 ,并在大肠杆菌中表达。方法　利用RT PCR法 ,从人肝癌细胞系 (HHCC)的总RNA中 ,扩增PDGF A的全长cD NA ,再用PCR法扩增PDGF A成熟蛋白的全长编码序列。编码序列经测序验证后 ,克隆入表达载体pGEX 4T 1中 ,构建PDGF A的原核表达载体 ,在大肠杆菌中诱导表达目的蛋白 ,并进行谷胱甘肽 (GST)亲和层析纯化。结果　以RT PCR扩增的PDGF A基因的全长为 12 5 5bp ,以PCR扩增得到其成熟蛋白的编码序列为 5 31bp。构建了PDGF A基因的原核高效表达载体pGEX PDGF A ,表达产物主要位于包涵体内。对包涵体蛋白进行变性和复性处理后 ,利用亲和层析法获得纯化的目的蛋白。结论　成功地扩增到PDGF A成熟蛋白的编码序列 ,并在大肠杆菌高效表达 ,为进一步对PDGF; 费玲玲张萍黄文晋陈镔复鞠躬; 关键词：PDGF-A 克隆纯化

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费玲玲