郭云兰
- 作品数：8 被引量：5H指数：1
- 供职机构：苏州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响被引量：1
- 2011年
- 目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRNA)真核表达载体pGPU6-Neo-RMPi-484。通过脂质体转染的方法转染到SMMC-7721肝癌细胞中,G418筛选出干扰RMP基因的细胞株;RT-PCR检测RMP基因的表达;流式细胞仪PI染色检测细胞周期;RT-PCR检测周期相关基因的表达。结果:成功构建pGPU6-Neo-RMPi真核表达载体,筛选出稳定干扰细胞株,并且发现干扰RMP基因能够明显引起SMMC-7721肝癌细胞的G2/M期阻滞。结论:干扰RMP基因引起SMMC-7721肝癌细胞G2/M期阻滞,可能是通过下调G2/M期检验点相关基因CyclinB、P21和CDK1的表达实现的。
- 郭云兰杨慧翠连晓宁曹锴王晓婷仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞细胞周期
- RMP基因沉默对肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响被引量：4
- 2010年
- 目的:建立RMP(RPB5-mediating protein)基因沉默的稳定细胞株,研究RMP小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和迁移的抑制作用。方法:首先,体外合成3条RMP基因的siRNA,并转染到SMMC-7721细胞中,RT-PCR检测3条siRNA对RMP基因表达的抑制作用,筛选出最佳干扰序列;然后,pGPU6-Neo-RMP-484真核表达载体转染,G418筛选出稳定干扰RMP基因的细胞株,RT-PCR法检测该稳定细胞株中RMP基因的干扰效率,MTT法检测RMP-siRNA对SMMC-7721细胞增殖及细胞黏附能力的影响,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:利用RNA干扰技术成功建立了RMP基因下调的稳定细胞株,与SMMC-7721细胞对照组比较,其RMP mRNA表达水平下调了(83.67±2.56)%。稳定转染siRNA的细胞株细胞增殖受到抑制,增殖抑制率可达(74.33±0.58)%。稳定转染细胞株的细胞黏附能力有所增加,迁移率则相应降低。结论:成功筛选出了稳定转染RMP-siRNA重组载体的细胞株。pGPU6-Neo-RMP-484重组载体能有效抑制RMP基因在肝癌SMMC-7721细胞内的表达,可作为RMP分子机制研究的细胞模型。RMP基因的下调能有效抑制肝癌细胞SMMC-7721的增殖,使其黏附率增加,同时细胞的迁移率降低。
- 连晓宁杨慧翠曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥
- 关键词：RNA干扰细胞增殖细胞运动
- RMP对肝癌细胞增殖的影响及其分子机制研究
- 目的：
本课题主要研究RMP对肝癌细胞增殖和凋亡的影响极其分子机制。体外实验着重研究RMP基因沉默和过表达对肝癌细胞生长增殖能力、迁移能力、粘附能力、细胞周期以及凋亡的影响及其机制。体内则通过裸鼠皮下荷瘤实验，构建...
- 郭云兰
- 关键词：肝癌细胞周期分子机制基因治疗动物模型
- 文献传递
- RMP基因干扰对肝癌细胞周期的影响
- 目的:建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因干扰的稳定细胞株,研究RMP基因干扰对正常肝细胞及其肝癌细胞周期的影响。方法:构建RMP基因的短发卡RNA(short-hairpin RNA,shRN...
- 郭云兰杨慧翠魏文祥
- 关键词：肝癌细胞细胞周期
- 文献传递
- RMP基因在体内对肝癌细胞株SMMC-7721的生长抑制作用
- 2010年
- 目的探讨RMP基因在体内抑制肿瘤细胞生长的作用及其机制。方法通过体外构建真核表达载体pGPU6-Neo-RMP-484、pFLAG-CMV-4-RMP以及稳定表达细胞株shRNA-SMMC-7721、RMP-SMMC-7721,并测定RMPmRNA表达的变化,荷瘤裸鼠皮下注射各组肝癌细胞,观察移植瘤的大小及病理变化。结果成功构建了真核表达载体及稳定表达细胞系。实验组移植瘤体积、质量、病理及肿瘤相关蛋白的表达量均有明显变化。结论RMP基因在体内能有效地抑制肝癌细胞的生长,为RMP对肝癌的基因治疗/基因干预提供了有价值的靶点及体内分子机制的实验依据,为深入研究奠定了基础。。
- 曹锴杨慧翠连晓宁蒋敬庭盛伟华李敏王晓婷郭云兰魏文祥
- 关键词：SMMC-7721肝癌细胞移植瘤裸鼠
- RMPs iRNA对SMMC-7721肝癌细胞增殖和侵袭迁移能力的影响
- 目的建立RMP(RPB5-Mediating Protein)基因沉默的稳定细胞系,并研究小干扰RNA(siRNA)对SMMC-7721人肝癌细胞RPB5调节蛋白(RMP)表达的抑制作用及抑制癌细胞增殖和侵袭迁移的作用。...
- 杨慧翠连晓宁曹锴李敏盛伟华王晓婷郭云兰魏文祥
- RMP基因的表达及其对肝癌细胞凋亡的影响
- 2011年
- 目的制备RPB5调节蛋白(RMP)抗体并研究RMP在60Coγ射线诱导的SMMC-7721肝癌细胞凋亡过程中的表达及功能。方法 RT-PCR检测HT-29、A549、Hep-2、SGC-7901、293T、HeLa、WI-38和SMMC-7721细胞株中RMP的表达;从质粒中PCR扩增得到人RMP基因并克隆至原核表达载体中,诱导表达后经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-RMP/D1,以该蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体;肝癌细胞SMMC-TT21、PFlaG-CMV4-SMMC-7721、PFlaG-CMV4-RMP-SMMC-7721经6 Gy 60 Coγ射线照射后,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡的变化。结果RMP在以上细胞系中均有表达,但程度不同;SDS-PAGE鉴定示纯化蛋白为目的蛋白人RMP片段。Western blot结果显示,制备的多抗可与RMP蛋白特异性结合;肝癌细胞株经6 Gy 60Coγ射线照射后,流式细胞术结果表明RMP使肝癌细胞SMMC-7721的凋亡减少。结论 RMP在不同细胞株中均有表达且能减少肝癌细胞SMMC-7727的凋亡,为RMP用于肝癌的基因治疗奠定了基础。
- 仲蕾王晓婷郭云兰王琦季辉魏文祥
- 关键词：多克隆抗体凋亡肝癌
- RMP在肝癌细胞基因组稳定性和凋亡中的作用
- 2011年
- 目的:研究RPB5调节蛋白(RMP)在正常肝细胞及肝癌细胞基因组稳定性中的作用,并探讨其与细胞凋亡的相关性。方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从mRNA水平检测正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP的表达。不同剂量60Coγ射线照射肝癌细胞SMMC-7721细胞和正常肝细胞HL-7702细胞,RT-PCR法检测RMP的表达,流式细胞技术检测照射肝癌细胞周期变化及细胞凋亡。应用RNA干扰技术研究RMP在肝癌细胞基因组稳定性中的作用。结果:正常细胞系及多种肿瘤细胞系中RMP基因均有不同程度的表达。经60Coγ射线诱导的肝癌细胞及正常肝细胞RMP表达水平明显升高,且有一定剂量依赖性。随着照射剂量增加细胞凋亡明显增多,细胞周期G1期增高,而S期明显降低。RMP被干扰后,电子显微镜观察细胞形态发生明显改变,p21基因表达减弱。结论:RMP具有维持细胞基因组稳定性的潜在作用。RMP的表达与p53、p21等具有一定相关性,可能与后者协同调节细胞凋亡过程。
- 王晓婷李敏连晓宁杨慧翠曹锴郭云兰仲蕾魏文祥
- 关键词：肝癌细胞RNA干扰放疗基因组稳定性
