钱腾达
- 作品数：10 被引量：24H指数：3
- 供职机构：江苏省人民医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 再程序化星形胶质细胞的制备及体外定向分化为神经元的研究被引量：1
- 2015年
- 目的探讨再程序化星形胶质细胞制备并在体外诱导其分化为神经元。方法在体外培养大鼠脑皮质来源星形胶质细胞(astrocyte),随后将提纯、鉴定过的第三代星形胶质细胞接种于12孔培养皿中,并分为A、B、C 3组。其中A组为带有绿色荧光蛋白(GFP)的慢病毒载体介导neurogenin2(Ngn2)基因转染的星形胶质细胞,制备再程序化星形胶质细胞;B组为带有GFP基因的空载体病毒转染的星形胶质细胞;C组为未进行慢病毒介导基因转染的星形胶质细胞;转基因1周后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15 d,光镜下观察各组细胞形态变化以及定向神经元分化的差异。结果 A组星形胶质细胞转基因后再诱导15 d,很大部分细胞形态呈神经元样改变,胞体呈梭形或椭圆形,有多个突起伸出且突起较长,表达神经元核蛋白(Neu N)、神经丝蛋白(NF)及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的比例大大提高,相比B组及C组,差异有统计学意义(均P<0.05);而B组与C组神经元分化比例的差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢病毒介导Ngn2基因体外转染星形胶质细胞可制备出再程序化星形胶质细胞,诱导后具有更强的向神经元定向分化能力。
- 钱腾达张斌刘彦李立新
- 关键词：星形胶质细胞神经元分化再程序化
- 再程序化脂肪源性干细胞的制备及体外定向分化为神经元的实验研究被引量：1
- 2012年
- 目的制备再程序化脂肪源性干细胞以及探索诱导其定向分化为神经元的方法。方法体外培养脂肪来源干细胞(ADSCs),取纯化、鉴定过的第3代ADSCs接种于24孔板中并分A,B,C三组:A组为带有绿色荧光基因(GFP)的慢病毒载体介导Neurogenin2(Ngn2)基因转染的ADSCs,制备再程序化脂肪干细胞;B组为带有GFP的空载体病毒转染的ADSCs;C组为未进行慢病毒介导基因转染的ADSCs;转基因7d后加入含细胞生长因子诱导培养基诱导分化15d。光镜下观察各组细胞形态变化以及免疫荧光研究各组ADSCs诱导后定向分化为神经元的差异。结果与B组和C组相比,A组ADSCs转基因后再经诱导分化15d后绝大部分细胞类似神经元,胞体呈梭形或椭圆形,有两个或三个突起伸出,细胞表达神经丝蛋白NF、神经元特异性蛋白NeuN及神经元特异性烯醇化酯酶NSE比例大大提高。B组与C组的神经元分化效率,无显著差异,P>0.05。结论慢病毒介导Neurogenin2基因体外转染ADSCs可以制备出再程序化脂肪源性干细胞,诱导后具有更强的定向分化为神经元的能力。
- 钱腾达代学良陆晓诚陶轶李立新
- 关键词：脂肪源性干细胞神经元分化再程序化
- β-七叶皂甙钠对高血压性脑出血患者术后血清AQP-1和AQP-4水平的影响被引量：2
- 2015年
- 目的 探讨高血压性脑出血（HIH）患者术后采用常规治疗结合β-七叶皂甙钠治疗的临床疗效及对血清水通道蛋白1（AQP-1）、水通道蛋白4（AQP-4）的影响作用.方法 将98例HIH脑内血肿清除术后的患者分为观察组和对照组,每组各49例.两组均采用常规疗法,观察组在此基础上加用β-七叶皂甙钠进行辅助治疗,观察两组患者治疗前后不同时间的AQP-1、AQP-4水平变化情况,神经缺损功能评分、日常生活活动能力变化及认知功能的影响.结果 用药前两组患者的脑水肿体积、残留血量值比较差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗72h后观察组患者显著低于对照组（P＜0.05）;观察组的脑水肿持续时间显著短于对照组（P＜0.05）.治疗前两组患者的AQP-1、AQP-4值差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后第7、14、28天两组的AQP-1、AQP-4值较治疗前均呈显著的下降趋势（P＜0.05）,观察组下降更加显著（P＜0.05）.治疗前两组的Barthel指数、NIHSS评分、长谷川痴呆量表评分值差异无统计学意义（P＞0.05）,治疗后第1、2、3个月两组患者的Barthel指数、NIHSS评分、长谷川痴呆量表评分值较治疗前均显著好转,观察组好转较对照组更加显著（P＜0.05）.观察组的有效率93.88％显著高于对照组的79.59％,且差异具有统计学意义（P＜0.05）.结论 高血压脑出血患者术后采用常规治疗结合β-七叶皂甙钠治疗对于改善患者的神经功能缺损症状、提高日常生活活动能力及临床疗效有积极作用.
- 钱春生张斌钱腾达何云文
- 关键词：Β-七叶皂甙钠水通道蛋白4
- 再程序化脂肪干细胞体外定向神经分化效率和机制被引量：4
- 2012年
- 目的探讨再程序化脂肪干细胞（adipose—derived stem cells，ADSCs）体外定向神经分化的效率和机制。方法体外培养大鼠ADSCs并纯化、鉴定，将第3代ADSCs分为三组：未进行慢病毒介导基因转染ADSCs组（空白组）；不含神经元生成素-2（neurogenin-2，Ngn2）基因慢病毒空载体转染ADSCs组（空病毒组）；慢病毒载体介导Ngn2基因转染ADSCs组（Ngn2组）；各组细胞均用含细胞生长因子的诱导培养基诱导15d。免疫荧光检测各组细胞神经元特异性蛋白（NeuN）阳性表达以观察神经元分化效率；Western blot检测各组细胞Mash1、Hes1、Dll1蛋白表达水平的差异，探索分化机制。结果诱导培养基诱导15d后，Ngn2组、空病毒组、空白组阳性表达NeuN分别为90．12％、45．34％、40．26％，各组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。Western blot结果显示，Ngn2组Dll1蛋白表达水平明显高于空病毒组和空白组（P〈0．01），Mashl、Hesl蛋白表达水平明显低于空病毒组和空白组（P〈0．01）；空病毒组和空白组Dll1、Mash1和Hes1蛋白表达差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论再程序化ADSCs诱导后神经元分化的比例较单纯ADSCs提高近99％，再程序化ADSCs定向分化神经元机制可能是通过上调Dll1蛋白水平，同时下调Mash1、Hes1蛋白水平，抑制notch信号通路，从而促进细胞的定向神经分化。
- 钱腾达代学良陆晓诚陶轶李立新
- 关键词：脂肪组织干细胞神经元再程序化
- 新生大鼠原代小胶质细胞分离培养方法的改良
- 2019年
- 目的研究改良体外小胶质细胞分离培养的方法及效果。传统法存在动物用量大、成本高且细胞培养时间长等局限。方法结合消化试剂组合和手摇震荡法培养分离小胶质细胞;同时采用Iba-1免疫荧光法进行细胞鉴定和纯度分析,台盼蓝染料法进行活力检测以及脂多糖刺激比较不同状态的小胶质细胞。结果改良法可在4 d内稳定获得小胶质细胞> 1. 0×10~6个/60 mm培养皿,纯度≥98%,活力> 98%,较传统法在动物用量、总成本和培养时间分别减少了2、3. 2、1. 5倍。结论改良法可减少动物用量、降低成本,缩短细胞培养时间;为研究小胶质细胞的生物学功能和中枢神经系统疾病机制建立了一种稳定、简便、高效的细胞模型。
- 钱凯唐琳俊王希杨坤张开鑫钱腾达马涛石晶李立新
- 关键词：小胶质细胞原代培养新生大鼠
- 血清N-端脑钠肽前体评估颅脑损伤预后的价值被引量：3
- 2017年
- 目的探讨血清N-端脑钠肽前体(NT-proBNP)在颅脑损伤预后评估中的价值。方法选取2013年2月至2015年12月收治的100例颅脑损伤作为观察组,同期健康体检者100例作为对照组;采集入院时清晨空腹静脉血检测血清NT-proBNP水平;绘制受试者工作特征(ROC)曲线判断NT-proBNP在预测颅脑损伤死亡的价值。结果观察组血清NT-proBNP水平[(140.9±53.8)pg/ml]显著地高于对照组[(32.5±19.3)pg/ml;P<0.05].。轻型、中型、重型颅脑损伤病人血清NT-proBNP水平分别为(86.2±31.5)、(145.9±47.2)、(245.9±61.3)pg/ml,两两比较均有统计学差异(P<0.05)。100例颅脑损伤中,死亡24例,病死率为24%;死亡病人血清NT-proBNP水平[(259.3±67.8)pg/ml]显著高于存活病人[(100.4±59.7)pg/ml;P<0.05]。ROC曲线分析表明NT-proBNP判定颅脑损伤死亡的最佳临界值为144.8 pg/ml,灵敏度为81.53%,特异度为91.47%。结论颅脑损伤病人血清NT-proBNP水平显著增高,与损伤程度有一定关系;血清NT-proBNP水平是有效预测颅脑损伤死亡结局的有效指标。
- 钱春生张斌钱腾达何云文李益欢董吉荣
- 关键词：颅脑损伤血清水平预后
- 老年大鼠创伤性脑损伤后血管再生调节因子表达与肠黏膜、肠屏障功能的变化被引量：7
- 2016年
- 目的观察老年大鼠创伤性脑损伤后血管再生调节因子表达与肠黏膜、肠屏障功能的变化。方法选择体重为500~600g,17~20个月月龄的健康老年雄性SD大鼠,制备老年大鼠创伤性脑损伤模型,按损伤时间分为伤后3、12、24、72h和5d,假手术组为对照组,每组10只。记录和比较各组大鼠行为学、脑组织含水量、肠黏膜显微特征、肠屏障功能和脑组织中VEGF和CD34蛋白表达。结果与对照组比较,创伤性颅脑损伤3h^5d,随着损伤时间的延长,大鼠的行为学评分、脑组织含水量、脑组织中VEGF和CD34蛋白表达均明显增高(均P<0.05),肠绒毛高度、绒毛中段直径、隐窝深度和绒毛表面积均明显降低(均P<0.05);肠黏膜绒毛的破坏度明显,绒毛间质疏松,肠绒毛排列不规则甚至断裂,绒毛上皮坏死脱落,变矮,间距增宽,固有层出现不同程度水肿,上述异常在伤后24~72h达到高峰(均P<0.05)。结论密切关注老年大鼠创伤性脑损伤后24~72h的病情转归对降低病残和致死率应有积极意义,增高VEGF和CD34表达,促进血管再生可能是治疗创伤性脑损伤后继发性脑损害的新思路。
- 钱春生张斌钱腾达何云文李益欢董吉荣
- 关键词：老年大鼠肠黏膜肠屏障功能
- ACTH、COR、血糖在评估弥漫性轴索损伤预后中的临床意义被引量：4
- 2016年
- 目的:探讨促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(COR)和血糖对弥漫性轴索损伤(DAI)预后判断的临床意义。方法:选择DAI患者70例,根据头颅MRI显示的病灶范围分为轻型组、中型组和重型组,同时选择体检健康者23例作为对照,观察各组ACTH、COR和血糖变化情况。结果:ACTH、COR和血糖水平DAI轻、中和重型组均明显高于对照组(P<0.05),其中重型组ACTH、COR和血糖水平最高,分别为(8.84±2.67)mmol·L^(-1)、(35.18±12.17)μg·dl^(-1)和(64.28±23.18)pg·ml^(-1),其次为中型组,对照组ACTH、COR和血糖水平最低。DAI患者在治疗后第3天时血糖和ACTH较入院第1天有所降低,COR在治疗后第5天时较入院第1天有所降低,血糖在入院后持续下降(P<0.05)。预后良好者伤后6个月ACTH、COR和血糖水平分别为(31.07±11.17)pg·ml^(-1)、(17.11±8.49)μg·dl^(-1)和(4.67±0.88)mmol·L^(-1),明显低于预后不良者(P<0.05);血糖和ACTH判断预后ROC曲线下面积为0.886和0.861(P<0.05),而COR判断预后ROC曲线下面积为0.638(P>0.05);血糖和ACTH判断预后的截止点分别为5.30 mmol·L^(-1)和36.05 pg·ml^(-1)。结论:监测血清ACTH、COR以及血糖浓度对DAI病情轻重、治疗效果和预后的判断有一定的临床意义,其中血清ACTH和血糖浓度的判断价值较高。
- 张斌钱春生何云文钱腾达
- 关键词：肾上腺皮质激素血糖弥漫性轴索损伤预后
- 皮肤源性再程序化神经干细胞的制备以及定向分化为神经细胞的体外研究被引量：2
- 2011年
- 目的:研究制备皮肤源性再程序化神经干细胞以及诱导其定向分化为神经细胞的可行性。方法:体外培养大鼠皮肤来源前体细胞(skin-derived precursors,SKPs)并纯化、鉴定,用含有绿色荧光蛋白(GFP)基因的慢病毒载体系统作为基因转染工具,将第3代SKPs分3组:A组为慢病毒载体介导neurogenin2(Ngn2)基因转染的SKPs;B组为空载体慢病毒转染的SKPs;C组为未进行慢病毒介导基因转染的SKPs;7天后加入无生长因子含10%胎牛血清的诱导培养基诱导7天。光镜下观察比较各组细胞形态变化以及免疫荧光镜下研究各组SKPs诱导后定向分化为神经细胞的差异。结果:A组SKPs转基因后到第7天绿色荧光达到高峰,并可持续稳定表达绿色荧光至第8代;诱导7天后绝大部分细胞类似神经细胞,胞体呈梭形或椭圆形,有多个突起伸出;免疫荧光结果显示90.98%细胞表达微管相关蛋白-2(MAP-2),62.23%细胞表达神经元特异性蛋白NeuN。B组SKPs在空病毒转染7天以后有绿色荧光;诱导7天以后大多数细胞较诱导前无明显变化;免疫荧光结果显示,有34.35%的细胞表达MAP-2,无神经元特异性蛋白NeuN的表达。C组SKPs无绿色荧光;诱导7天以后大多数细胞较诱导前无明显变化;免疫荧光结果显示,29.54%的细胞表达MAP-2,无神经元特异性蛋白NeuN的表达。结论:慢病毒介导Ngn2基因转染SKPs可以制备出皮肤源性再程序化的神经干细胞,并提高其定向分化为神经细胞的能力。
- 代学良程峰郝怀勇钱腾达李立新
- 关键词：再程序化神经分化
- 再程序化脂肪干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的机制被引量：1
- 2016年
- 目的制备再程序化脂肪干细胞(ADSCs),并在体研究再程序化ADSCs移植入大鼠脊髓损伤模型后促进损伤脊髓神经功能恢复的作用和机制。方法体外培养、纯化和鉴定大鼠ADSCs,并利用慢病毒包装神经元生成素2(Ngn2)基因转染ADSCs制备再程序化干细胞。体内实验将48只雌性SD大鼠随机分成3组:SCI对照(A)组、单纯ADSCs移植(B)组和Ngn2-ADSCs移植(C)组。采用BBB评分评价大鼠运动功能,并通过HE染色、免疫组化和免疫荧光等方法检测脊髓组织学改变和相关蛋白的表达水平,进而观察实验动物脊髓功能恢复情况。结果 Ngn2-ADSCs移植组在运动功能评分、胶质瘢痕的形成、脊髓损伤后病理变化和分泌神经营养因子BDNF和VEGF蛋白含量明显优于其他组。结论 Ngn2-ADSCs移植后能有效地存活,并分化为神经细胞,抑制胶质瘢痕形成,减小脊髓损伤空洞,增加BDNF和VEGF表达,最终促进SCI大鼠的运动功能恢复,较单纯应用ADSCs能更好地促进SCI修复。
- 唐琳俊葛林波吴卫军钱腾达王希张开鑫李立新
- 关键词：脂肪干细胞脊髓损伤细胞移植
