韩会峰
- 作品数：12 被引量：12H指数：2
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- RNAi技术沉默PTHrP基因的表达诱导软骨肉瘤细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2008年
- 目的研究甲状旁腺相关蛋白(parathyroid hormone-related protein,PTHrP)对软骨肉瘤细胞增殖的影响。方法本实验设置空白对照组、空质粒组和siPTHrP转染组,每组样本数均为6。空白对照组不做处理;分别将空质粒pSilencer3.1H1neo(空质粒组)和重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP(siPTHrP转染组)转染至SW1353软骨肉瘤细胞株,通过MTT法检测各组细胞活力并绘制细胞生长曲线,利用流式细胞技术测定细胞凋亡率,半定量RT-PCR和Western blotting法检测PTHrP基因在mRNA水平及蛋白水平表达上的变化。结果siPTHrP转染组的细胞生长较空白对照组软骨肉瘤细胞明显缓慢;siPTHrP转染组细胞凋亡率明显升高;重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP能明显抑制软骨肉瘤细胞的PTHrP基因在mRNA转录水平和蛋白水平上的表达。结论重组质粒pSilencer3.1H1neo-siPTHrP可明显抑制软骨肉瘤细胞增殖及其内源基因PTHrP在mRNA转录水平和蛋白水平的表达,为PTHrP介导的软骨肉瘤基因沉默疗法提供了理论基础。
- 韩会峰许铁裴冬生秦宏敏
- 关键词：基因沉默软骨肉瘤细胞凋亡
- Sox9、siRNA表达载体的构建与鉴定
- 2007年
- 目的构建Sox9siRNA表达载体,分析Sox9在软骨肉瘤中的作用机制。方法根据KouI,IkegawaS提供的Sox9mRNA序列,设计并合成两端含有酶切位点的64个碱基的寡核苷酸链。寡核苷酸链退火后用T4DNA连接酶连接到线性化的pSilencer质粒中,并对重组质粒(命名为pSilencer/Sox9siRNA)进行酶切及测序鉴定。结果双酶切证实Sox9siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建Sox9siRNA表达载体。
- 彭易根秦宏敏许铁胡书群韩会峰
- 关键词：质粒
- 软骨肉瘤相关基因Sox9(siRNA)表达质粒的构建鉴定以及对肿瘤细胞生长和凋亡的影响被引量：5
- 2008年
- 目的:利用小干扰阻断目的基因的原理将构建的目的基因Sox9的pSilencer3,1-H1 neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94,观察目的基因被阻断后肿瘤细胞目的基因的表达、肿瘤细胞生长和凋亡所受到的影响。方法:设计并合成Sox9(siRNA),鉴定后将其转染HTB-94肿瘤细胞,观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达的变化,以及被转染肿瘤细胞的生长曲线和肿瘤细胞凋亡的情况。结果:Sox9(siRNA)的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,被转染的HTB-94Sox9基因的mRNA的表达量下降了35.4%,蛋白的表达量下降了31.3%;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞24h和96h的光吸收值分别为0.146±0.037和0.412±0.036,而正常对照细胞组两个同样时间段的光吸收值分别为0.152±0.0367和0.607±0.029。其中细胞生长增殖速度的差异为32.0%,肿瘤细胞的生长明显受到抑制;Sox9(siRNA)转染HTB-94细胞的干扰组细胞凋亡率为39.2%;而未经干扰的HTB-94肿瘤细胞的细胞凋亡率为0.1%。结论:经过设计合成的Sox9(siRNA)表达质粒可以稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞,被Sox9(siRNA)表达质粒转染的人体软骨肉瘤细胞HTB-94肿瘤细胞Sox9基因的mRNA和蛋白的表达都受到抑制,同时肿瘤细胞的生长繁殖也受到明显抑制,肿瘤细胞的凋亡明显增加。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：细胞生长曲线
- 小分子干扰RNA诱导HTB-94软骨肉瘤细胞凋亡的研究被引量：3
- 2008年
- 目的利用小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒转染HTB-94软骨肉瘤细胞，观察其在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中对肿瘤细胞生长的影响。方法设计并合成高泳动家族性别决定基因9（Sox9）siRNA，将其转染HTB-94肿瘤细胞，观察肿瘤细胞的Sox9基因的mRNA和蛋白表达、生长曲线和细胞凋亡情况。结果Sox9siRNA的插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致，Sox9基因的mRNA和蛋白表达降低，HTB-94肿瘤细胞的生长繁殖受到抑制，细胞凋亡增加。结论Sox9siRNA表达质粒可以通过稳定转染HTB-94肿瘤细胞，抑制Sox9基因的mRNA和蛋白的表达，抑制肿瘤细胞的生长繁殖，同时使肿瘤细胞凋亡。
- 秦宏敏韩会峰许铁沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：软骨肉瘤细胞凋亡SOX9MRNA表达
- 超高分子聚乙烯颗粒对体外培养成骨细胞活性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的建立小鼠胚胎成骨细胞和超高分子聚乙烯(UHMWPE)颗粒的体外联合培养的新模型,初步研究超高分子聚乙烯颗粒对成骨细胞活性和核心结合因子α1(Cbfα1)表达的影响。方法分为空白对照组和UH-MWPE颗粒干预组,2组常规培养小鼠胚胎成骨细胞,待细胞贴壁后装满培养基,UHMWPE颗粒干预组加入UH-MWPE颗粒,封闭倒置培养瓶,颗粒漂浮至贴壁细胞层。应用流式细胞技术分析各组细胞早期凋亡情况。分别在共培养的第3、5、7天检测细胞Cbfα1在mRNA和蛋白水平上的表达情况。结果封闭条件下小鼠胚胎成骨细胞正常生长可达10天;UHMWPE颗粒不影响细胞增殖活性,对细胞无明显毒性作用;UHMWPE颗粒干预组的目的基因Cbfα1表达增强。结论超高分子聚乙烯颗粒可以独立、直接影响成骨细胞相关因子的分泌。
- 刘林许铁秦宏敏韩会峰
- 关键词：成骨细胞核心结合因子Α1
- 唑来膦酸对软骨肉瘤细胞生长的影响
- 2008年
- 目的研究探讨第三代双磷酸盐类药物唑来膦酸(ZOL)在体外对人软骨肉瘤细胞株SW1353增殖及凋亡的影响,进一步研究ZOL与甲氨喋呤(MTX)对细胞的生长抑制是否具有协同作用。方法应用细胞计数、形态学观察、流式细胞术等方法,检测和观察分别及联合应用不同浓度ZOL和MTX对SW1353的增殖抑制和诱导凋亡的作用。结果ZOL对SW1353细胞的抑制效应与药物剂量及作用时间均呈正相关;与MTX联合用药,作用明显强于单独用药组,抑制率59.22%(P<0.05),凋亡率28.47%(P<0.05)。结论ZOL对软骨肉瘤SW1353细胞株有生长抑制作用,呈时间、剂量依赖性效应,与MTX联合用药抑制作用更强,有协同作用。
- 郑伟郭开今张子阳韩会峰储朝明郭伟华徐波赵德勇
- 关键词：唑来膦酸MTX凋亡
- PTHrP基因靶向RNA干扰重组表达质粒的构建鉴定以及在HTB-94细胞中的功能检测
- 2008年
- 目的构建针对目的基因PTHrp的pSilencer3.1-H1neo siRNA(small interfering RNA)表达质粒,并在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中观察其干扰效果。方法设计并合成针对PTHrP基因编码区的含有发卡结构的互补的寡核苷酸链,体外退火后克隆入经BamHⅠ,HindⅢ双酶切线性化的干扰载体pSilencerTM3.1H1neo中,对重组质粒进行酶切分析和DNA系列测定。结果双酶切证实PTHrP siRNA表达质粒克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致,同时干扰了PTHrP基因的mRNA和蛋白的表达。结论成功构建的靶向RNA干扰重组表达质粒,可以通过小RNA序列干扰靶向基因的mRNA转录,降低靶向基因在细胞中mRNA和蛋白的表达。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊
- 关键词：RNA干扰
- 人工关节假体无菌性松动的研究进展
- 2008年
- 无菌性松动是目前假体翻修的最主要原因，目前的髋关节翻修手术中有三分之二因为无菌性松动，膝关节翻修中二分之一因为无菌性松动。关于假体无菌性松动的原因有多种假设和学说，但这些假设多数是建立在经验观察，动物实验和临床病例报道等基础上。本文综述了近年来假体无菌性松动的主要学说，由此可以看出假体无菌性松动是有诸多的因素造成，绝不是一个单一的病因学说。
- 秦宏敏葛世荣韩会峰任天成刘洪涛
- 关键词：假体无菌性松动人工关节髋关节翻修病因学说
- 甲状旁腺相关肽小分子干扰RNA诱导HTB-94软骨肉瘤细胞凋亡
- 2008年
- 甲状旁腺相关肽（PTHrP）近年来被证实在人体软骨肉瘤细胞中表达。2006年1月至2007年8月我们将PTHrP小分子干扰RNA（siRNA）表达质粒稳定转染人体软骨肉瘤细胞HTB-94后，观察其对HTB-94细胞中PTHrP蛋白、mRNA、细胞生长曲线以及肿瘤细胞的影响。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：小分子干扰RNA瘤细胞凋亡细胞生长曲线PTHRP
- 软骨肉瘤细胞Caspase-3表达及其与相关基因相互作用的研究被引量：1
- 2008年
- 目的:研究肿瘤基因Caspase-3与PTHrP和Sox9在人体软骨肉瘤细胞HTB-94中的相互作用机制。方法:小干扰siRNA分别阻断PTHrP和Sox9后,检测肿瘤细胞中Caspase-3的mRNA和蛋白表达。结果:PTHrP基因被干扰后,Caspase-3的mRNA表达增加了57.7%,蛋白的表达增加了57.1%;Sox9基因被干扰之后,Caspase-3的mRNA表达增加了47.4%,蛋白的表达增加了48.2%。结论:肿瘤基因Caspase-3在软骨肉瘤细胞中的表达与软骨肉瘤相关基因PTHrP和Sox9有关,可能是位于PTHrP和Sox9的下游基因。
- 秦宏敏韩会峰沙广钊刘林彭易根任天成
- 关键词：软骨肉瘤RNA干扰基因表达
