黄威
- 作品数：9 被引量：14H指数：2
- 供职机构：南方医科大学实验动物中心与比较医学研究所更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广州市重大科技专项计划项目广东省科研条件建设项目更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 西藏小型猪骨髓间充质干细胞分离培养及慢病毒载体介导EGFP标记间充质干细胞
- 2012年
- 目的建立一种简便、有效的西藏小型猪骨髓间充质干细胞（BMSCs）体外分离培养及纯化方法，并基于BMSCs建立慢病毒介导的外源基因EGFP体外投递系统。方法密度梯度离心法分离西藏小型猪BMSCs，差速贴壁法不断纯化，流式细胞仪检测第3代BMSCsCD45、CD90和CD105表达；此外，用携带EGFP基因的慢病毒转染BMSCs以获得EGFP标记的BMSCs，倒置荧光显微镜下观察感染情况及流式细胞术检测感染效率。结果①密度梯度分离法结合差速贴壁法所获得的细胞经鉴定符合MSCs的特性。②借助慢病毒高效率将EGFP导入BMSCs，感染效率为84．1％。结论利用密度梯度分离法结合差速贴壁法可获得高纯度的BMSCs，基于BMSCs建立了慢病毒介导的外源基因体外投递系统。
- 唐华毕文浩艾威李德胜潘光辉史俊文刘薇黄威肖东顾为望
- 关键词：西藏小型猪慢病毒
- 组蛋白脱乙酰化酶4N-末端和C-末端片段的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的在大肠杆菌中分别表达组蛋白脱乙酰化酶4(HDAC4)N-末端(1-1950bp)和C-末端(1708-3255bp)片段与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并进行纯化。方法应用PCR方法扩增HDAC4N-末端和C-末端片段,将目的基因插入GST融合载体pGEX-6P-1中,重组载体在酶切鉴定和序列测定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达GST-HDAC4-N'和GST-HDAC4-C'蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定表达产物后,用谷胱苷肽琼脂糖珠纯化目的蛋白。结果经测序、酶切鉴定证明成功构建了融合蛋白表达质粒,表达出的融合蛋白经SDS-PAGE分析其相对分子量约为110500和93080。Western blotting分析证实融合蛋白可以被HDAC4特异性抗体所识别。结论成功构建了融合表达载体(pGEX-6P-1/HDAC4-N'和pGEX-6P-1/HDAC4-C'),并进行了融合蛋白的诱导表达和鉴定,可以进一步用于HDAC4与其他蛋白质相互作用的研究。
- 杨洋覃小翠刘书虎黄威王雪敏
- 关键词：原核表达融合蛋白
- 腺相关病毒介导的西藏小型猪酪氨酸酶基因打靶的研究
- 研究背景与目的：
小型猪由于它的体型较小、易于抓取固定，便于实验操作，且其解剖结构、生理特性与人类极为相似，猪的食性以及作为人类食物链的一部分，是人类重要的肉质来源等特点，使其应用是生物医药研究中，较少的伦理问题，...
- 黄威
- 关键词：腺相关病毒基因打靶酪氨酸酶转基因育种
- 文献传递
- 3种腺相关病毒介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率被引量：1
- 2012年
- 目的比较3种不同血清型腺相关病毒(AAV)介导的绿色荧光蛋白对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率。方法原代分离培养西藏小型猪胚胎成纤维细胞并进行形态学鉴定,按照感染复数(MOI)为103、104、105转染传代两次的猪胚胎成纤维细胞,流式细胞学检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的转染效率,并在倒置显微镜下观察转染后绿色荧光的表达强度;同时,应用MTT方法检测不同血清型AAV对西藏小型猪胚胎成纤维细胞的毒性。结果腺相关病毒AAV2-EGFP对PFF的转染效率随MOI值的增加而增高,MOI为103、104、105时,转染效率分别为(33.68±1.18)%、(50.80±2.59)%和(60.08±1.08)%,而其他两种血清型病毒感染效率均低于AAV2-EGFP。3种病毒转染PFF过程中,细胞生长正常,MTT显示各个转染组与对照组(未转染组)在D570处吸光度无显著差异。结论AAV2血清型载体对体外培养的猪胚胎成纤维细胞的感染效率显著高于其他几种血清型,AAV8和AAV9对PFF感染能力极差,筛选AAV2作为西藏小型猪基因打靶的最适病毒载体;同时,3类血清型病毒载体对猪胚胎成纤维细胞均无明显细胞毒性。
- 黄威毛莹莹刘薇唐华揭飞龙李红卫顾为望
- 关键词：腺相关病毒西藏小型猪胚胎成纤维细胞绿色荧光蛋白流式细胞技术
- 西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化值的比较
- 目的：比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法：采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果：藏猪与西藏小型猪之间，红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异显着，...
- 岳敏范沛唐华黄威顾为望
- 关键词：西藏小型猪血液生理血液生化指标
- 文献传递
- 西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较被引量：10
- 2011年
- 目的比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果藏猪与西藏小型猪之间,红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异有显著性,谷草转氨酶、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、肌酸激酶指标的测定差异极显著。其中红细胞、白细胞、谷草转氨酶、肌酸激酶的值藏猪高于西藏小型猪,而血小板计数、血清总蛋白、血清清蛋白、葡萄糖、总胆固醇、血清甘油三酯的值藏猪低于西藏小型猪。结论不同的生活环境、气候条件和营养水平会对动物的血液生理、生化值的测定造成一定的影响。
- 岳敏范沛唐华黄威顾为望
- 关键词：藏猪西藏小型猪生理生化指标
- 西藏小型猪与高原藏猪的血液生理生化值的比较
- 目的：比较西藏小型猪与高原藏猪的血液生理、生化指标的差异。方法：采用全自动血液细胞和生化分析仪测定21个血液生理生化指标。结果：藏猪与西藏小型猪之间，红细胞、白细胞、血小板计数、总胆固醇、血清甘油三酯指标的测定差异显著，...
- 岳敏范沛唐华黄威顾为望
- 关键词：西藏小型猪血液生理生化指标
- 西藏小型猪骨髓间充质干细胞(BMSCs)分离培养及慢病毒载体介导EGFP标记MSCs
- 目的 建立一种简便、有效的西藏小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem ceils,BMSCs)体外分离培养及纯化方法,并基于BMSCs建立慢病毒介导的外源基因EGFP体外投递系统...
- 唐华顾为望毕文浩艾威李德胜潘光辉史俊文刘薇黄威肖东
- 关键词：西藏小型猪骨髓间充质干细胞慢病毒增强型绿色荧光蛋白
- 大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的过表达被引量：2
- 2013年
- 目的构建携带大鼠瘦素(leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。方法提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用Spe I和EcoR V双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。结果测序证实瘦素基因与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5×1012vg/mL纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA-Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP感染鼠神经元细胞5d后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。结论成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。
- 裴娜娜吴丽红高永新毛莹莹罗杰黄威刘闻张屹顾为望李红卫
- 关键词：瘦素腺相关病毒载体神经元细胞
