黄庆生
- 作品数：30 被引量：90H指数：6
- 供职机构：第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中国科学院科学基金军队医药卫生科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 逆转录-半套式-聚合酶链反应在乙脑早期诊断中的应用被引量：10
- 1998年
- 目的：为了探讨ＲＴ－ＰＣＲ用于乙脑临床诊断的可行性。方法：根据乙脑病毒Ｅ蛋白基因区设计了３条引物，采用逆转录－半套式－聚合酶链反应（ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）方法，从实验室到临床应用上，对该方法的敏感性和特异性、临床检测的可靠性进行了探索，并与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法进行了比较。结果：本方法所用引物的敏感性高，特异性强。在此基础上，检测了４７例临床上确诊为乙脑患者的标本（特异性ＩｇＭ阳性），４３例ＲＴ－ｓｅｍ－ｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，与ＩｇＭ检测的符合率为９１％。在２０例特异性ＩｇＭ阴性、临床上怀疑为乙脑的患者中，１２例ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ结果为阳性，阳性率为６０％。结论：上述结果提示，ＲＴ－ｓｅｍｉｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ用于乙脑患者的临床诊断是可行的，若与ＩｇＭＥＬＩＳＡ捕捉法相结合可进一步提高阳性率。另外，对１６例核酸检测阳性的患者进行了追踪检查，结果有１４例患者恢复期标本的ＲＮＡ检测仍为阳性，提示该病毒并未随着症状的消失而立即消失。
- 黄庆生马文煜姜绍谆张富泉李别虎肖毅刘利兵
- 关键词：乙型脑炎RT-PCRELISA
- ELISA法筛选McAb亲和层析洗脱液被引量：2
- 1992年
- McAb亲和层析是分子生物学研究的重要手段之一。已广泛用于生物活性分子的纯化。由于所用McAb的亲和力和被纯化分子的特性不同,需要测定McAb的亲和力和选择适当的洗脱液。通常是通过制备几种不同的McAb亲和柱进行比较来选择。但这样操作烦琐,既耗费时间也不经济。ELISA测定洗脱液的洗脱效果已被人们采用。
- 黄庆生张明杰马文煜于碧云姜绍谆
- 关键词：ELISA单克隆抗体
- 流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体用于临床治疗的初步观察被引量：7
- 1992年
- 作者参照美国药品食品管理局制定的“人用McAb制剂生产鉴定细则”,纯化流行性乙型脑炎病毒单克隆抗体混合制剂。以10mg总剂量,1次静脉滴入加肌肉注射治疗乙脑患者55例,作为乙脑单抗组,另设病毒唑组17例、胸腺肽组7例和对症处理组12例,作为对照。4组的平均退热日数分别为2.86,7.16,9.11,6.20d,乙脑单抗组明显少于其他3组,相差显著(P<0.05)或非常显著(P<0.01);4组的痊愈率分别为80.0%,70.6%,42.9%和50%,经统计分析各组间疗效无显著差异(P>0.05),作者在使用McAb前,均先做皮肤过敏试验,使用McAb时并给予地塞米松。
- 马文煜姜绍谆张明杰于碧云黄庆生汪美先
- 关键词：脑炎免疫疗法
- 组织型纤溶酶原激活物基因的DNA改组被引量：3
- 2003年
- 目的:探索利用DNA改组(DNA shuffling)技术,获得更高活性tPA的可能性。方法:以人、恒河猴及大白鼠tPA cDNA为一组基因,进行tPA的DNA改组(DNA family shuffling)。以改组后构建的tPA多样性文库转染CHO细胞并进行克隆和筛选。结果:得到了两株有意义的克隆:t9和t17,其中t9克隆表达的tPA活性略高于人tPA,初步的比活性测定结果表明,活性约提高4倍。t17克隆表达的tPA虽然有88个氨基酸的缺失,但仍表现出与人tPA相同的活性。两株克隆经测序证明,为改组后的基因,其序列以人和恒河猴的tPA cDNA序列为主,少数序列来源于大白鼠tPA cDNA。结论:这一探索性结果将为后续几轮的tPA DNA改组探明道路,为最终从改 组后tPA多样性基因库中筛选到比较理想的重组体打下基础。
- 黄庆生徐静徐俊杰童贻刚王海涛
- 关键词：组织型纤溶酶原激活物DNA改组真核表达
- 抗JEV McAb及其F(ab′)_2对感染小鼠保护活性的比较
- 1997年
- 抗ＪＥＶＭｃＡｂ及其Ｆ（ａｂ′）２对感染小鼠保护活性的比较张聚良严鹏飞杨波黄庆生＊马文煜＊刘利兵＊（第四军医大学９３年级学员＊微生物学教研室，西安７１００３２）两株鼠源性抗乙脑病毒（ＪＥＶ）ＭｃＡｂ的临床初步应用已显示出较好的治疗效果。但由于完整的鼠...
- 张聚良严鹏飞杨波黄庆生马文煜刘利兵
- 关键词：乙型脑炎病毒单克隆抗体小鼠
- HIV-1囊膜糖蛋白gp41三聚体结构域基因的表达及其单克隆抗体的制备被引量：2
- 2004年
- 目的 :表达HIV 1囊膜糖蛋白gp4 1三聚体结构域基因N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并制备针对该融合蛋白的单克隆抗体 (mAb) ,为筛选抗HIV多肽及分析gp4 1表位的免疫原提供抗体工具。方法 :在BL2 1(DE3)中诱导表达N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,经mAbNC 1鉴定后 ,采用小鼠腹股沟皮下NC膜免疫的方法免疫小鼠 ,并进行细胞融合、克隆化制备抗N5 1(L6 )C4 6mAb ,用ELISA法初步鉴定其特异性位点。结果 :获得了高表达的N5 1(L6 )C4 6融合蛋白 ,并能与识别特异性空间构象的mAbNC 1反应。用该融合蛋白免疫小鼠后 ,获得了 6株抗N5 1(L6 )C4 6的mAb ,这 6株mAb均特异识别兔抗N36 (L6 )C34抗体捕获的融合蛋白 ,但不与N36或C34多肽片段反应。结论 :得到高效表达融合蛋白N5 1(L6 )C4 6 ,并呈现gp4 1核心结构空间构象。用此蛋白免疫小鼠得到 6株特异结合gp4
- 陈峥徐志凯黄庆生黎志东姜世勃
- 关键词：HIV-1GP41单克隆抗体
- 单克隆抗体亲和层析纯化日本脑炎病毒V_3(E)糖蛋白的研究被引量：3
- 1989年
- 本文探讨了用JEV-V_3(E)McAb制备亲和层析柱纯化mg量V_3糖蛋白的方法。结果表明,超声粉碎法裂解病毒囊膜不影响HA活性,而化学裂解剂(NP_(40)、去氧胆酸钠、Tritonx-100)处理病毒原始材料,则导致HA活性的丧失;pH11.5,0.05M二乙胺洗脱剂对V_3的生物学活性影响较少;而3M KSCN对V_3的HA活性有明显影响;用亲和力适中的McAb 2F_2和mC_3亲和层析柱纯化V_3糖蛋白,其HA活性的回收率分别为30～40％及30～60％,蛋白收获量分别为0.33～1.26及0.21～0.66mg,相对HA比活性分别提高3～8倍及8～12倍;经SDS-PAGE考马斯亮蓝染色,显示一条主带,分子量相当于V_3糖蛋白;纯化的V_3糖蛋白可诱导小鼠产生HI抗体及NT抗体。
- 马文煜于碧云于文彬黄庆生姜绍谆汪美先
- 关键词：糖蛋白日本脑炎病毒亲和层析纯化单克隆抗体去氧胆酸钠蓝染色
- 组织型纤溶酶原激活物DNA改组的探索研究
- tPA(tissue-type plasminogen activator)是活性和特异性最强的一种溶栓药物,但在体内短暂的半衰期很大程度上阻碍着该药发挥应有的作用。我们设想更高活性的tPA能在一定程度上缓解这一矛盾。 ...
- 黄庆生
- 关键词：DNA改组
- 含日本脑炎病毒pre-M/E蛋白基因真核表达质粒的构建及免疫效果观察被引量：3
- 1997年
- 本文作者将日本脑炎病毒（ＪＥＶ）的前膜蛋白和囊膜蛋白（ｐｒｅＭ／Ｅ）的基因插入到真核表达载体ｐＳＧ５中，构建了重组表达载体ｐＳＧＪＥ。用其体外转染地鼠肾细胞ＢＨＫ－２１，经间接免疫荧光法（ＩＦＡ）检测，证实了ＪＥＶ－Ｅ的瞬时表达。大量制备和纯化重组质粒，经肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，结果显示该重组质粒可明显促进小鼠在受到ＪＥＶ活病毒攻击后特异性抗体的产生。
- 张富泉任君萍马文煜姜绍谆黄庆生
- 关键词：日本脑炎病毒疫苗质粒
- 检测乙脑患者IgM抗体快速ELISA捕捉法的建立被引量：10
- 1998年
- 引言日本乙型脑炎是由乙脑病毒（ＪＥＶ）引起的急性传染病．治疗不及时可致患者死亡或终生残疾．因此早期、快速、特异性诊断十分必要．１９８１年本室建立的检测乙脑患者ＩｇＭ抗体常规ＥＬＩＳＡ捕捉法［１］，检测费时（全过程超过５ｈ），为了缩短检测时间，我们对常...
- 肖毅马文煜刘利兵丁天兵黄庆生刘丽萍董黎明
- 关键词：乙型脑炎病毒IGM抗体
