伏健民
- 作品数：10 被引量：536H指数：10
- 供职机构：中国科学院遗传与发育生物学研究所更多>>
- 发文基金：美国洛克菲勒基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 温敏核不育水稻5460S细菌人工染色体文库的构建和鉴定被引量：20
- 1999年
- 为了构建温敏核不育 (TGMS)基因区域的精细物理图谱并最终分离TGMS基因 ,以温敏核不育水稻 5 46 0S为材料 ,摸索优化了构建植物细菌人工染色体 (BAC)文库的方法 ,构建了一个高质量的BAC文库 .该文库由 1 95 84个克隆构成 ,插入片段平均长度为 1 1 0kb ,相当于水稻单倍体基因组大小的 5倍 ;以分子量分别为 1 40和2 5 0kb的 2个大BAC克隆进行稳定性传代实验 ,经 1 0 0代传代后其插入的DNA片段仍然稳定存在 ;以线粒体和叶绿体基因为探针筛选BAC文库 ,未检验出叶绿体和线粒体DNA的污染 ;以和tms1基因连锁的 3个分子标记作为探针对BAC文库进行了筛选 ,每个探针至少可获得一个阳性克隆 ,利用热不对称性交错PCR(Tail PCR)法成功分离了阳性克隆的左右末端序列 .
- 邱芳金德敏伏健民张超良谢纬武杨仁崔张洪斌王斌
- 关键词：水稻温敏核不育基因细菌人工染色体文库
- 新一代分子标记技术──AFLP被引量：94
- 1996年
- ＡＦＬＰ（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）是近年来发展起来的最有效的新一代分子标记技术．本文对ＡＦＬＰ的发生发展、基本原理、反应程序，在植物分子生物学研究中的应用以及方法本身的优缺点进行了介绍和评述．
- 翁曼丽谢纬武伏健民王斌
- 关键词：分子标记技术AFLP分子生物学
- 从植物细胞核分离大分子量核DNA被引量：14
- 1999年
- 研究了从植物中分离百万碱基对级大分子量核DNA的方法。该方法利用差速离心分离植物细胞核，经低熔点琼脂糖块或低熔点琼脂糖微珠包埋，蛋白酶K原位裂解后制备大分子量核DNA。结果表明，选择不同生长时期的材料和不同的包埋细胞核方式对大分子量核DNA的制备有很大的影响，由黄化苗或幼嫩的绿叶为材料分离细胞核，进行胶块包埋是制备大分子量核DNA的最佳条件。利用该法获得的DNA分子量在200kb－5．7Mb之间，主要集中在2．2～5．7Mb之间；每一胶块DNAE量为18～20μg。与包埋原生质体制备大分子量核DNA的方法相比，该方法获得的DNA纯度较高，去除了大部分细胞器DNA的污染；易于被限制性内切酶部分和完全消化，其消化结果具可重复性。该方法操作简单、适用植物种类广泛，用该方法从水稻（OryzasativaL．）、苹果（MaluspumilaMill．）、大豆（Glycinemax（L．）Merr．）、玉米（ZeamaysL．）等多种植物材料中成功地制备了大分子量核DNA。该方法制备的核DNA适用于植物的脉冲交变电泳基因组分析和构建人工细菌染色体文库和人工酵母染色体文库。
- 邱芳伏健民王斌
- 关键词：植物细胞核
- 培矮64s为不育系的两系杂交稻杂种纯度的RAPD鉴定被引量：35
- 1998年
- 用２５０个Ｏｐｅｒｏｎ引物，对以培矮６４ｓ为母本配制的两系稻杂种及有关亲本等１２份供试材料进行ＲＡＰＤ分析，从中筛选出引物ＯＰＮ－２０．它不但能使培矮６４ｓ和以它为母本的杂种种子同其它种子加以区别，同时还扩增出恢复系山青、特青的多态性特征带，使它们的Ｆ１种子与母本培矮６４ｓ分开．
- 杨蜀岚伏健民杨仁崔王斌
- 关键词：培矮64S杂种纯度两系法
- 遗传多样性的分子检测被引量：282
- 1998年
- 生物多样性的保护和可持续利用是维持全球经济稳定和发展的重要因素，也是保持我们赖以生存环境的重要内容。为了实现这一目的，必须尽快建立一套对生物多样性认识和检测的有效方法，逐步认清全球生物多样性的基本状况。本文论述了生物多样性特别是物种间和物种内多样性的几种主要检测方法，着重介绍分子标记的最新进展及比较基因组学的兴起在生物多样性研究中的广泛应用。
- 邱芳伏健民金德敏王斌
- 关键词：生物多样性分子标记比较基因组学
- AFLP分析中多态性扩增产物的回收、克隆及鉴定被引量：54
- 1998年
- 本研究在摸索和优化了水稻ＡＦＬＰ分析体系的基础上，发展了多态性ＡＦＬＰ产物的高效克隆方法。特异ＡＦＬＰ扩增产物直接从变性聚丙烯酰胺凝胶上分离纯化，再经过一至二轮ＰＣＲ扩增，即可高效地克隆于ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙｖｅｃｔｏｒ系统中。本实验利用该方法成功地克隆了水稻温敏核不育等位突变系５４６０Ｓ和５４６０Ｆ间的４个多态性ＡＦＬＰ产物，Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ分析证明其中３个产物在水稻基因组中为单拷贝序列，另一个为低拷贝序列。ＡＦＬＰ技术强有力的多态性检出能力再结合多态性扩增产物的高效克隆方法，为寻找与目标基因紧密连锁的分子标记提供了有力工具。
- 李传友伏健民金德敏翁曼丽王斌
- 关键词：AFLP分子标记
- 小麦胞质突变型雄性不育系85EA与其保持系线粒体DNA的比较研究被引量：12
- 1999年
- 85EA是通过电子束辐照获得的胞质突变型小麦不育系。采用RFL和RAPD技术对85EA及其保持系的线粒体DNA（mtDNA）进行了比较研究。RFL分析表明85EA线粒体基因组中coxⅡ基因的位置结构与保持系相比发生了变化；RAPD分析中引物OPD-15的扩增产物在不育系和保持系间存在明显差异，不育系的扩增产物比保持系多1条分子量为0．6kb的特异条带，用T-easyvector克隆该不育系特异条带并命名为OPD-150.6。以OPD-150.6为探针进行Southem杂交在不育系和保持系的mtDNA间检测到了多态性。实验检测到的不育系和保持系mtDNA间的多态性可能只是电子束辐照所引起的mtDNA结构变异的一部分。尽管目前对这种变异的确切机制尚不明确，但可以推测正是由于这些结构变异影响了线粒体基因组的正常功能，最终引起了雄性不育。
- 李传友伏健民金德敏王斌
- 关键词：细胞质雄性不育MTDNA
- 水稻5460F细菌人工染色体文库的构建和鉴定被引量：19
- 1999年
- 温敏核不育 (thermo sensitivegenicmalesterile ,TGMS)水稻在杂交水稻生产中具有重要的应用价值 .前人的研究表明 ,该不育性状是由隐性单基因控制的 ,本室首次把该基因定位于水稻的第 8染色体 ,并将其命名为tms1 .为了构建覆盖tms1基因区域的精细物理图谱并最终克隆tms1基因 ,利用 1个改进的载体pECBAC1进行了温敏核不育水稻 5 46 0S的可育恢复突变体5 46 0F细菌人工染色体 (bacterialartificialchromosome,BAC)文库的构建 .该文库由 1 6 896个克隆构成 ,克隆片段平均大小为 1 1 9kb ,相当于水稻基因组大小的 4.7倍 ,无叶绿体DNA和线粒体DNA的污染 .利用与tms1基因紧密连锁的 3个单拷贝AFLP标记为混合探针 ,对BAC文库进行筛选 ,共得到
- 曲雪萍伏健民李传友贾建航金德敏王倩杨仁崔王斌
- 关键词：水稻温敏核不育杂交水稻BAC文库
- 高等植物线粒体基因组研究新进展被引量：13
- 1998年
- 与其它真核生物相比，高等植物线粒体基因组不仅在大小，组织结构．基因组成和表达，RNA编辑等方面具有突出特点，而且线粒体基因组与核基因组之间存在着广泛的信息交流线粒体基因组作为一个半自主性的遗传系统，其组织结构的雏持和生理功能的发挥受到核基因组的调控作用，本文就这些方面的研究进展作了简要评述．
- 李传友伏健民金德敏王斌
- 关键词：高等植物线粒体基因组
- 水稻的AFLP研究初报——反应条件的优化及对温敏核不育等位突变系的分析(英文)被引量：38
- 1999年
- 通过对５４６０Ｓ和５４６０Ｆ这一对水稻等位突变系的ＡＦＬＰ分析，比较了ＡＦＬＰ与ＲＡＰＤ及ＲＦＬＰ检测ＤＮＡ多态性的相对效率。结果表明，这３种分子标记的ＤＮＡ多态性检出效率依次为ＡＦＬＰ＞ＲＡＰＤ＞ＲＦＬＰ；找出了水稻ＡＦＬＰ分析的最适反应条件；在这对等位突变系之间找到了一些多态性ＡＦＬＰ产物，已完成了对４个多态性ＡＦＬＰ产物的克隆，其中３个为单拷贝顺序；用这３个单拷贝克隆的混合物为探针，对作者自己构建的５４６０Ｓ水稻的ＢＡＣ库进行了筛选，获得了１２个阳性克隆，为今后ＢＡＣ库的筛选打下了基础。此外，对上述３种分子标记各自的优缺点及它们在ＤＮＡ多态性检测中的适用之处进行了分析探讨。
- 王斌李传友李传友伏健民郑洪刚HenryT.NGUYEN
- 关键词：AFLP水稻分子标记温敏核不育
