何小鹃
- 作品数：14 被引量：43H指数：3
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金教育部留学回国人员科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外致敏鼻咽癌患者B细胞构建抗独特型噬菌体抗体库
- 2001年
- 李官成何小鹃等
- 关键词：鼻咽癌噬菌体抗体库
- 用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建噬菌体抗独特型抗体库被引量：3
- 2003年
- 目的 :构建噬菌体人源抗独特型抗体库。方法 :体外致敏并用EBV转化鼻咽癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH 和VL 基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,转化大肠杆菌MC10 6 1,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果 :经EBV转化的 10例鼻咽癌患者的PBMC中 ,8例有鼻咽癌抗独特型抗体产生。经多次PCR ,扩增出 5种VH(γ、μ)和 7种VL(κ、λ)基因 ,经连接组成 14种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后 ,导入大肠杆菌MC10 6 1。经四环素抗性筛选 ,得到库容为 1.1× 10 7的初级噬菌体抗独特型抗体库 ,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为 70 %。结论 :用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术 ,制备人源抗独特型单链抗体(Ab2 βScFv)
- 何小鹃李官成朱建高李跃辉
- 关键词：鼻咽癌噬菌体呈现技术抗独特型抗体
- 鼻咽癌人源抗独特型抗体的制备及筛选
- 目的：采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术构建全人源的鼻咽癌抗独特型抗体库，从噬菌体抗体库中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β型抗独特型噬菌体单链抗体(Ab2β scFv)或小分子抗体片段，并对鼻咽癌的噬菌体抗...
- 何小鹃
- 关键词：鼻咽癌噬菌体抗体库抗独特型抗体
- 文献传递
- 人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2008年
- 目的:构建含人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22的真核表达载体,并观察其在直肠癌细胞(rectalcancercells,CMT-93)中的表达。方法:将目的基因G22克隆入真核质粒pcDNA3.1(+)中构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-G22,并进行酶切鉴定和DNA序列测定。用脂质体法将重组质粒转染入CMT-93细胞,以Western免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光检测G22基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析证实,重组质粒pcDNA3.1(+)-G22含有人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22的全长序列,转染实验表明G22基因能在真核细胞CMT-93中正确表达。结论:人源性鼻咽癌抗独特型抗体基因G22真核表达载体构建及其在CMT-93细胞中的表达均获成功,为基因疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 罗晨何小鹃赵艳张志杰李官成
- 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体真核表达
- 鼻咽癌组织cDNA文库的构建及抗原基因的筛选被引量：12
- 2004年
- 构建人鼻咽癌组织cDNA文库 ,以SEREX方法从cDNA文库中筛选鼻咽癌抗原基因。采用确诊鼻咽癌患者新鲜活检癌组织构建cDNA文库 ,测定原始文库滴度 ,进行蓝白筛选以确定文库的重组率。以建库组织来源患者的自身血清 ,采用“一对一”的血清学方法筛选所构建的cDNA文库 ,阳性克隆经PCR检测鉴定后进行序列分析。经测定原始文库滴度为 7 2 8× 10 6 pfu mL ,含 3 6 4× 10 6 个重组子 ,重组率为 94 % ,扩增文库滴度为 3 8× 10 9pfu mL ,cDNA插入片段大小在 0 5～ 3 0kb之间。文库经三轮血清学筛选共获得 2 3个阳性克隆 ,分别代表了 16个独立的cDNA插入片段 (抗原基因 )。其中 10个与已知基因高度同源 ,另外 6个基因与GenBank中已知基因的部分同源 ,其中有 3个是新基因。利用SMART技术构建了高质量的人鼻咽癌组织cDNA表达文库 ,有利于以cDNA文库为基础的进一步的实验研究。应用SEREX技术初步筛选鼻咽癌组织cDNA文库 ,共得到 16个鼻咽癌相关抗原基因 ,其中有 3个是新基因 ,可能为鼻咽癌的免疫学研究提供新的研究分子。
- 舒峻李官成何小鹃
- 关键词：鼻咽癌CDNA文库抗原基因
- 鼻咽癌细胞HNE_2cDNA文库的构建被引量：1
- 2003年
- 目的 快速构建人鼻咽癌细胞株HNE2 的定向cDNA文库。方法 从人鼻咽癌细胞抽提总RNA磁珠法分离mRNA ,以含SfiI酶切位点的oligo(dT)引物合成cDNA第一链 ,利用SMART(switchingmechanismat 5’endofRNAtranscript)技术 ,经LD -PCR合成双链cDNA ,该物经SfiI酶切后分级分离 ,插入片段与λTripIEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库。结果 经鉴定 ,该文库含0 78× 10 6 个重组子 ,重组率 >96% ;扩增文库滴度为 1 0 2× 10 9pfu/ml ,插入片段平均长度为 1 2kb。结论 构建的人鼻咽癌细胞HEN2 cDNA文库质量较好 。
- 舒峻李官成何小鹃李跃辉
- 关键词：鼻咽癌CDNA文库基因克隆
- 鼻咽癌人源抗独特型单链抗体的制备及筛选
- 抗独特型抗体作为肿瘤抗原替代物用于肿瘤治疗已在临床试验中得以证实。但由于目前所使用的抗独特型抗体多为鼠源性,用于人体可产生人抗鼠抗体反应,影响疗效。本实验拟构建噬菌体人源抗独特型抗体库并从中筛选出能模拟鼻咽癌相关抗原的β...
- 何小鹃李官成朱建高李跃辉周国华
- 文献传递
- 鼻咽癌组织cDNA文库的构建及抗原基因的筛选
- 近年来,肿瘤免疫治疗研究已成为肿瘤研究领域的热点,然而,无论是肿瘤主动免疫治疗还是被动免疫治疗,前提是必须首先获得肿瘤抗原。近几年来,人们采用"重组cDNA表达文库的血清学分析"(SEREX)技术筛选及鉴定肿瘤抗原,极大...
- 舒峻李官成何小鹃
- 文献传递
- 鼻咽癌抗独特型基因工程抗体疫苗的实验研究
- 李官成何小鹃王甲甲李跃辉汪静罗晨
- 该项目是属于医药卫生领域。鼻咽癌是中国南方及东南亚各国的高发癌，由于发病部位特殊，决定了其主要治疗手段为放射治疗。然而放疗仅适用于治疗原发肿瘤及区域淋巴结，放疗后复发和转移率仍很高，致使鼻咽癌总的五年生存率徘徊在50%-...
- 关键词：
- 关键词：鼻咽癌基因工程肿瘤疫苗
- 人鼻咽癌组织定向cDNA文库的构建被引量：1
- 2004年
- 目的 快速构建成人鼻咽癌组织cDNA文库。方法 从人鼻咽癌组织分离总RNA ,以含有sfiIB酶切位点的oligo(dT)引物合成第一链cDNA ,以含sfiIA酶切位点的SMART寡核苷酸为引物经LD PCR扩增双链cDNA ,双链cDNA经sfiI(IA&IB)酶切 ,以CHROMASPIN 4 0 0柱分级分离cDNA ,收集符合需要的cDNA片段并纯化 ,随后将之与λTriplEx2载体连接经体外包装成噬菌体cDNA文库。 结果 经检测共获得 3.6 4× 10 6个重组子 ,重组率 >94 % ,文库经扩增后滴度为 3.8× 10 9pfu/ml。结论 用SMART方法构建的鼻咽癌组织cDNA文库质量较高 。
- 舒峻李官成何小鹃
- 关键词：CDNA文库定向克隆
