何文涛
- 作品数：20 被引量：26H指数：3
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属同济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组小鼠Galectin-9在大肠杆菌中的表达以及体外功能检测被引量：1
- 2007年
- 本研究旨在构建重组Galectin-9（半乳糖凝集素9）原核表达质粒，并对表达蛋白进行纯化和功能学鉴定。
- 汪峰何文涛袁劲吴柯周鸿敏徐逸高英陈忠华
- 关键词：大肠杆菌体外小鼠原核表达质粒半乳糖凝集素
- 含人p27基因的重组腺病毒的构建及鉴定
- 2008年
- 目的:构建并鉴定含有人p27基因和EGFP基因的重组腺病毒载体,并观察其表达。方法利用腺病毒载体系统Adeno-X,通过质粒抽提、电泳、酶切、连接、转化等多种基因工程技术,构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP;酶切、PCR鉴定重组腺病毒质粒;利用293细胞包装重组腺病毒载体PAd-p27-EGFP,通过荧光倒置显微镜观察EGFP的表达。结果:经酶切和PCR鉴定,成功构建重组腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP,利用脂质体转染人293细胞后,转染腺病毒质粒pAdeno-p27-EGFP可见EGFP表达和细胞致病效应(CPE)。结论:利用腺病毒载体系统Adeno-X成功构建含CMV启动子的Flag-p27和EGFP基因的腺病毒载体,为进一步研究细胞周期调控与慢性移植物失功之间的关系,并为寻找慢性移植物失功的基因治疗的途径奠定基础。
- 徐逸朱舟吴柯陈曦林何文涛曾宁陈忠华
- 关键词：P27腺病毒细胞周期慢性移植肾失功
- 2型糖尿病心外膜脂肪:冠心病新的防治靶点被引量：1
- 2023年
- 异位脂肪的过量堆积是2型糖尿病(T2DM)发生冠心病的高危因素。心外膜脂肪(EAT)是紧邻心肌和冠状动脉的一种异位脂肪。在T2DM患者体内,EAT的容积和功能学发生变化,通过分泌脂肪因子、炎症因子和游离脂肪酸等,促进冠状动脉的内皮及平滑肌发生胰岛素抵抗、损伤和炎症反应,并引起心肌的损伤,进而加快冠心病的发生及发展,增加心肌缺血和斑块破裂等冠心病事件的发生。现有证据表明EAT可能是T2DM合并冠心病的治疗靶点,本文将对这一领域的研究进展进行总结及展望。
- 苏莹余学锋何文涛
- 关键词：2型糖尿病冠心病心外膜脂肪炎症反应
- Galeetin-9（Tim-3L）显著减弱小鼠移植排斥
- 2009年
- 目的探究Galectin-9（即Tcell immunoglobulin domain and mucin domain protein-3 lig-and，Tim-3L）的真核定位与功能，及其对同种异基因排斥反应的影响。方法PCR扩增Galectin-9片段，插入到pEGFP—N1质粒，转染中国仓鼠卵巢癌细胞系（CHO）行G418筛选，分选增强型绿色荧光蛋白（EGFP）阳性细胞。免疫组化检测Galectin-9的表达，Alamar Blue法检测稳定转染Galectin-9的CHO细胞及其新鲜培养上清对脾细胞增殖的影响，ELISA检测IL-2水平。给予BALB／c→C57BL／6心脏移植受鼠Galectin-9蛋白100μg×7d。结果Galectin-9表达于细胞浆，稳定转染Galectin-9-EGFP的CHO细胞上清抑制淋巴细胞增殖和IL-2的产生。上述效应可被Tim-3-Fc融合蛋白逆转。Galectin-9干预的心脏移植物中位生存时间明显延长[（22．7±1．2）d，（7．2±0．4）d）]。结论真核细胞中Galectin．9可通过分泌形式负调节同种异基因免疫；Galectin-9有望成为新型的抗排斥药物。
- 何文涛袁劲方泽民汪峰徐逸周鸿敏高英张维娜王璐陈忠华
- 关键词：TIM-3GALECTIN-9免疫抑制小鼠
- 半乳糖苷凝集素-7免疫增强功能的体外研究被引量：3
- 2010年
- 目的了解半乳糖苷凝集素-7(galectin-7)对不同T细胞亚群增殖的影响,并进一步探讨其免疫治疗方面的应用前景。方法利用不同浓度的重组Galectin-7蛋白在有或无抗CD3和CD28抗体存在时与纯化的T细胞共同培养5 d,流式细胞仪检测T细胞及各亚群的增殖情况。结果 galectin-7能明显诱导T细胞的增殖,在与抗CD3和抗CD28抗体联用时能协同促进T细胞增殖反应,增殖的细胞主要为CD8+T细胞。结论 galectin-7能诱导并促进T细胞的增殖,在体外发挥免疫增强作用,深入探索其作用机制,有望研发新的靶点药物用于肿瘤的临床免疫治疗。
- 高英张维娜何文涛汪理周鸿敏林星光陈忠华
- 关键词：增殖T细胞亚群
- 肥大细胞体外诱生CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋调节性T细胞的作用
- 2009年
- 探索小鼠骨髓源性肥大细胞能否在体外诱生CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。从小鼠股骨获取骨髓细胞,加入完全RPMI 1640培养基(含IL-3和SCF各10 ng/ml)诱导4周。用甲苯胺蓝染色法观察肥大细胞异染颗粒;流式检测CD117和FcεRIα双阳性细胞比例。将肥大细胞与同基因来源的T细胞按不同比例(1∶2、1∶1、2∶1)置于48孔培养板中培养,作为三个实验组;未加肥大细胞的单独T细胞组作对照组。四个组均加入CD3抗体和CD28抗体各2μg/ml,IL-2 1 000U/ml,5 d后流式检测Foxp3表达情况。RT-PCR,免疫组化法检测肥大细胞中TGF-β1的表达。与对照组相比,实验组Foxp3表达均升高(对照组:3.37%±0.40%;实验组为:8.23%±0.80%、10.87%±1.25%、13.63%±0.55%)。RT-PCR和免疫组化均检出TGF-β1表达。肥大细胞能在体外诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞,可能与肥大细胞表达TGF-β1有关。
- 张维娜吴轲周鸿敏何文涛高英汪理林星光方泽民蔡兰军周巧丹雒真龙陈忠华
- 关键词：小鼠肥大细胞CD4^+CD25^+FOXP3^+调节性T细胞TGF-Β1
- 小鼠galectin-9可通过分泌形式诱导Tim-3^-T细胞凋亡
- 2010年
- 目的 构建小鼠galectin-9重组腺病毒pAd-gal-9,探讨galectin-9的真核表达定位以及galectin-9诱导T细胞凋亡与Tim-3表达的关系.方法 常规分子克隆方法 结合LR反应构建腺病毒重组质粒pAd/CMV/V5-DEST-gal-9,以Pac I线性化后,用脂质体2000体外转染293A细胞,8 d后反复冻融细胞3次收集含病毒上清,并以此上清感染293A细胞大量扩增病毒pAd-gal-9.CsCI密度梯度离心法纯化病毒,96孔板法梯度感染293A细胞测定病毒滴度,然后感染CHO细胞,用免疫组化、Western blot和流式细胞仪分析galectin-9的表达水平和定位;以新鲜培养的上清或固相化的细胞分别与外周淋巴结细胞进行培养,AnnexinV/PI法检测T细胞凋亡情况,对比凋亡细胞比例与Tim-3^＋ T细胞的比例.结果 重组腺病毒构建及表达成功,免疫组化表明galectin-9在CHO胞质表达;Westernblot证实galectin-9表达;流式分析表明胞内染色组galectin-9平均荧光强度显著高于表面染色组,病毒感染CHO表面染色组与空白对照组galectin-9平均荧光强度无明显区别;新鲜培养的上清可以明显诱导T细胞发生凋亡,显著高于Tim-3^＋ T细胞的比例.结论 重组腺病毒pAd-gal-9构建成功,体外感染pad-gal-9的CHO分泌galectin-9诱导T细胞凋亡可以不依赖Tim-3的表达.
- 何文涛袁劲徐逸周鸿敏蔡兰军郭晖李超左利群宫念樵陈忠华
- 关键词：凋亡T细胞
- 小鼠骨髓源性肥大细胞的培养及鉴定被引量：1
- 2009年
- 目的:在体外利用小鼠骨髓干细胞诱导获得高纯度的肥大细胞。方法:从小鼠股骨获得骨髓细胞,放入含10%胎牛血清的RPMI1640培养基中,加入不同浓度的刺激因子,即IL-3和SCF各分别为10ng/ml、15ng/ml、20ng/ml,放入CO2培养箱中培养4周,用免疫组化观察CD117的表达,用流式细胞术检测CD117和FcεRIα双阳性细胞的比例,用甲苯胺蓝染色法观察细胞的成熟度,并与较常用的肥大细胞系P815做比较。结果:培养获得的肥大细胞,其中IL-3和SCF分别为10ng/ml和15ng/ml时均可在4周后得到纯度大于95%的CD117和FcεRIα双阳性肥大细胞,而20ng/ml时FcεRIα的表达却有所降低,双阳性细胞仅达90%,而P815细胞系表达FcεRIα的比例很低。免疫组化发现培养获得的细胞大部分均表达CD117。甲苯胺蓝染色发现培养获得的细胞核被染成深蓝色,胞浆中布满大量紫红色的颗粒,呈现肥大细胞的典型特征。而P815却少见典型的紫红色异染颗粒。结论:用IL-3和SCF各10ng/ml可在体外成功培养获得高纯度的小鼠骨髓源性肥大细胞,且其在表型和成熟度方面均好于P815细胞系。
- 张维娜吴轲周鸿敏彭清臻何文涛高英林星光方泽民陈忠华
- 关键词：肥大细胞骨髓小鼠
- 无心跳供体肾移植前处理研究进展
- 来自NHBD的肾脏均不可避免地经历了热缺血，冷保存及缺血再灌注损伤，在移植前采取的干预措施对移植肾脏的成活，功能和预后产生重要影响。目前对无心跳供体移植前处理主要包括供肾切取手术中处理，机器灌注保存处理，药物处理，缺血预...
- 高英蔡兰军何文涛林星光徐利军张维娜雒真龙周鸿敏陈忠华
- 关键词：肾移植缺血预处理药物处理无心跳供体
- 文献传递
- TIGIT-Fc融合蛋白的表达以及对巨噬细胞功能的影响被引量：2
- 2015年
- 目的:构建携带小鼠TIGIT-Fc融合基因的慢病毒载体,稳定整合基因至小鼠H22细胞,制备并纯化TIGIT-Fc融合蛋白,探讨其对巨噬细胞功能的影响。方法:利用分子生物学方法将小鼠TIGIT胞外段与人IgG3 Fc段基因融合,构建分泌型TIGIT-Fc载体,再重组入慢病毒载体,感染小鼠H22细胞,接种至C57BL/6小鼠腹腔产生腹水,收集腹水后通过蛋白A柱纯化获得TIGIT-Fc融合蛋白,以此干预LPS处理的巨噬细胞,检测其分泌IL-10的水平。结果:TIGIT-Fc蛋白在H22细胞中以分泌形式表达,经过纯化后的TIGIT-Fc融合蛋白可在体外作用于高表达PVR受体的成熟巨噬细胞,促进其分泌抗炎症因子IL-10。结论:TIGIT可负调节成熟巨噬细胞的功能,促进其分泌IL-10。
- 赵霞陈茜刘喆隆程辉何文涛
- 关键词：巨噬细胞PVRIL-10
