凃勇
- 作品数：7 被引量：10H指数：2
- 供职机构：内蒙古农业大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金转基因生物新品种培育专项内蒙古自治区自然科学基金更多>>
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- β-防御素-5 mRNA在荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞中的表达
- 奶牛乳腺炎是一种复杂的综合性乳腺疾病。它病因复杂，可由多种病原微生物侵入乳腺而引起，所以防治不易。目前，关于β-防御素的抗乳房炎作用的研究很少。 本研究首先采用胶原酶消化法和胰蛋白酶选择消化法，对荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞...
- 凃勇
- 关键词：荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞防御机制
- 文献传递
- 几种不同信号通路的抑制剂对17β-雌二醇诱导绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因转录的影响被引量：1
- 2010年
- 主要探讨了17β-雌二醇(E2)促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1(sheep beta-defensin-1)表达的可能的信号通路.在研究过程中,分别用10-8mol/L 17β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂ICI182780、PKA(protein kinase A)阻断剂H-89、PKC(protein kinase C)阻断剂H-7、NF-κB(Nuclear factor-kappaB)阻断剂PDTC(pyrrolidine dithiocarbamate)干预绵羊输卵管上皮细胞6 h,采用实时荧光定量RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)方法检测SBD-1 mRNA表达水平的变化.实验结果显示,10-8mol/L 17β-雌二醇可显著促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1 mRNA的表达(p<0.01);ICI182780、H-89、PDTC和H-7均可阻断17β-雌二醇对SBD-1的上调作用.提示17β-雌二醇促进绵羊输卵管上皮细胞SBD-1表达是由雌激素核受体、PKA、NF-κΒ、PKC信号转导通路所介导的.
- 包图雅曹贵方曹金山杜晨光凃勇
- 关键词：17Β-雌二醇输卵管上皮细胞绵羊信号通路
- 蒙古绵羊Ghrelin基因的克隆和原核表达被引量：2
- 2011年
- 为了克隆蒙古绵羊Ghrelin基因,构建其原核表达载体,并检测其在大肠杆菌中的表达情况。本研究用RT-PCR方法从蒙古绵羊胃组织mRNA扩增获得Ghrelin基因的cDNA序列,克隆到pMD-19T载体后进行序列分析。将测序正确的cDNA序列与原核表达载体pET-32a(+)连接,并转化BL21(DE3)大肠杆菌。经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot分析。结果表明克隆的蒙古绵羊Ghrelin基因序列与已发表基因序列有2个碱基的差异,该碱基的变化并不影响氨基酸序列,目的蛋白主要以可溶性形式存在,Western-blot初步证实了所获得的融合蛋白是特异的。本研究成功构建了蒙古绵羊Ghrelin基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得高效表达,为进一步研究蒙古绵羊Ghrelin基因的功能提供参考。
- 梁建荣曹贵方赵鹏伟温世勇程兰玲凃勇
- 关键词：GHRELIN基因克隆原核表达蒙古绵羊
- 荷斯坦奶牛乳腺LAP基因的克隆与序列分析
- 2012年
- 为了研究奶牛乳腺防御素基因的表达调控机制,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出LAP基因的核心片段序列,并与NCBI数据库序列比对同源性;进一步扩增其DNA序列中间片段;其后运用反向PCR技术并结合半巢式PCR技术扩增其侧翼的序列。结果表明:序列与NCBI数据库中序列同源性为100%,确认为LAP基因;DNA序列扩增得到1 760 bp的中间序列,并预测了其酶切位点;得到5'侧翼序列107 bp,3'侧翼序列87 bp,经预测发现有转录因子GATA。为进一步研究防御素的防御功能、寻找防御素基因体外表达调控机制以及利用基因工程防治奶牛乳腺炎积累了基本资料。
- 程兰玲曹贵方赵鹏伟凃勇包图雅
- 关键词：荷斯坦奶牛反向PCR防御素
- 17β-雌二醇对诱导绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)基因表达的影响被引量：1
- 2014年
- 研究了17β-雌二醇(E2)对培养的绵羊输卵管上皮细胞内SBD-1基因表达的影响.将不同剂量的17β-雌二醇加入传2代的绵羊输卵管上皮细胞内,分为实验组(10-6 mol/L组、10-7 mol/L组、10-8 mol/L组、10-9 mol/L组和10-10 mol/L组)和相应的对照组,分别处理2,6,12,24,48h,然后通过实时荧光定量RT-PCR技术,检测17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞内SBD-1mRNA的表达变化.结果显示:17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1mRNA的表达存在着时间效应和剂量上的依赖关系;17β-雌二醇可以上调绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1mRNA表达,上调表达的最佳时间为6h,最佳浓度为10-8 mol/L(P<0.01).
- 包图雅白萨日娜曹贵方凃勇杜晨光
- 关键词：17Β-雌二醇输卵管上皮细胞上调绵羊基因表达
- 不同浓度脂多糖刺激奶牛乳腺上皮细胞对NF-κB及LAP表达的影响被引量：4
- 2012年
- 为了观察不同浓度脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞NF-κB及LAP基因表达的影响,设置不同浓度(0、50、100、200、400和800ng/mL)的脂多糖(LPS)刺激奶牛乳腺上皮细胞,分别于刺激2、4、8、16、24、48和72h后提取细胞总RNA,经反转录反应后,运用荧光定量PCR方法检测NF-κB P65亚单位和LAP的表达水平。结果,与空白对照组相比,脂多糖浓度达到400ng/mL并培养72h后,奶牛乳腺上皮细胞NF-κB P65亚单位和LAP的表达量最高,且与对照组有极显著差异(P<0.01)。结果表明,在脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性效应中,NF-κB的表达活性增强,调控着防御基因LAP表达,呈现一定的剂量和时间效应关系。
- 程兰玲曹贵方温世勇赵鹏伟凃勇菅瑞珍李琦
- 关键词：Β-防御素NF-ΚB乳腺上皮细胞脂多糖
- β-防御素在荷斯坦奶牛正常和炎性乳腺上皮细胞中的差异表达被引量：1
- 2012年
- 为探讨荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞在正常和炎性2种情况下β-防御素(BNBD5)的表达量是否存在差异,本研究通过添加内毒素(LPS)建立了实验性乳房炎的乳腺上皮细胞模型,并采用实时荧光定量RT-PCR方法检测了乳腺上皮细胞中BNBD5mRNA表达水平的变化。结果显示,添加LPS后乳腺上皮细胞中炎性因子IL-6、IL-12和TNF-α的mRNA表达量与空白对照组相比显著增加(P<0.01),并且α-酪蛋白mRNA表达量显著降低(P<0.01),说明添加LPS诱发上皮细胞产生了一定的炎性反应;并且当添加LPS终质量浓度为300μg/L并培养48h之后BNBD5的表达量最高,与空白对照组存在极显著差异(P<0.01);推测BNBD5基因可能参与了由LPS诱发的奶牛乳房炎的防御机制。
- 凃勇曹贵方李海军包图雅米焱温世勇
- 关键词：荷斯坦奶牛乳腺上皮细胞内毒素MRNA表达
