刘文静
- 作品数：9 被引量：13H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金南京军区医学科技创新课题更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 2型猪链球菌05ZYH33 sao基因敲除突变株构建及毒力研究
- 猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis2)是一种重要的人兽共患传染病病原体,其具体的致病机制尚不明确.为了进一步研究该基因与05ZYH33强致病性的关系,本实验室构建了sao基...
- 潘秀珍刘文静李先富王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌毒力作用
- Sao蛋白多克隆抗体制备鉴定及促全血杀菌作用被引量：5
- 2014年
- 目的制备2型猪链球菌(S.suis 2)表面抗原一(Sao)重组蛋白的多克隆抗体,鉴定其免疫学特性。方法通过PCR从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中扩增基因Sao,构建重组表达质粒pET28a-Sao,转化E.coli BL21,异丙基硫代半乳糖苷诱导表达目的蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定表达产物,His亲和层析柱纯化重组蛋白,利用纯化后Sao蛋白制备多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验检测抗体效价,Western blot鉴定抗体特异性,评价Sao多克隆抗体的促全血杀菌作用。结果构建的重组质粒可以在宿主菌中高效表达,纯化后获得的重组蛋白纯度可达90%;间接酶联免疫吸附试验测定Sao多克隆抗体效价为1∶102400;Western blot结果显示,Sao多克隆抗体有较好的特异性;全血杀菌实验显示,05ZYH33在含有Sao多抗血清的全血中相对存活率下降85%。结论本研究制备的2型猪链球菌重组Sao蛋白多克隆抗体效价高,特异性好,可明显增强全血对细菌的杀伤作用。
- 王晶李敏刘文静杜骁杰王玲李先富王长军潘秀珍高基民
- 关键词：2型猪链球菌原核表达多克隆抗体
- 猪链球菌2型甲基受体趋化蛋白编码基因05SSU0273的原核表达及纯化
- 2013年
- 目的原核表达猪链球菌2型甲基受体趋化蛋白编码基因05SSU0273。方法通过PCR方法检测该基因在不同血清型猪链球菌中的分布情况,然后利用获得的猪链球菌2型05SSU0273基因片段,构建重组表达载体pET32a::05SSU0273。将质粒转入E.coli BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western blot实验证实目的基因的表达,然后以His亲和层析柱纯化重组蛋白。结果在S.suis 2 35个血清型标准株中,有20株分离株扩增出目的条带。重组质粒可在宿主菌中高效表达,经镍柱亲和层析得到相对分子质量为43kD的重组蛋白。结论本实验成功获得S.suis 2MCP蛋白,为研究其在猪链球菌2型致病过程中发挥的作用奠定了基础。
- 郭静静杜骁杰刘文静郑峰胡丹王长军潘秀珍
- 关键词：猪链球菌2型MCP原核表达
- 2型猪链球菌层粘连蛋白结合蛋白的原核表达及免疫原性检测被引量：2
- 2011年
- 目的表达2型猪链球菌(Streptococcus suis2,S.suis2)层粘连蛋白结合蛋白(Lmb)并检测其免疫原性。方法 PCR检测lmb基因在不同血清型S.suis中的分布。将S.suis2中国强毒株05ZYH33的lmb基因克隆至表达载体pET32a,转化大肠杆菌E.coliBL21,IPTG诱导表达,His亲和层析柱纯化重组蛋白。Western blot检测Lmb的免疫原性。结果 lmb基因存在于大多数S.suis血清型中。诱导表达并纯化后获得较高纯度的重组蛋白。重组Lmb能够和感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。结论 lmb基因在S.suis不同血清型中广泛分布,Lmb在细菌感染宿主过程中表达,可以作为疫苗开发的候选分子。
- 潘秀珍邵珠卿李先富刘文静王长军唐家祺
- 关键词：2型猪链球菌
- 2型猪链球菌重组Sao蛋白及其抗血清的制备
- 目的制备2型猪链球菌表面抗原-(Surface antigen one,Sao)重组蛋白及其兔抗血清。方法 PCR扩增2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中的sao基因,构建重组表达质粒pET28a-sao,转化E...
- 潘秀珍刘文静李先富王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌原核表达
- 文献传递
- 2型猪链球菌中国强毒株znuA基因的原核表达及免疫学活性分析被引量：7
- 2010年
- 目的克隆2型猪链球菌高亲和力锌吸收蛋白(High-affinity zinc uptake system protein,ZnuA)编码基因并进行原核表达,研究ZnuA蛋白的免疫学活性。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因znuA,构建重组表达质粒pET32a::znuA,转化E.coli BL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;Western blot检测ZnuA蛋白的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA检测多抗血清效价。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;Western blot结果表明ZnuA蛋白具有良好的免疫原性;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的多抗血清。结论在原核系统中成功地表达了znuA基因编码的蛋白,且ZnuA重组蛋白具有良好的免疫原性,为进一步研究znuA基因在猪链球菌致病过程中的作用以及猪链球菌疫苗的开发奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿李先富刘文静郑峰王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌
- 2型猪链球菌锌转运蛋白A对小鼠免疫保护作用被引量：3
- 2012年
- 目的研究猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)锌转运蛋白A(ZnuA)对小鼠接种致死量2型猪链球菌(S.suis 2)菌株的免疫保护作用,为进一步研究S.suis 2亚单位疫苗奠定实验基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测znuA基因在不同血清型S.suis中的分布情况;蛋白免疫印迹(western blot)检测ZnuA在S.suis 2的表达,利用流式细胞术对ZnuA进行细胞定位,动物实验研究ZnuA蛋白的免疫保护作用。结果除血清型17、21和30型菌株及荷兰分离株T15菌株外,其他30个血清型S.suis菌株、7996菌株以及3株S.suis 2型国内分离菌株基因组中均扩增到目的条带;S.suis 2菌体蛋白与兔抗ZnuA蛋白的血清能发生特异性反应;兔抗ZnuA血清标记S.suis 2的荧光强度明显较高;ZnuA重组蛋白免疫组小鼠死亡率较低。结论 ZnuA是一种具有免疫保护作用的蛋白,可作为S.suis的亚单位疫苗候选分子。
- 李先富潘秀珍韩明月刘文静王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用
- 2型猪链球菌OppA重组蛋白的制备及其免疫活性分析
- 本研究根据S.sui s 2 05ZYH33的oppA基因序列设计合成引物，用PCR法扩增出oppA基因，构建了重组表达质粒pQE30：：oppA。将其转化入E.coli M15中，筛选阳性转化子，IPTG诱导表达，产物...
- 潘秀珍刘文静邵珠卿李先富王长军
- 关键词：猪链球菌重组蛋白免疫活性
- 文献传递
- 2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33 sao基因敲除突变株的构建及其生物学功能被引量：1
- 2010年
- 构建2型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,S.suis 2)中国强毒株05ZYH33的sao基因敲除突变株。构建中间为壮观霉素抗性基因,两侧为sao编码基因上下游同源序列的基因敲除载体,同源重组筛选sao基因敲除突变株。PCR、RT-PCR、Western Blot对疑似突变株进行验证,实验结果均证实sao基因完全被spc抗性基因替代,成功构建了突变株05ZYH33-sao。对野生型菌株和突变株进行菌落溶血活性、生长特性、小鼠致病性比较,结果表明sao基因的敲除并未使野生型菌株在以上三方面产生明显的变化。筛选获得的05ZYH33 sao基因突变株为进一步研究sao基因在05ZYH33致病过程中的作用奠定了基础。
- 刘文静潘秀珍李先富王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌生物特性
