吴亦栋
- 作品数：58 被引量：293H指数：6
- 供职机构：浙江大学医学院附属儿童医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金浙江省科技计划项目浙江省科技厅项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 细菌16SrRNA基因荧光定量PCR诊断新生儿败血症被引量：22
- 2007年
- 目的探讨新生儿败血症的快速可靠诊断方法,以提高临床检测细菌的速度及准确性。方法以细菌16S rRNA 基因为靶序列,设计通用引物及 TaqMan 探针,建立细菌16S rRNA 基因实时荧光定量 PCR 反应体系;选择临床引起新生儿败血症的常见菌如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和大肠埃希菌等进行浓度梯度实验;对临床疑为新生儿败血症的830例感染性疾病的新生儿抽取静脉血分别做细菌16S rRNA 基因荧光定量 PCR 和血培养检测。结果临床常见分离株金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、大肠埃希菌荧光定量 PCR 检测结果均为阳性;巨细胞病毒、EB 病毒、乙肝病毒,新型隐球菌及白色念珠菌,人基因组 DNA 及空白对照均为阴性。细菌荧光定量 PCR 最低能检测到3个细菌,其荧光定量 CT 值为37.90;对临床疑为感染性疾病的830例患儿标本中,荧光定量 PCR 检测血标本阳性率5.18%(43/830),血培养阳性率2.41%(20/830),前者明显高于后者,差异具有统计学意义,P<0.01,30例非感染性疾病患儿血标本荧光定量 PCR 检测及细菌培养均为阴性。若以血培养作为对照,荧光定量 PCR 方法的诊断敏感性为100%,特异性为97.16%,正确诊断指数为0.972。结论建立了细菌16S rRNA 基因荧光定量 PCR 诊断新生儿败血症方法。其检测快速、简便,为新生儿败血症提供早期、敏感的病原学诊断依据。
- 吴亦栋尚世强李建平杨祖钦郑之北杜立中赵正言
- 关键词：败血病聚合酶链反应
- 细菌革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒
- 本实用新型提供一种革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒，由定量PCR反应液1、革兰阳性标准品2、革兰阴性标准品3、阳性对照品4、阴性对照品5、细菌DNA抽提裂解液6、盒体8组成。盒体8设有容器孔，分别放置PCR反应液管、...
- 吴亦栋尚世强赵正言
- 文献传递
- 16SrRNA基因PCR加基因芯片杂交快速诊断新生儿败血症被引量：33
- 2004年
- 目的 探讨新生儿败血症的快速诊断方法。方法 (1)以 16SrRNA基因为靶序列 ,设计引物及寡核苷酸探针 ;将探针固定在特制的玻片上制作成基因芯片 ;(2 )对临床疑为细菌感染的 2 85例新生儿抽取静脉血分别做血培养和细菌 16SrRNA基因检测 :于血标本及脑脊液中抽提DNA后采用聚合酶链反应 (PCR)扩增 ,将扩增产物加样在基因芯片上杂交后进行激光扫描及读片。结果(1)PCR检测阳性率 5 96 % (17/2 85 )明显高于血培养的 2 81% (8/2 85 ) ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。若以确诊败血症作为对照 ,PCR的诊断敏感性为 10 0 % ,特异性为 96 75 % ,正确诊断指数为 0 96 8。(2 )对 17份PCR阳性标本进一步做基因芯片杂交 ,结果通用探针均阳性 ,其中G+ 探针阳性 12份、G-探针阳性 5份 ;8份PCR和血培养均阳性的标本 ,基因芯片杂交探针阳性菌株与血培养细菌阳性结果完全一致。结论 基因芯片杂交技术检测临床标本中 16SrRNA基因能快速诊断新生儿败血症 ,除较血培养等方法有更好的敏感性和特异性外 ,还能快速明确系何种病原菌感染 。
- 童美琴尚世强吴亦栋赵正言
- 关键词：血培养新生儿败血症16SRRNA基因PCR检测快速诊断方法杂交技术
- 细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒
- 本实用新型提供的细菌实时荧光定量聚合酶链反应检测试剂盒由PCR反应液1、标准品2、阳性对照品3、阴性对照品4、抽提裂解液5、操作说明书6、包装盒体7组成。盒体7设有容器孔，分别放置PCR反应液管1、标准品2、阳性对照品3...
- 尚世强吴亦栋赵正言
- 文献传递
- DSS诱导溃疡性结肠炎大鼠模型肝脏紧密连接蛋白的表达改变被引量：5
- 2012年
- 目的研究实验性溃疡性结肠炎模型中肝脏紧密连接蛋白的表达以及肝脏功能和组织学的变化。方法将SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组经饮水途径连续6 d给予3%葡聚糖硫酸钠(DSS)后自由饮水2周;苏木精-伊红(HE)染色分析肝脏和结肠的组织学变化;生化分析检测血清中丙氨酸转氨酶、天门冬氨酸转氨酶、总胆红素、碱性磷酸酶水平,实时定量逆转录聚合酶链反应检测大鼠肝组织紧密连接蛋白的表达。结果与对照组比较,DSS处理后大鼠体质量下降,差异有统计学意义(P<0.05);结肠变短,差异有统计学意义(P<0.01);黏膜溃疡、糜烂和炎症细胞浸润,炎症在第14天左右达到峰值,后逐渐缓解;DSS处理组血清ALT显著升高,肝重量显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01);部分DSS处理大鼠肝组织点状出血、炎症细胞浸润和局灶性肝细胞脂肪变性,但是总体水平差异无统计学意义;DSS大鼠肝脏occludin、claudin3 mRNA表达水平差异无统计学意义,ZO-1、claudin1、claudin2 mRNA表达显著下降(P<0.01),claudin7 mRNA明显增加(P<0.05)。结论短期DSS干预结合饮水2周诱导的大鼠结肠炎模型有急性损伤、慢性修复的特点;此外DSS处理大鼠出现ALT升高以及紧密连接复合体蛋白表达转录发生改变,提示DSS诱导的大鼠溃疡性结肠炎模型伴肝细胞损伤和肝脏屏障功能受损。
- 饶艳霞陈洁吴亦栋顾伟忠
- 关键词：葡聚糖硫酸钠溃疡性结肠炎
- 光疗对新生儿节律基因Bmal1和cry1表达的影响
- 蓝光常用于治疗新生儿黄疸。未结合胆红素经光氧化分解为无毒的水溶性衍生物而易于从胆汁和尿液排出体外。昼夜节律是生物体内源性产生的接近于24小时的周期性节律,前下丘脑视交叉上核(suprachiasmatic nuclei,...
- 陈安杜立中徐亚萍陈黎勤吴亦栋
- 文献传递
- 先天性甲状腺功能减低症汉族儿童的促甲状腺素受体基因失活突变被引量：5
- 2007年
- 目的探讨汉族儿童促甲状腺素受体(TSHR)基因失活突变与先天性甲状腺功能减低症(cH)的相关性。方法(1)选择79例 CH 汉族儿童(亚临床甲减14例,年龄1～5.5岁,男8例,女6例;甲减65例,年龄1.5～6岁,男27例,女38例)为研究对象;100名正常儿童(男40例,女60例,年龄1～8岁)作为对照组。(2)采用 PCR 和 DNA 测序技术检测 TSHR 基因失活突变。结果(1)79例 CH 患儿中有1例发生复合杂合子突变,其突变位点为(Pro52Thr/Val689Gly)。1例发生杂合子突变,其突变位点为(Gly245Ser)。30例患儿在第10外显子2181位核苷酸处发生 C-G 转换(GAC-GAG),使727位密码子天冬氨酸被谷氨酸代替(Asp727Glu)。47例患儿在第7外显子561位核苷酸处发生 T-C 转换(AAT→AAC),相应的187位氨基酸(Asn)不发生改变。(2)33例正常对照儿童在第10外显子2181位核苷酸处发生 C-G 转换;50例正常对照儿童在第7外显子561位核苷酸处发生 T-C 转换(AAT→AAC)。结论浙江汉族 CH 患儿 TSHR 基因有3个杂合子突变位点:(Pro52Thr)、(Gly245Ser)、(Val689Gly),第10外显子2181位核苷酸处(GAC→GAG)及第7外显子561位核苷酸处(AAT→AAC)存在 TSHR 基因多态性。
- 袁哲锋罗燕斐吴亦栋沈征赵正言
- 关键词：甲状腺功能减退症受体促甲状腺素
- 非复制型腺病毒携带miR-1的表达诱导肝癌细胞凋亡被引量：2
- 2013年
- miR-1在多种肝癌细胞中被甲基化沉默,导致其下游多个癌基因MET,FoxP1,HDAC4等大量表达,促进了肝癌的增殖.本研究利用非复制型腺病毒Ad-easy携带miR-1(Ad-miR-1)在肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2中过表达miR-1,探讨miR-1抑制肝癌细胞的作用机制.结果表明,肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2中miR-1表达水平极低,感染Ad-miR-1后miR-1表达水平显著上升.肝癌细胞PLC/PRF/5和HepG2感染Ad-miR-1后,MET和FoxP1的mRNA水平和蛋白表达水平被显著下调,细胞凋亡水平显著增加,肝癌细胞的增殖被抑制.可见,miR-1在肝癌细胞中可能是一个重要的抑癌因子.同时,利用腺病毒载体携带抗癌的microRNA(如miR-1),也为今后的基因治疗研究提供了一种新方法.
- 李伟王秀敏吴亦栋陈学军魏旭斌楼金吐彭朝阳董敖杨樱之尚世强
- 关键词：MIR-1肝癌细胞凋亡
- 细菌革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒及用途
- 本发明提供一种革兰双检实时荧光定量PCR检测试剂盒，由定量PCR反应液1、革兰阳性标准品2、革兰阴性标准品3、阳性对照品4、阴性对照品5、细菌DNA抽提裂解液6、盒体8组成。盒体8设有容器孔，分别放置PCR反应液管、标准...
- 吴亦栋尚世强赵正言
- 文献传递
- 多重PCR--基因芯片技术检测多种人疱疹病毒
- 目的：建立可同时检测单纯疱疹病毒1型和2型(HSV-1、HSV-2)、水痘-带状疱疹病毒(VZV)、人巨细胞病毒(CMV)、爱泼斯坦-马尔病毒(EBV)和人类疱疹病毒6型(HHV-6A、HHV-6B)等多种人疱疹病毒的多...
- 郑之北俞锡林吴亦栋尚世强
- 关键词：多重PCR基因芯片检测临床早期诊断
- 文献传递
