周冰
- 作品数：5 被引量：5H指数：1
- 供职机构：北京市药品不良反应监测中心更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
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- 树鼠句膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1cDNA和蛋白质结构分析及其组织表达
- 2007年
- 目的获得不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的膜转运蛋白ATP结合盒转运体A1的cDNA和蛋白质序列,鉴定其组织分布,探讨其是否参与树鼠句独特的高密度脂蛋白代谢。方法以树鼠句肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术,获得树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列并推导出其氨基酸序列,应用实时聚合酶链反应技术分析树鼠句ATP结合盒转运体A1 mRNA在各组织中的分布情况。结果获得的树鼠句ATP结合盒转运体A1 cDNA序列全长为7 762 bp,其中开放阅读框架6 786 bp,编码2 261个氨基酸的蛋白。该蛋白与人ATP结合盒转运体A1的长度相同,二者在氨基酸水平上高度同源(95%)。多组织表达谱显示树鼠句ATP结合盒转运体A1在多种组织中广泛表达,其中表达量最高的依次为肺脏、肝脏、肾脏和脾脏,这与人和小鼠ATP结合盒转运体A1在肝中高表达而在肺和脾中低表达的分布有很大差异。结论树鼠句ATP结合盒转运体A1组织表达谱的特点有可能增加其在体内的浓度和数量,从而可能间接增加高密度脂蛋白的合成。
- 周冰曾武威刘惠荣孙国涛吴钢薛红陈保生
- 关键词：分子生物学蛋白质序列高密度脂蛋白
- 膜转运蛋白ABCA1的结构与功能被引量：1
- 2004年
- 膜转运蛋白ABCA1可以将包括胆固醇、磷脂在内的多种物质由细胞内转运至胞外 ,发挥抗动脉硬化的功能 ,它的突变可以导致严重的HDL缺乏综合征。该文就ABCA1的结构与功能关系 ,作用机制 。
- 周冰曾武威陈保生
- 关键词：膜转运蛋白ABCA1胆固醇逆向转运单核苷酸多态
- 人磷脂转移蛋白的原核表达及其抗体的制备与鉴定
- 2008年
- 目的利用大肠杆菌表达人磷脂转移蛋白(PLTP),制备兔抗人PLTP的多克隆抗血清。方法采用RT-PCR技术,将人PLTP蛋白编码序列克隆入pET-30b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备PLTP抗血清。用间接ELISA法、Western blot、细胞免疫荧光检测对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果SDS-PAGE分析表明,PLTP基因在大肠杆菌BL21(DE3)菌株的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为3h;将纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶256000;Western blot及细胞免疫荧光检测显示,抗血清可以与PLTP原核及真核表达蛋白特异结合。结论成功地将PLTP进行了原核表达,制备了高效价、高特异性的兔抗人PLTP抗血清,为PLTP的临床检测及其结构与功能的进一步研究提供了有力工具。
- 刘惠荣吴刚周冰申乐薛红陈保生
- 关键词：原核表达抗体
- 人胆固醇酯转运蛋白的cDNA克隆、原核表达及抗血清制备被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆人胆固醇酯转运蛋白(CETP)cDNA序列,利用大肠杆菌表达人CETP,制备兔抗人CETP的多克隆抗血清。方法:采用RT-PCR方法,将人CETP基因克隆到pET-30b(+)上,构建CETP原核表达载体并转化大肠杆菌,IPTG诱导表达,切胶纯化蛋白后免疫家兔,制备CETP抗血清,以ELISA、Western blot、细胞免疫荧光方法对抗血清效价及特异性进行鉴定。结果:SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CETP基因在大肠杆菌BL21(DE3)的包涵体中高效表达,最佳诱导表达时间为4h。将切胶纯化的蛋白免疫家兔,ELISA法测定的抗血清效价为1∶5.12×105。Western blot及细胞免疫荧光检测结果显示,抗血清可以与CETP原核及真核表达蛋白特异结合。结论:成功地将CETP进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗人CETP抗血清,为进一步研究CETP的结构与功能奠定了基础。
- 刘惠荣曾武威周冰申乐吴刚薛红陈保生
- 关键词：胆固醇酯转运蛋白原核表达抗血清
- 树鼩脂蛋白脂肪酶的cDNA克隆、组织分布及活性测定被引量：3
- 2007年
- 目的了解不易感动脉粥样硬化动物树鼠句的脂蛋白脂肪酶的结构和活性特点,并与其它种属比较,探讨脂蛋白脂肪酶在树鼠句独特脂代谢中的作用。方法以树鼠句脂肪细胞mRNA反转录获得的cDNA一链为模板,应用SMART-RACE技术获得树鼠句脂蛋白脂肪酶的cDNA序列并推导出其氨基酸序列;实时定量PCR方法检测树鼠句脂蛋白脂肪酶mRNA在各组织中的分布;真核表达树鼠句和人脂蛋白脂肪酶蛋白,放射性同位素法测定二者的活性并比较。结果树鼠句脂蛋白脂肪酶cDNA序列全长为3293bp,其中编码区1437bp,编码20个氨基酸的信号肽和458个氨基酸的成熟蛋白,该成熟蛋白N-端比人脂蛋白脂肪酶多10个氨基酸。树鼠句脂蛋白脂肪酶与其它哺乳类动物的氨基酸序列同源性大于90%,功能域高度保守。树鼠句脂蛋白脂肪酶的组织表达谱比较广泛,在心肌和脂肪组织中大量表达,但在骨骼肌中未检测到,却在肝脏中有中低水平表达,与人脂蛋白脂肪酶在这两种组织中的表达相反。活性测定结果显示,树鼠句脂蛋白脂肪酶活性显著高于人(7.67倍),这与测定的树鼠句血浆低甘油三酯水平相符。结论树鼠句的高活性脂蛋白脂肪酶可能是其血浆低水平甘油三酯的主要原因。
- 周冰曾武威孙国涛刘惠荣吴钢薛红陈保生
- 关键词：分子生物学脂蛋白脂肪酶甘油三酯
