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周恩民: 作品数：206 被引量：157H指数：6; 供职机构：西北农林科技大学更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>

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一种特异性结合PRRS病毒非结构蛋白Nsp4纳米抗体及其应用: 本发明涉及一种PRRS病毒非结构蛋白Nsp4的纳米抗体，同时公布了该纳米抗体的氨基酸序列以及编码该纳米抗体的DNA序列。本发明还提供了一种慢病毒载体，其可以将上述纳米抗体基因导入宿主细胞使其发挥抗病毒功能。本发明的Nsp...; 周恩民刘红亮; 文献传递

PRRSV GP5蛋白抗独特型单链抗体的构建表达及鉴定被引量：1: 2011年; 为制备只包含抗体可变区片段(Fv)的MAb2-5G2单链抗体(scFv),本研究从分泌MAb2-5G2的杂交瘤细胞中提取总RNA,反转录制备cDNA作为模板扩增重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因。以VH-linker-VL的形式通过重叠PCR制备scFv基因,构建重组表达质粒pEasy-scFv,并在大肠杆菌中获得正确表达。通过western blot和间接免疫荧光鉴定表明scFv蛋白能够被兔抗MAb2-5G2的抗体(Ab3)识别,复性后的scFv蛋白能够特异性结合Marc-145细胞。该研究结果为进一步明确MAb2-5G2结合Marc-145细胞功能区域奠定了物质基础。; 于颖王刚宋腾飞孔宁马晓春姚永红肖一红周恩民; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征抗独特型抗体单链抗体

一种猪病原或外源性蛋白特异性抗原肽筛选和鉴定的方法: 本发明通过对免疫原（病原或蛋白抗原）上的有效抗原肽序列进行筛选，去除免疫原中对机体不具有免疫活性（即不能激活机体适应性免疫应答）的无用肽段，筛选出免疫活性较强，可高效刺激机体产生免疫应答的抗原肽。抗原肽相对于原始免疫原，...; 武春燕南雨辰周恩民张琨

禽戊型肝炎病毒衣壳蛋白多克隆抗体的制备及其在乳酸乳球菌中的表达: 2017年; 将编码禽戊型肝炎病毒(a HEV)衣壳蛋白的ORF2基因片段克隆入原核表达载体p ET-30a(+)中,构建重组质粒p ET-30a(+)-ORF2。质粒经鉴定正确后转化入大肠杆菌Rosseta中筛选阳性菌,阳性菌经IPTG诱导后检测目的蛋白表达情况。用表达的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,应用间接ELISA检测抗体效价。将衣壳蛋白主要抗原区域ORF2Δ250(251~606 aa)基因片段克隆入乳酸菌表达载体p TX8048中获得阳性质粒p TX8048-ORF2Δ250,质粒电转化入宿主菌Lactococcus lactis NZ9000中筛选阳性菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lact is NZ9000。阳性菌经Nisin诱导后采用West ern-blot检测目的蛋白表达情况。结果表明,a HEV衣壳蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达,制备的多克隆抗体效价为1∶216。重组菌p TX8048-ORF2Δ250/L.lactis NZ9000经Nisin诱导后,Western-blot检测到约55 ku的目的蛋白。上述研究结果将为鸡戊型肝炎乳酸菌疫苗研究提供参考。; 黄宇晨张跃马春丽王芬张丽丽高铭扬周恩民马德星; 关键词：ORF2 多克隆抗体乳酸乳球菌

PRRSV GP5蛋白抗独特型抗体的单链可变区片段(SFv)转导MARC-145后抑制PRRSV感染的研究: 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种全球性猪传染病,已成为威胁世界养猪业的主要疫病之一.PRRSV感染宿主细胞是一个多步骤且需要多种细胞受体参与的过程.本实验室前期研究以免疫网...; 李琼毅王向鹏刘红亮黄柏成王承宝李治军周恩民; 关键词：结构蛋白抗独特型抗体; 文献传递

一起大熊猫感染犬瘟热的诊断: 2022年; 2015年陕西大熊猫人工圈养种群有6只大熊猫相继出现抽搐、口吐白沫及严重的神经症状,其中5只死亡。为研究引起大熊猫死亡的病因,采集样本进行了实验室检测,并对1例病死大熊猫进行了病理剖检。初检使用犬瘟热病毒快速检测卡,检测结果为阳性。大体病理学观察发现病死大熊猫爪垫变厚开裂,皮下淋巴结肿大,气管和肺泡腔内有泡沫状黏液渗出,肺脏淤血、出血和切面呈大理石样花纹表现,脑组织淤血,可见有大小不一出血点。脾头部位肿大,脾头边缘可见小的梗死灶。病理组织学观察可见肺脏小血管和肺泡壁毛细血管扩张,充满红细胞,肺泡腔内浆液渗出,细支气管上皮脱落。大脑白质空泡化,神经细胞核内可见包涵体,小胶质细胞增生。脾脏淋巴细胞明显减少。犬瘟热病毒实时荧光检测结果呈阳性。综合分析患病大熊猫的临床症状及病理变化,确诊大熊猫种群感染了犬瘟热病毒。提示应加强犬瘟热的预防,提高大熊猫的免疫力。; 张丹辉马军权沈洁娜刘宝元周恩民; 关键词：大熊猫犬瘟热

血红素加氧酶-1代谢产物CO抑制PRRSV复制的研究: 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的,对全球养猪业造成重大经济损失的猪重要传染病.我们前期研究表明,诱导和过表达血红素加氧酶l (HO-1)均能够显著抑制PRRSV在PAM及Mar...; 张昂克蒲锋星李娜刘红亮肖书奇周恩民

抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染策略: <正>引言猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV(感染所致的猪繁殖与呼吸综合征已对全球养猪业造成巨大经济损失。自发现PR...; 杜涛峰南雨辰肖书奇周恩民; 文献传递

猪繁殖与呼吸综合症病毒Nsp9单域抗体库的构建: 为了制备特异性针对PRRSV Nap9的并且可以抑制病毒感染的纳米抗体，构建了针对Nsp9的双峰驼重链抗体可变区抗体文库。首先利用pET28a载体构建了Nsp9全长的原核表达载体，并将其导入BL21表达菌中。...; 刘红亮王妍肖书奇徐乐周恩民; 关键词：猪繁殖与呼吸综合症病毒非结构蛋白血清学检测; 文献传递

猪戊型肝炎病毒血清抗体间接ELISA检测方法的建立与应用被引量：6: 2018年; 由于猪戊型肝炎病毒(hepatitis E virus,HEV)可跨种属感染人,因此,猪群中猪HEV感染的监测对于该病的防控和公共卫生都具有重要的意义。本试验旨在建立一种检测猪HEV抗体的间接ELISA方法,以原核表达纯化截短的猪HEV衣壳蛋白为包被抗原,优化条件,确定最佳试验条件,并分析该方法的敏感性、特异性、重复性,以及与商品化试剂盒的符合率,评价其临床应用价值。SDS-PAGE和Western blot结果证明抗原蛋白获得正确表达与纯化,并且具有良好的反应原性,可以作为后续建立ELISA方法的包被抗原。通过优化ELISA条件,最终确定抗原最佳包被量为200ng·孔-1,血清最佳稀释度为1∶200,包被缓冲液为碳酸盐缓冲液(pH 9.6),封闭液为2.5%的脱脂奶粉,阴阳性判定的临界值为OD450nm≥0.296。该间接ELISA方法的特异性和敏感性良好,板内和板间变异系数均小于10%,与北京万泰商品化试剂盒符合率为91.2%。临床应用表明,该方法可应用于猪HEV感染猪后抗体消长以及临床猪血清抗体的检测。因此,本研究建立的猪HEV抗体间接ELISA检测方法具有较好的敏感性和特异性,准确率较高,该方法适用于临床猪血清样品的检测和猪HEV感染血清流行病学的调查。; 丁军赵晓静虞楷锐周天明李慧霞盛亚敏陈宜阳刘宝元孙亚妮周恩民赵钦; 关键词：猪戊型肝炎病毒间接ELISA 抗体

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