国风
- 作品数：38 被引量：90H指数：5
- 供职机构：苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金苏州市科技发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前列腺癌细胞中核因子κB家族成员调控乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂表达的机制
- 2012年
- 目的探讨核因子κB（NF—κB）家族成员（RelA、pSO、RelB和p52）调控抑癌基因乳腺丝氨酸蛋白酶抑制剂（Maspin）表达的可能机制。方法采用Westernblot法检测前列腺癌细胞株DUl45、PC-3和LNCaP中NF-κB家族成员和Maspin蛋白的表达情况。采用RNA干扰技术结合Westernblot法，检测RelB或RelA沉默对前列腺癌DUl45细胞中Maspin蛋白表达的影响。采用流式细胞术检测RelB沉默后前列腺癌DUl45细胞的死亡情况。通过转染RelB表达质粒并建立稳定表达细胞株，观察过表达RelB对前列腺癌PC-3细胞中Maspin蛋白表达的影响。结果RelA、pSO、RelB和p52蛋白在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株DUl45和PC-3中呈持续性高表达，其中RelB蛋白在DUl45细胞中的表达最为显著。Maspin蛋白在LNCaP和DUl45细胞中低表达，而在PC-3细胞中高表达。在DUl45细胞中，沉默RelB可以诱导Maspin蛋白表达上调，同时促进细胞死亡[死亡率为（13．3±4．2）％]。在PC．3细胞中，过表达RelB可抑制Maspin的内源性表达。RelA沉默对DUl45细胞中Maspin蛋白的表达无显著影响。结论在雄激素非依赖型前列腺癌细胞株中，NF-κB经典与非经典通路蛋白持续性活化，RelB与Maspin的表达呈负相关性。RelB负性调控了内源性Maspin的表达，进而影响了前列腺癌细胞的存活。RelA并不参与对Maspin表达的调控。
- 马亮沈雅颖周鹏周珺国风
- 关键词：核因子ΚB
- 逆转录病毒双顺反子策略有效转导和共表达ALDH1基因与mdr1基因的研究被引量：1
- 2001年
- 目的 研究含内在核糖体进入位点 (IRES)的逆转录病毒双顺反子载体介导的醛脱氢酶基因 (ALDH1 )与多药耐药基因 (mdr1 )转导和共表达。方法 以携带ALDH1与mdr1基因的重组逆转录病毒双顺反子G1Na ALDH1 IRES mdr1 (G1Na AIM)为载体 ,电穿孔法转导双嗜型包装细胞PA3 1 7,长春新碱筛选 ;所得病毒生产细胞PA3 1 7 AIM与单嗜型包装细胞GP +E86乒乓感染提高病毒滴度 ;以重组病毒上清转染K562细胞 ,应用聚合酶链反应 (PCR)和Southernblot检测转移基因的整合 ,流式细胞术(FCM)及MTT分析基因表达 ,集落培养法测定转导效率。结果 双嗜型病毒上清滴度达 1 .0× 1 0 5cfu ml。基因修饰细胞K562 AIM经PCR和Southernblot证实双基因稳定整合至基因组 ,对 4 氢过氧化环磷酰胺 ( 4 HC)及长春新碱 (VCR)耐药 (提高 3～ 1 0倍 ) ,FCM及集落法检测基因转导效率为 62 %～70 %。结论 逆转录病毒IRES双顺反子载体能引导不同类型的耐药基因有效共表达 ,可用于扩大耐药范围 ,进行体内显性选择。
- 阳小卫陈子兴王玮傅建新国风岑建农夏学鸣
- 关键词：逆转录病毒多药耐药基因MDRL基因
- 过表达miR-17—92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及机制被引量：3
- 2017年
- 目的探讨过表达miR-17-92基因簇对前列腺癌细胞生物学特性的影响及潜在机制。方法采用过表达miR-17-92基因的质粒转染包装细胞，并构建过表达miR-17-92基因簇的前列腺癌DU145-17-92细胞。采用xCelligence系统实时动态监测DU145-control和DU145-17-92细胞的生长能力，采用Ki-67抗原检测技术和原位末端转移酶标记技术（TUNEL）分别检测DU145-control和DU145-17-92细胞中细胞增殖和凋亡情况，采用流式细胞术分析DU145-control和DU145-17-92细胞的细胞周期，采用Western blot检测DU145-control和DU145-17-92细胞中凋亡相关蛋白和增殖相关蛋白的表达。结果xCelligence系统监测显示，从接种24 h后，DU145-17-92细胞的生长速度显著高于DU145-control细胞（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的Ki-67阳性细胞率分别为（56.57±1.68）%、（85.48±0.26）%和（90.85±2.08）%，DU145-17-92组的Ki-67阳性细胞率分别为（73.64±0.68）%、（93.43±1.23）%和（97.36±0.86）%，两组仅在培养24 h时差异有统计学意义（P〈0.01）。细胞培养24、48、72 h后，DU145-control组的细胞凋亡率分别为（6.76±0.09）%、（14.51±0.86）%和（20.73±1.64）%，DU145-17-92组的细胞凋亡率分别为（1.86±0.15）%、（7.90±0.40）%和（4.92±0.48）%，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。Western blot检测显示，DU145-control和DU145-17-92细胞中，Bcl-2家族促凋亡蛋白（BIM）的表达水平分别为0.83±0.00和0.16±0.00, 人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物（PTEN）蛋白的表达水平分别为0.91±0.00和0.13±0.00，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。过表达miR-17-92基因簇促进了蛋白激酶B（Akt）中丝氨酸473位点（p-Akt-473）的磷酸化，但对308位点（p-Akt-308）的磷酸化无明显影响。DU145-control和DU145-17-92细胞中磷酸化细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达水平分别为0.21±0.01和0.72±0.01，�
- 周鹏马亮周珺徐晶晶刘菲国风
- 关键词：细胞外调节蛋白激酶
- 非传统性NF-κB活性与TRAF3在霍奇金淋巴瘤细胞中的作用机制
- 目的:探讨非传统性NF-κB信号通路及肿瘤坏死因子受体相关分子(TRAF)-3在B细胞源性霍奇金淋巴瘤细胞中的作用,并试图对非传统性NF-κB信号通路在霍奇金淋巴瘤中异常活化作出合理解释。
- 国风孙爱宁王文娟周鹏陈子兴
- 文献传递
- 荧光原位杂交和免疫组织化学法检测乳腺浸润性导管癌中HER-2基因状态的研究被引量：5
- 2017年
- 目的比较荧光原位杂交(FISH)和免疫组织化学(IHC)两种方法检测乳腺浸润性导管癌人类表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增及与C-erb B-2蛋白表达结果的一致性。方法分别采用FISH和IHC法检测346例乳腺浸润性导管癌组织HER-2基因扩增和C-erb B-2蛋白表达,并对两种方法的结果进行统计学分析。结果 346例乳腺浸润性导管癌中,FISH检测HER-2基因扩增145例(41.9%),无扩增201例(58.1%)。IHC检测显示,C-erb B-2蛋白(-)7例,(+)30例,(++)227例,(+++)82例。按乳腺癌HER-2检测指南,(-)和(+)为阴性结果,(+++)为阳性结果,(++)为不确定病例。全组IHC检测C-erb B-2蛋白阳性表达率为23.7%(82/346)。IHC检测C-erb B-2蛋白(-)的7例患者经FISH检测无HER-2基因扩增,一致率为100.0%。IHC检测C-erb B-2蛋白(+)的30例经FISH检测25例无基因扩增,一致率为83.3%;227例(++)中有65例基因扩增,一致率为28.6%;82例(+++)中有基因扩增75例,一致率为91.5%。IHC和FISH检测HER-2状态的一致率为89.9%,具有高度一致性(Kappa值=0.768,P<0.001)。HER-2基因扩增与年龄、肿瘤大小、组织学分级及淋巴结转移均无关(P>0.05)。结论 IHC和FISH法检测乳腺浸润性导管癌HER-2表达状态有高度一致性。IHC可以作为初步筛查乳腺浸润性导管癌HER-2基因状态的首选检测方法,对于IHC检测结果为(++)的标本建议采用FISH法进一步明确HER-2基因扩增状态。
- 戴菡珏陈昊朱卫东徐晶晶郭凌川国风
- 关键词：乳腺浸润性导管癌C-ERBB-2蛋白
- TRAF1在霍奇金淋巴瘤细胞中的表达和作用机制的探讨被引量：1
- 2010年
- 目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子（TRAF）1以及CD30-TRAF1信号通路在B细胞性霍奇金淋巴瘤细胞中的作用。方法分别采用荧光定量RT—PCR和Westernblot法检测B细胞性霍奇金淋巴瘤细胞株TRAF1mRNA和蛋白质表达水平，并进一步研究CD30信号活化对TRAF1表达的作用。采用RNA干扰技术研究TRAF1沉默对霍奇金淋巴瘤细胞存活的影响，并通过TransAM方法定量分析核转录因子（NF）-κB的DNA结合活性的变化。通过Westernblot法测定NAPK／ERK信号通路中JunB蛋白的表达。结果B细胞性霍奇金淋巴瘤细胞株IA28和KM—H2细胞中TRAF1在mRNA和蛋白质水平均表达。CD30配体作用后IA28细胞中TRAF1mRNA相对表达水平自3．50±0．20上调至7．26±0．23；蛋白相对表达水平自2．31±0．35上升至4．53±0．55。TRAF1沉默后凋亡细胞百分率由（5．7±1．2）％上升至（27．7±5．8）％，并伴随p50和RelA活力的下降。JunB的表达在TRAF1沉默细胞中未发生明显变化。结论TRAF1在B细胞系来源的霍奇金淋巴瘤细胞中表达增加，并受到CD30信号通路活化的调控。TRAF1为介导经典性NF—κB活性的关键性调节分子，参与霍奇金淋巴瘤细胞的抗凋亡活性。
- 王文娟国风孙爱宁周鹏马亮
- 关键词：霍奇金病CD30
- RelB在蛋白酶体抑制剂诱导的maspin表达中的作用研究被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨前列腺癌细胞中,核转录因子NF-κB家族成员之一RelB在蛋白酶体抑制剂作用下maspin蛋白表达调控中的作用机制。方法:采用Western blotting法检测前列腺癌细胞中内源性及蛋白酶体抑制剂MG-132作用下RelA、RelB和maspin的蛋白表达;采用免疫组化法检测前列腺癌组织中RelB和maspin的表达情况;通过转染小分子RNA至前列腺癌细胞中沉默RelB的表达;采用Western blotting法检测RelB沉默对MG-132诱导的maspin蛋白表达情况的影响;PI染色法结合流式细胞术检测细胞死亡率。结果:雄激素非依赖型前列腺癌细胞DU145中RelB表达增强而maspin表达明显降低。在检测的10例前列腺癌组织样本中,恶性度高(Gleason评分4-5)的样本普遍同时存在胞核内RelB强染色和maspin表达缺失。MG-132作用DU145细胞24 h后RelB在胞浆和胞核中表达水平下调,伴随着maspin在胞核内的表达上调。MG-132处理RelB表达沉默的DU145细胞8和24 h后,maspin的表达无明显变化,而RelA蛋白的表达水平呈时间依赖性的下调。结论:在雄激素非依赖型前列腺癌细胞和晚期前列腺癌组织中,maspin与RelB的表达呈负相关性。蛋白酶体抑制剂诱导maspin的表达上调过程中,RelB是重要的调控因子。
- 国风郭凌川沈雅颖顾冬梅朱卫东康苏娅
- 关键词：蛋白酶体抑制剂RELBMASPIN前列腺肿瘤
- 标记基因示踪小鼠骨髓移植后的体内造血重建的研究
- 目的:用Neor标记基因示踪动物体内造血重建.方法:通过逆转录病毒载体将Neor标记基因导入BALB/C小鼠的骨髓细胞,并移植至受亚致死剂量60Coγ-射线全身照射后的BALB/C小鼠体内.集落法检测转导率.15天后,观...
- 岑建农陈子兴国风傅建新王玮
- 关键词：造血重建体内示踪骨髓移植转基因技术
- 文献传递
- 微小RNA-375在腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术治疗2型糖尿病疗效评估与预测中的作用
- 目的 探讨微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)在腹腔镜Roux-en-Y胃旁路术(laparoscopic Roux-en-Y gastric bypass,LRYGB)治疗2型糖尿病疗效评估与...
- 殷骏朱政国风毛忠琦
- miR-17-92基因簇增强前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂的耐药性被引量：3
- 2017年
- 背景与目的:mi R-17-92基因簇与多种疾病的发生密切相关,其在肺癌、肝癌、胃癌和前列腺癌等多种肿瘤细胞中均高表达。本研究利用慢病毒包装系统建立稳定高表达mi R-17-92基因簇的DU145细胞株,探讨mi R-17-92基因簇对前列腺癌DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的影响。方法:构建高表达mi R-17-92基因簇的表达载体,转染DU145细胞株,同时转染空载体作为对照,并用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)进行鉴定。用x CELLigence系统监测细胞的迁移、侵袭能力及顺铂处理后的生长情况;通过划痕实验观察细胞的迁移情况;采用蛋白[质]印迹法(Western blot)、凝胶酶谱实验和RTFQ-PCR检测相关蛋白质和基因的表达以探讨mi R-17-92增强DU145细胞的迁移、侵袭能力及对顺铂耐药性的相关机制。结果:DU145-mi R-17-92细胞迁移速率和侵袭能力高于DU145-control细胞(P<0.01)。DU145-mi R-17-92细胞中整合素β1的蛋白质表达水平和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9,MMP-9)的活性显著高于DU145-control细胞。顺铂处理后,DU145-mi R-17-92细胞的生长速度自12 h起快于DU145-control细胞并呈顺铂耐药性(P<0.01)。细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)在DU145-mi R-17-92细胞中呈现持续高水平磷酸化,顺铂处理后,其磷酸化水平无明显变化。DU145-mi R-17-92细胞中切除修复互补交叉基因1(excision repair cross complementing1,ERCC1)的m RNA和蛋白质表达水平显著高于DU145-control细胞。结论:高表达mi R-17-92增强了DU145细胞的迁移、侵袭能力,其机制与整合素β1的表达上调及MMP-9活性增强有关。此外,高表达mi R-17-92增强了DU145细胞对顺铂的耐药性,该过程与ERK1/2的磷酸化水平增加和ERCC1的表达水平上调相关。
- 陈昊周鹏徐晶晶周珺国风
- 关键词：前列腺肿瘤迁移顺铂
