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Nurr1基因的克隆及其在C17.2神经干细胞中的表达被引量：2: 2003年; 目的 :通过克隆Nurr1基因并在神经干细胞中表达 ,探讨其对多巴胺能神经元生长、发育的影响 ,为治疗神经系统变性疾病 ,特别是帕金森病提供基因工程细胞。方法 :采用RT PCR (reversetranscription polymerasechainreaction)方法获取Nurr1cDNA ,并克隆至pcDNA3.1 hygro载体中 ,经酶切及测序鉴定正确 ;再将Nurr1基因经Lipofectamine2 0 0 0转染 ,在C17.2神经干细胞中稳定表达。结果 :经反转录多聚酶链反应 (RT PCR)及WesternBlot印迹分析、鉴定Nurr1基因mRNA及蛋白表达正确。结论 :Nurr1基因成功导入神经干细胞并表达 ,为实施基因工程细胞移植治疗PD奠定了基础。; 刘卫国陈生弟李彪陈琰孙秀陆国强; 关键词：NURR1基因基因克隆 C17.2神经干细胞基因表达帕金森病

中脑神经前体细胞的体外分离、培养和特性: 2002年; 为了解中脑神经前体细胞的体外培养特性和建立中脑神经前体细胞的体外分化调控机制提供细胞模型。本实验采用含有丝分裂源表皮生长因子(EGF)的无血清培养基培养来源于大鼠胚胎E14.5天的中脑神经前体细胞,应用免疫细胞化学方法了解其前体细胞特性。结果发现中脑神经前体细胞呈神经前体细胞特征性标记Nestin免疫染色阳性,无分化细胞标记;细胞克隆实验证实中脑神经前体细胞有自我更新能力;在EGF刺激下增殖迅速;当撤去EGF后置于含胎牛血清的培养基和被覆多聚赖氨酸(PLL)的培养皿内,中脑神经前体细胞可分化成神经元和星形胶质细胞。本试验证明我们培养的中脑神经前体细胞具有增殖、自我更新能力和多向分化潜能特性。; 孙秀陈生弟刘振国刘卫国梁粱徐洁懿; 关键词：中脑神经前体细胞体外分离细胞培养

IL-1α对神经前体细胞Nurr1基因的诱导表达被引量：3: 2003年; 目的 :了解中脑和纹状体神经前体细胞Nurr1基因的表达以及IL 1α对中脑神经前体细胞和纹状体神经前体细胞Nurr1基因的诱导表达作用。方法 :采用RT PCR ,WesternBlot和免疫荧光染色方法观察中脑和纹状体神经前体细胞内Nurr1mRNA和蛋白质的表达 ,采用半定量RT PCR方法观察IL 1α对中脑和纹状体神经前体细胞Nurr1mRNA的诱导表达作用。结果 :中脑和纹状体神经前体细胞均表达Nurr1mRNA和蛋白质 ,中脑神经前体细胞的Nurr1表达量多于纹状体神经前体细胞。IL 1α可诱导中脑神经前体细胞Nurr1mRNA的快速表达 ,IL 1α(10 0pg/mL)作用 1h后 ,Nurr 1mRNA表达增加 ,3h后Nurr1mRNA表达达到高峰 ,2 4h后恢复至基线水平。而纹状体神经前体细胞的Nurr1mRNA在IL 1α诱导后无明显变化。结论 :IL 1α可能通过Nurr1的过度表达促进中脑神经前体细胞向多巴胺能神经元方向分化。; 孙秀陈生弟刘振国刘卫国梁粱徐洁懿; 关键词：IL-1Α 神经前体细胞 NURR1基因基因表达多巴胺

Nurr1的分子结构、分布和生理功能研究进展: 2001年; Nurr1属于孤儿核受体的超家族 ,人类Nurr1基因位于 2号染色体 ,在中枢多巴胺能系统中高度表达 ,与中脑多巴胺能神经元的发育、存活密切相关。本文对Nurr 1的分子结构、分布及生理功能作一综述。; 孙秀陈生弟; 关键词：NURR1 分子结构生理功能孤儿核受体

Mes42细胞及细胞因子对中脑和纹状体神经前体细胞的分化作用被引量：3: 2002年; 了解中脑神经前体细胞和纹状体神经前体细胞在Mes4 2细胞及细胞因子作用下的体外诱导分化情况。采用含细胞因子或 /和Mes4 2细胞条件培养基和细胞膜碎片的分化培养基培养中脑神经前体细胞和纹状体神经前体细胞 ,孵育 7d后行免疫细胞化学染色了解其体外诱导分化情况。IL 1α(10 0pg/ml) ,IL 11(1ng/ml) ,GDNF(1μg/ml)和LIF(1ng/ml)可诱导中脑神经前体细胞分化成TH阳性神经元 ,增加分化的TH阳性细胞数目。Mes4 2细胞条件培养基和其细胞膜裂解碎片以及细胞因子IL 11,LIF ,GDNF ,IL 1α共同培养神经前体细胞 ,诱导分化的TH阳性细胞数目无明显增加 ,但TH阳性细胞的形态更趋成熟。而纹状体神经前体细胞在上述分化培养基内鲜见TH阳性细胞。中脑神经前体细胞可在体外被诱导分化成TH阳性神经元。; 孙秀陈生弟刘振国梁梁徐洁懿; 关键词：中脑神经前体细胞分化 IL-1Α 纹状体细胞因子

Neurturin和GFRα2研究进展被引量：1: 2001年; neurturin是胶质细胞源性神经营养因子家族 (GDNFfamily)成员之一 ,它的受体GFRα2通过糖基磷脂酰肌醇 (G PI)与细胞表面连接 ,neurturin与GFRα2结合后 ,酪氨酸激酶受体RET蛋白激活 ,引起一系列生物学效应。neurturin在促进多巴胺 (DA)能神经元存活、部分外周神经元和肠道神经丛的发育以及胶质细胞的分化方面发挥着重要的生理作用。; 孙秀陈生弟; 关键词：NEURTURIN 胶质细胞帕金森病

Prepro-neurturin基因的克隆及其在COS-7中的表达被引量：1: 2001年; Neurturin (NTN)是对多巴胺能神经元有营养、支持和保护作用的神经营养因子 ,是帕金森病治疗的潜在有效因子。本研究用RT PCR方法获取prepro neurturincDNA ,并克隆至pBluescriptⅡSK(+)载体中 ,经酶切及测序鉴定正确 ;再将prepro neurturin基因克隆至 pcDNA3真核表达载体中 ,经Lipofectamine转染 ,在COS 7细胞中瞬间表达 ,经NorthernBlot和WesternBlot印迹分析 ,鉴定其mRNA和蛋白表达正确。用表达NTN的条件培养基处理原代培养胚胎中脑神经元 ,发现其有促进神经元存活和发育功能。; 孙秀糜军陈生弟陈诗书; 关键词：多巴胺能神经元帕金森病 COS-7 基因克隆

FGF和EGF对神经干细胞增殖及分化的影响被引量：18: 2000年; 胚胎和成年哺乳动物脑内均存在神经干细胞。成纤维细胞生长因子 ( FGF)和表皮生长因子 ( EGF)对神经干细胞的增殖及分化有一定影响。 FGF和 EGF及其受体在胚胎期和成年期表达各异。 FGF和 EGF能促进神经干细胞增殖 ,在不同的条件下对分化的作用不同。; 孙秀陈先文陈生弟; 关键词：FGF EGF 神经干细胞细胞增殖分化

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孙秀