展德文
- 作品数：34 被引量：49H指数：4
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家科技重大专项国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- 细菌表面展示技术的应用研究进展被引量：11
- 2005年
- 细菌表面展示系统是微生物表面展示系统的一个重要分支。由于呈现载体灵活多样,可根据不同的需要呈现蛋白或多肽等特点,细菌表面展示技术近年来得到了迅猛发展,在重组细菌疫苗、抗原表位分析、全细胞催化剂、全细胞吸附剂、多肽库筛选等多个领域得到广泛应用。本文就细菌表面展示技术的应用研究作一综述。
- 刘向昕展德文张兆山
- 关键词：革兰氏阴性菌革兰氏阳性菌
- 一株无pX01和pX02质粒的炭疽杆菌菌株及其用途
- 本发明公开了一株无pX01和pX02质粒的炭疽杆菌菌株AP422，保藏号为CGMCC No.1569。炭疽芽孢杆菌CGMCC No.1569用于制备免疫制剂的用途。本发明的优点是：炭疽杆菌AP422毒性大大降低，同时又能...
- 展德文张兆山
- 文献传递
- 能在芽孢表面展示PAD4蛋白的炭疽芽孢杆菌及其应用
- 本发明公开了一株能在芽孢表面展示PAD4蛋白的炭疽杆菌株及其应用。该菌株，是将Pa4基因插入到炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthracis)芽孢蛋白bclA基因未端获得的菌株。具体可为炭疽芽孢杆菌(Bacillus...
- 展德文王艳春刘纯杰陶好霞袁盛凌王令春王芃
- 文献传递
- 一种KBMA炭疽疫苗候选株的研制被引量：1
- 2011年
- 炭疽病是由炭疽芽胞杆菌Bacillus anthracis引起的一种人畜共患传染病,严重影响着人类的健康。近年来在细菌疫苗的研究中发现一种特殊的现象:细菌被杀死后,体内的代谢活性却仍然维持(Killed but metabolically active,KBMA)。此发现为炭疽新型疫苗候选株的研制提供了新思路。先通过同源重组的方法,利用pMAD质粒和Cre-loxP重组酶系统完成对缺失两个毒性大质粒的炭疽芽胞杆菌减毒株AP422的uvrAB基因的敲除,得到AP422△uvrAB菌株,然后通过光化学处理(包括长波紫外光的照射和8-甲氧基补骨脂素处理),使炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB失去繁殖能力。利用四氮唑化合物MTS检测其代谢活性,表明光化学处理杀死后的炭疽芽胞杆菌AP422△uvrAB在至少4 h内维持一个很高的代谢活性水平,即具备典型的KBMA特性。炭疽杆菌AP422△uvrAB的KBMA菌株的成功研制为我们提供了一种新型炭疽疫苗候选株。
- 沈非袁盛凌展德文王艳春任敏陶好霞王芃王令春陈冬生刘纯杰
- 关键词：同源重组基因敲除8-MOPMTS
- 小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件的原核表达及多克隆抗体制备
- 2007年
- 目的:用原核表达的方法获得带有6个His标记的小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件的重组蛋白,并制备其多克隆抗体。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠心肌组织中扩增出小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件cDNA片段,将该片段与原核表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒pETLG1-3并转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组表达菌株。用IPTG诱导重组大肠杆菌BL21(DE3)/pETLG1-3表达,SDS-PAGE分析表明在相对分子质量60000处有特异性重组蛋白表达条带,并经Western印迹进一步鉴定。用含融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶颗粒免疫家兔,制备抗小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件多克隆抗体,ELISA方法检测抗体滴度。结果:从小鼠心肌组织中克隆了层粘连蛋白α5链LG3组件的基因,并在大肠杆菌得以表达和纯化;制备了重组蛋白的多克隆抗体,其滴度可达到1∶10240。结论:小鼠层粘连蛋白α5链LG1-3组件重组蛋白及其多克隆抗体的获得,为后续研究其功能打下了基础。
- 展德文张玉静刘昌袁盛凌刘纯杰张兆山
- 关键词：小鼠多克隆抗体
- 幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体的制备与鉴定被引量：4
- 2007年
- 目的:制备稳定分泌抗幽门螺杆菌尿素酶B单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞系,并对其分泌的mAb进行鉴定。方法:用初步纯化的重组幽门螺杆菌尿素酶B免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备抗尿素酶B的mAb,用间接ELISA检测mAb的特异性和亲和力,检测mAb腹水效价,鉴定Ig亚类并测定其抗原决定簇。结果:获得8株能稳定分泌抗尿素酶B的mAb杂交瘤细胞系,这8株单抗与能产生尿素酶的小肠结肠耶尔森氏菌、肺炎克雷伯氏菌和普通变形杆菌均无交叉反应,相对亲和力为1.13×10-8～4.66×10-10,腹水mAb效价可达2×104～3.2×105。其中2株单抗属IgG1亚类,3株单抗属IgG2a亚类。8株单抗分属于3种不同的抗原决定簇。结论:获得了IgG1和IgG2a类型的针对3种不同抗原决定簇的特异性幽门螺杆菌尿素酶B的mAb,为进一步用于幽门螺杆菌的临床诊断和实验研究创造了条件。
- 陶好霞刘向昕张兆山展德文袁盛凌刘纯杰
- 关键词：尿素酶B单克隆抗体幽门螺杆菌
- 幽门螺杆菌HspA亚基的表达与纯化
- 2005年
- 目的:利用原核表达载体高效表达幽门螺杆菌热休克蛋白A(HspA),并进行纯化. 方法:PCR扩增hspA基因,将其克隆至原核表达载体pET22b,pQE-60,pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌,经IPTG诱导后,SDS—PAGE分析表达.利用镍离子亲和层析对表达产物进行纯化.免疫印迹检测蛋白的抗原性. 结果:PCR扩增得到hspA基因,在载体pQE-60中以HspA和HspA-His6两种形式得到表达,表达量高达菌体总蛋白的40%以上.经镍离子亲和层析后,纯化率分别为88.63%和86.32%,但HspA—His6在纯化过程中发生降解.免疫印迹实验表明,HspA和HspA-His6都有很好的抗原性. 结论:实现了HspA蛋白的高效表达和纯化,为幽门螺杆菌HspA亚单位疫苗的免疫实验奠定基础.
- 刘秀丽张兆山陶好霞展德文刘纯杰
- 关键词：幽门螺杆菌A亚基HSPA免疫印迹检测纯化过程
- 幽门螺杆菌活菌载体疫苗及其专用重组菌
- 本发明涉及一种幽门螺杆菌活菌载体疫苗及其专用重组菌。该专用重组菌为重组福氏志贺氏菌(Sh.flexneri)，是将含有幽门螺杆菌尿素酶B亚单位和幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位的融合蛋白的编码基因导入福氏志贺氏菌(Sh.fl...
- 刘纯杰张兆山陶好霞王令春袁盛凌展德文王芃王艳春
- 文献传递
- 大肠杆菌表面CS3菌毛展示随机肽库的构建
- 2006年
- 目的:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面构建 10肽随机肽库．方法:首先将原有的单酶切CS3菌毛呈现载体改造为双酶切载体,并证实改造后的载体能正确形成CS3菌毛．同时设计合成2条寡核苷酸序列,链1含有1个10肽随机编码序列(NNS)10, 链2可与链1的3′端互补．两条链经过退火、延伸、酶切和回收与经过同样酶切的呈现载体连接,连接产物纯化后分多次电击转化,获得随机肽库．随机挑选10个克隆进行测序并对测序结果进行分析．结果:获得1个库容量为1．8×106大小的随机肽库．测序结果显示,所构建肽库的基本框架与预期设计相符,4个寡核苷酸出现的频率也与理论值相接近．结论:在肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛表面成功构建库容量为1．8×106大小的10肽随机肽库．为下一步利用肽库进行筛选奠定了基础．
- 刘向昕袁盛凌展德文郑继平刘纯杰王芃王令春张兆山
- 关键词：随机肽库
- 层粘连蛋白α/_5 LG1-3、LG2、LG3的cDNA克隆、表达及LG1-3蛋白多克隆抗体的制备
- 层粘连蛋白是哺乳动物细胞基质中一种主要糖蛋白，是基质的主要功能成分，也是胚胎发育中出现 最早的细胞外基质的成分。它在控制细胞的增殖、参与细胞的迁移，控制细胞分化，促进创伤修复方面起着传递信号的作用。层粘连蛋白与Ⅳ型胶原蛋...
- 展德文
- 关键词：小鼠克隆多克隆抗体
- 文献传递
