目的:构建A20和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)共表达的腺病毒载体,观察其对人单核-巨噬细胞系THP-1的影响.方法:PCR扩增目的基因片段A20,将目的基因与载体GV314连接获得重组穿梭质粒pGV314-A20,在DH5a感受态细胞中扩增,同源重组得到含有目的基因的腺病毒载体,转染293T细胞,包装成具有感染能力的共表达A20和EGFP的腺病毒颗粒,转染目的细胞THP-1,通过Western blot检测A20蛋白在THP-1细胞的表达,EILSA检测脂多糖(lipopolysaccharide,L P S)刺激T H P-1后其上清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)和白介素-6(interleukin-6,IL-6)的表达.结果:限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实重组载体构建成功,包装的腺病毒滴度达到1×1011 pfu/mL,感染了腺病毒后的293细胞出现了明显的气球样变,Western blot证实转染THP-1后A20蛋白表达显著增加,与空白组比较,THP-1上清中TNF-α和IL-6的表达下降,两者相比,有统计学差异(P<0.05).结论:成功构建A20与EGFP共表达腺病毒载体,能够在THP-1细胞表达,降低其炎性因子表达,为进一步研究其抗炎功能奠定基础.
目的探讨血清高迁移率族蛋白1(high mobility group-box protein 1,HMGB1)在重型肝炎患者中的表达水平及其临床意义。方法对32例乙型重型肝炎患者、22例慢乙肝初治患者、10例急性乙肝患者血清HMGB1水平进行检测分析,与16名健康人进行对照研究,分析其与患者肝功能生物化学指标的相关性。结果重型肝炎患者血清HMGB1水平高于健康人,差异具有统计学意义(P<0.05),重型肝炎组与慢乙肝初治组、重型肝炎组与急性乙肝组、慢乙肝初治组与急性乙肝组、慢性乙肝组与正常人组、急性乙肝与正常人组均无统计学意义(P>0.05),重型肝炎患者血清HMGB1水平与ALT水平呈正相关,差异具有统计学意义(r=0.942,P<0.05)。结论重型肝炎患者血清HMGB1水平较正常人高,可能成为评价重型肝炎的一个指标,这可能具有一定的临床意义。
