张春龙
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
- 供职机构：广东医学院更多>>
- 发文基金：广东省重大科技攻关项目广东省自然科学基金广东省工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- Mmu-miR-107与Cacna2d1基因3'UTR结合位点的预测及验证被引量：1
- 2015年
- [目的]预测并验证mmu-miR-107与Cacna2d1基因3'UTR的结合位点。[方法]生物信息学预测miR-107与小鼠Cacna2d1基因3'UTR的结合位点,将包含3个靶位点的3'UTR片段克隆至荧光素酶载体p GL3中,构建野生型p GL3-Cacna2d1-WT3'UTR载体;并用重叠延伸PCR技术构建分别含有单个突变位点的载体Mut1200-207、Mut2361-367、Mut3902-908和同时含有3个突变结合位点的载体Mut4plus。将各重组质粒与miRNA mimics共转染C2C12细胞,检测荧光素酶活性。[结果]与共转染p GL3-Cacna2d1-WT 3'UTR和miR-NC组相比,共转染p GL3-Cacna2d1-WT 3'UTR和mimics-miR-107组荧光素酶活性显著下降(P<0.01);与共转染对应的突变体和miR-NC组相比,转染突变体Mut2361-367/Mut3902-908和mimics-miR-107组的荧光素酶活性均下降(P<0.05);转染突变体Mut1200-2077/Mut4plus和mimics-miR-107组的荧光素酶活性下降不明显(P>0.05)。[结论]Cacna2d1基因3'UTR段双荧光素酶基因报告载体及突变体构建成功,初步证实miR-107与Cacna2d1 3'UTR的200-207位点结合。
- 阮杰翁亚光赵炜熊兴东张春龙李江滨刘桂平黄池荣付思莹刘新光
- 关键词：结合位点
- 浅谈学生主体性在医学检验专业开放式实验教学中的积极发展被引量：6
- 2008年
- 实验室是医学院校开展教学、科研的重要基地，通过开放实验室来实施医学检验专业的开放式实验教学，对创新教育的实施和培养实用型、复合型人才具有重要作用。现以主体性实验教学理论为指导，结合医学检验专业的学科特点，分别在理论和实践方面浅谈学生主体性在医学检验专业开放式实验教学中的积极发展。
- 张春龙何秋璟刘新光侯敢张志珍
- 关键词：学生主体性开放式实验教学医学检验专业
- 人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用被引量：2
- 2007年
- 目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%。结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。
- 任哲张美英王一飞朱钦昌张春龙陆大祥胡巢凤李久香张佩琢杨志荣
- 关键词：SIRNA
- 单纯疱疹病毒1型VP16蛋白和VHS蛋白研究进展被引量：2
- 2006年
- 张春龙王一飞张美英
- 医学检验专业开设Western Blotting综合性实验初探被引量：3
- 2007年
- 分子生物学是当前生命科学发展的主流，其理论与技术已广泛应用于各个领域。Western Blottlng作为分子生物学的常规技术，在医学领域具有不可忽视的地位。因此，在医学检验专业开设Western Blotting实验课程，已成为一项非常必要的实验教学内容。其一，Western Blotting实验是分子生物学与免疫学的有效结合体，有助于学生对前沿的、跨学科知识加深了解；
- 何秋璟张春龙侯敢
- 关键词：WESTERNBLOTTING
- siRNA干扰HSV-1 UL30 DNA聚合酶基因的研究
- 2008年
- 目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响。方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对HSV-1繁殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终形成的空斑直径分别比对照组减小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01)。结论:筛选到高效抑制UL30的3对siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,说明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延缓病斑的扩大和病斑数目的增长,对病毒的繁殖有一定的抑制效果。
- 张春龙何秋璟仁哲朱钦昌张美英刘秋英张佩琢王一飞
- 关键词：SIRNARNA干扰
- siRNA抑制单纯疱疹病毒1型UL30基因的研究
- 张春龙
- 关键词：单纯疱疹病毒1型
- HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆HSV-1 UL30 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。方法:从感染HSV-1F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜观察融合蛋白表达情况。结果:成功克隆出UL30 cDNA,序列对比显示与基因库中的HSV-1F株UL30序列同源性为99.4%;成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达。结论:成功克隆出UL30 cDNA,成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。
- 何秋璟张春龙仁哲张美英朱钦昌刘秋英张佩琢王一飞
- 关键词：分子克隆EGFP融合表达载体
- 限制性输液在腹部开放手术术后的应用研究
- 研究背景和目的：液体治疗策略一直是争论的焦点之一。数十年来对应激状态下的体液平衡观点和相应的输液管理不断发生变化,现在的输液观点多支持液体复苏,以补足术前禁饮禁食、肠道准备、失血、第三间隙效应引起的液体丢失和维持麻醉后循...
- 张春龙
- 关键词：限制性输液液体疗法围手术期腹部大手术术后并发症
- 文献传递
- siRNA干扰HSV1 gD糖蛋白基因的研究被引量：5
- 2007年
- 以HSV1 gD糖蛋白基因为靶点,设计合成5对siRNA,并构建pEGFP-N1-gD融合表达质粒,脂质体法共转染Vero细胞,利用绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的特征,流式细胞仪筛选特异沉默gD表达的siRNA。然后有效siRNA转染Vero细胞并感染HSV1,通过空斑减数实验,Real-time PCR和子代病毒滴度评价其对HSV-1感染的作用。结果显示siRNA能有效抑制gD-EGFP融合蛋白和感染细胞内gD糖蛋白的表达,但对HSV-1的感染性无明显抑制作用,故选择gD作为siRNA抗病毒靶点还需进一步的论证。
- 朱钦昌任哲张春龙张美英廖红娟刘秋英张佩琢李久香胡巢凤王华东王一飞
- 关键词：单纯疱疹病毒1型糖蛋白DRNA干扰抗病毒
