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人HSV-1 UL40基因重组质粒的构建及其在siRNA筛选中的应用被引量：2: 2007年; 目的:快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法:应用RT-PCR扩增人HSV-1F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结果:倒置荧光显微镜观察发现设计的4对siRNA中siRNA3和siRNA4能明显降低绿色荧光蛋白的表达,流式细胞仪检测证明siRNA3和siRNA4对目的基因沉默效率分别达到76.99%和84.00%。结论:成功构建了人HSV-1 UL40基因融合表达载体pEGFP-N1-UL40,并利用该载体筛选出2对高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。; 任哲张美英王一飞朱钦昌张春龙陆大祥胡巢凤李久香张佩琢杨志荣; 关键词：SIRNA

一种抗HSV药物作用机制的分析方法: 本发明公开了一种抗HSV药物作用机制的分析方法，利用带有由病毒立刻早期启动子控制的报告基因的重组病毒或报告细胞系为分析系统，结合不同的处理方式及特定的检测时间进行检测，然后根据结果及判读方案对药物抗HSV的作用机制做出判...; 彭涛朱钦昌; 文献传递

一种抗疱疹病毒药物作用机制的分析方法: 本发明公开了一种抗疱疹病毒药物作用机制的分析方法，利用带有由病毒立刻早期启动子控制的报告基因的重组病毒或报告细胞系为分析系统，结合不同的处理方式及特定的检测时间进行检测，然后根据结果及判读方案对药物抗疱疹病毒的作用机制做...; 彭涛朱钦昌; 文献传递

siRNA干扰HSV-1 UL30 DNA聚合酶基因的研究: 2008年; 目的:筛选高效沉默HSV-1UL30基因的siRNA,研究siRNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响。方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对HSV-1繁殖的抑制效果。结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终形成的空斑直径分别比对照组减小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01)。结论:筛选到高效抑制UL30的3对siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,说明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延缓病斑的扩大和病斑数目的增长,对病毒的繁殖有一定的抑制效果。; 张春龙何秋璟仁哲朱钦昌张美英刘秋英张佩琢王一飞; 关键词：SIRNA RNA干扰

HSV-1 UL30基因cDNA的克隆及筛选有效siRNA的融合载体构建被引量：1: 2008年; 目的:克隆HSV-1 UL30 cDNA并测序,构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。方法:从感染HSV-1F株的病变VERO细胞提取总RNA,二次PCR扩增出UL30 cDNA并克隆至pEGFP-N1质粒,测序鉴定序列;将UL30 cDNA4个小片段亚克隆至pEGFP-N1形成pEGFP-N1-Fi融合表达质粒,转染VERO细胞,荧光显微镜观察融合蛋白表达情况。结果:成功克隆出UL30 cDNA,序列对比显示与基因库中的HSV-1F株UL30序列同源性为99.4%;成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体并实现Fi-EGFP融合蛋白的表达。结论:成功克隆出UL30 cDNA,成功构建pEGFP-N1-Fi融合表达载体,为靶向UL30基因的siRNA的设计和筛选奠定基础。; 何秋璟张春龙仁哲张美英朱钦昌刘秋英张佩琢王一飞; 关键词：分子克隆 EGFP 融合表达载体

鱼腥草抗单纯疱疹病毒活性成分研究: 中药鱼腥草为三白草科蕺菜属植物蕺菜(Houttuynia cordata Thunb.)的带根全草,为我国传统中药,同时也是"药食两用"的品种。其味辛、性微寒,具有清热解毒、排脓消痈、利尿通淋之功效,主治肺痈吐脓、痰热喘...; 陈少丹朱钦昌高昊李婷吴红玲彭涛姚新生; 文献传递

siRNA干扰HSV1 gD糖蛋白基因的研究被引量：5: 2007年; 以HSV1 gD糖蛋白基因为靶点,设计合成5对siRNA,并构建pEGFP-N1-gD融合表达质粒,脂质体法共转染Vero细胞,利用绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的特征,流式细胞仪筛选特异沉默gD表达的siRNA。然后有效siRNA转染Vero细胞并感染HSV1,通过空斑减数实验,Real-time PCR和子代病毒滴度评价其对HSV-1感染的作用。结果显示siRNA能有效抑制gD-EGFP融合蛋白和感染细胞内gD糖蛋白的表达,但对HSV-1的感染性无明显抑制作用,故选择gD作为siRNA抗病毒靶点还需进一步的论证。; 朱钦昌任哲张春龙张美英廖红娟刘秋英张佩琢李久香胡巢凤王华东王一飞; 关键词：单纯疱疹病毒1型糖蛋白D RNA干扰抗病毒

正交设计优化裙带菜孢子多糖提取工艺被引量：12: 2006年; 目的裙带菜孢子叶多糖提取方法的建立及最佳条件的确立。方法以正交设计实验优化提取工艺。结果提取的优化条件为:温度90℃,50倍水,提取4h,多糖得率为4.137%。结论正交设计的结果与实际效果吻合,为一可行性的研究方法,为以后裙带菜孢子叶多糖的开发利用提供依据。; 朱良张青朱钦昌王一飞岑颖洲; 关键词：多糖正交设计

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朱钦昌