- 正常人与白血病患者GPI-PLD基因外显子1多态性分析被引量：2
- 2004年
- 禹虹唐建华王依丹张晓杰顾善兰谭玎
- 关键词：白血病多态性染色体
- 雷米普利预适应对离体大鼠心脏的延迟保护作用及机制被引量：1
- 2010年
- 目的观察雷米普利(Ramipril)对离体大鼠心脏的延迟保护作用及机制。方法 49只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组、缺血再灌组(I-R组)、Ramipril处理组、L-NAME+Ramipril处理组、HMR1883+Ramipril处理组、Calphostin C+Ramipril处理组和HOE140+Ramipril处理组,每组7只。对离体大鼠心脏采用Langengoff灌流法建立心肌缺血再灌注损伤模型,全心停灌缺血30 min后再灌注30 min产生缺血再灌注损伤,观测心率(HR)、冠状动脉流量(CF)、左室内压(LVP)和左室内压变化最大速率(+dp/dtmax),测定冠状动脉流出液中肌酸激酶(CK)释放量和心肌组织丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)含量。结果实验前24 h给予Ramipril(0.1 mg.kg-1)可显著改善心肌缺血再灌注所致的心功能损伤,抑制心肌组织CK释放和MDA含量的增加以及NO水平的降低。预先给予缓激肽(BK)抑制剂HOE140(0.1 mg.kg-1)、一氧化氮(NO)合酶抑制剂L-NAME(5 mg.kg-1)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂Calphostin C(0.1 mg.kg-1)或心肌细胞膜ATP敏感钾通道(sarcKATP)阻断药HMR1883(3 mg.kg-1),均可明显抑制雷米普利对心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用。结论 Ramipril对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤具有延迟性保护作用,可能与其激活B2受体,增加NO释放,激活PKC进一步激活sarcKATP有关。
- 李年生张晓杰胡长平
- 关键词：雷米普利ATP敏感钾通道蛋白激酶C缓激肽
- 正常人与系统性红斑狼疮患者白细胞GPI-PLD基因多态性分析被引量：4
- 2003年
- 目的 检测湖南地区汉族系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus ,SLE)患者外周血白细胞糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (glycosylphosphatidylinositol-specificphospholipaseD ,GPI -PLD)基因外显子 1及外显子 2 5多态性、白细胞GPI -PLD活性及二者关系。方法 聚合酶链式反应与单链构象多态性分析 (PCR -SSCP)、测序技术进行多态性分析 ,利用自制具完整糖基化磷脂酰肌醇 (GPI)结构的胎盘碱性磷酸酶 (PLAP)做底物通过TX -114分相 ,定量检测白细胞中GPI -PLD活性。结果 湖南地区汉族 62名SLE患者与 10 9名正常人外周血白细胞GPI -PLD基因外显子 1区均存在 14处核苷酸改变 :转录起始点上游 -2 8A→C、-2 1C→T、-14G→A、-13G→C、-9T→C、-8G→C、-7G→C、+4T→G、密码子 14TTG→AAG (Leu14Lys)、密码子 17CTC→GTC(Leu17Val)、密码子 2 0AGA→AAA (Arg2 0Lys)、密码子 2 1GGT→GGG (Gly2 1Gly)、密码子 3 0GTA→ATA (Val3 0Ile) ;另转录起始点上游 -2 4C→T仅存在于SLE人群中 ,此变异在两组人群中具有显著性差异 ;该基因外显子 2 5 ,即 +60 496G→A均存在于两组人群中。经SSCP检出阳性率分别为正常人 3 3 0 3 %,SLE患者 2 5 81%。检测 62例SLE患者外周血白细胞GPI -PLD活性 (转化底物百分率 )
- 禹虹唐建华王依丹张晓杰顾善兰王成红
- 关键词：糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D多态性系统性红斑狼疮
- 丹参乙酸镁通过抑制NADPH氧化酶阻止肺动脉高压大鼠血管平滑肌细胞表型转化被引量：2
- 2019年
- 目的肺动脉高压是由肺血管系统发生病理变化引起肺血管重构的进行性疾病,可致肺动脉压升高,最终导致右心衰竭而死亡。丹参乙酸镁(MLB)具有抑增殖及抗氧化等多种药理作用,但MLB对肺动脉高压的作用仍尚不清楚。本研究探讨MLB对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)表型转化的影响及机制。方法健康SD雄性大鼠(180~220 g)24只,随机分为常氧组、低氧组、低氧+MLB低剂量(每天5 mg·kg^-1)组、低氧+MLB高剂量(每天15 mg·kg^-1)组。低氧(10%O2)3周构建大鼠肺动脉高压模型,检测右心室收缩压(RVSP)、肺血管重构和肺血管胶原沉积等指标;收集肺动脉检测表型转化和增殖的指标,同时检测NOX2,NOX4和p-ERK的表达水平及ROS和H2O2的含量。培养大鼠来源的原代(PASMC),成功构建表型转化模型(3%O2,48 h)后给予MLB(20μmol·L^-1)或NOX的抑制剂VAS2870(10μmol·L^-1,阳性对照)检测PASMC中相关分子的变化。实验分为常氧组、低氧组、低氧+MLB组、低氧+VAS2870组及低氧+溶媒组。检测PASMC的表型转化和增殖指标;同时检测NOX2,NOX4和p-ERK的表达水平及ROS、和H2O2的含量。结果①低氧组大鼠RVSP明显升高,肺血管重构及胶原生成显著增加,给予MLB可剂量依赖性的延缓RVSP的升高和肺血管重构的增加,减少胶原的生成。②与常氧组相比,低氧组大鼠肺动脉中收缩型标志蛋白α-SMA和SM22α明显降低,合成型标志蛋白OPN及增殖标志蛋白cyclin D1显著增加。同时伴随着NOX2,NOX4及p-ERK的蛋白表达上调及ROS和H2O2的含量增加,给予MLB处理后可剂量依赖性的逆转上述分子的表达变化。③与在体结果相一致,MLB可显著延缓低氧导致的PASMC中α-SMA和SM22α表达降低,OPN及cyclin D1表达上调,MLB的作用与NOX的抑制剂VAS2870类似。④MLB或VAS2870可显著逆转低氧对NOX2,NOX4和p-ERK的蛋白表达和ROS和H2O2生成的影响。结论MLB具有抑制肺动脉高压肺血管平滑肌细胞发
- 李涛罗秀菊王婀莉李年生张晓杰刘斌彭军
- 关键词：肺动脉高压表型转化NADPH氧化酶
- 竞争性RT-PCR法定量检测慢性白血病患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达
- 为研究糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（GPI-PLD）基因的表达水平与白血病等疾病的关系,建立了一种基于竞争性RT-PCR的定量方法.我们首次用该方法检测了18例慢性白血病患者和20例正常人的外周血标本以及K562细胞中...
- 张晓杰
- 关键词：RT-PCR糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D逆转录白血病
- 文献传递
- 人骨髓基质细胞中糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶DcDNA的克隆被引量：7
- 2002年
- 为探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)cDNA的结构及功能 ,应用RT PCR从人骨髓基质细胞中克隆了长约 2 6kb的GPI PLDcDNA ,包含完整阅读框架 ,编码 2 3个氨基酸的信号肽及 817个氨基酸的成熟肽 .该cDNA与人胰腺GPI PLDcDNA几乎百分之百同源 ,与人肝脏GPI PLDcDNA同源性为 95 %,氨基酸同源性为 94 %,3者对应的结构基因只有 1个 ,位于人类第 6号染色体上 ,基因组序列长约 80kb ,包括 2 5个外显子 .构建克隆的GPI PLDcDNA的真核表达载体 ,通过脂质体转染能表达GPI锚定的胎盘型碱性磷酸酶 (PLAP)而无GPI PLD活性的G9细胞 ,同时设立对照组检测GPI PLDcDNA的功能 .结果显示 ,对照组细胞几乎检测不到GPI PLD活性 ,其表达的PLAP主要位于细胞膜上 ;而转染GPI PLDcDNA的G9细胞能检测到较高水平的GPI PLD活性 ,而且大部分酶活性存在于培养液中 ,其表达的PLAP也主要被释放入培养液 .结果证实 ,从人骨髓基质细胞中克隆的GPI PLDcDNA有生物学功能 ,它能释放细胞膜上GPI锚定蛋白质 .
- 顾善兰唐建华张晓杰
- 关键词：人骨髓基质细胞糖基化磷脂酰肌醇CDNA克隆
- 人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D的基因结构初探被引量：3
- 2001年
- 探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D (GPI PLD)的cDNA及其基因组基因的结构。从人骨髓基质细胞克隆出的GPI PLDcDNA中发现 ,它能编码信号肽 ,其编码的酶蛋白成熟肽为 817个氨基酸残基。该GPI PLDcDNA与从人肝组织和胰腺组织克隆到的GPI PLDcDNA的碱基序列的同源性分别为 95 %和 99%。人GPI PLD基因组基因定位于 6p2 2 .1～ 2 2 .3区域 ,包含 2 5个外显子 ,其上游调控区具有启动子 (TATA盒与CAAT盒 )、增强子核心序列 (TGGAAG)及同源转换盒Pit 1/GHF 1结合序列 (TATGCATAA)等顺式作用元件。
- 唐建华顾善兰张晓杰李文凯
- 关键词：骨髓糖基化磷脂酰肌醇磷脂酶DGPI-PLDCDNA骨髓基质细胞
- 正常及脑缺血-再灌注大鼠静脉注射清开灵后黄芩苷在脑、肝、肺中的分布被引量：10
- 2006年
- 目的研究清开灵注射液(QKL)中黄芩苷(BC)在生理及病理大鼠效应器官(脑、肝、肺)分布的不同。方法取正常和脑缺血-再灌注大鼠,尾静脉注射QKL 800 mg.kg-1后,于不同时间点处死,取脑、肝、肺组织,HPLC-MS测定BC含量。结果静脉给药后,正常大鼠肺中BC含量明显高于肝、脑,脑部浓度最低;脑缺血-再灌注大鼠脑中BC浓度较正常大鼠明显升高,肝中分布也有显著增加,但肺中BC浓度较正常组明显降低。结论QKL中BC在正常及病理大鼠的效应器官均有分布,但两种状态下分布具有明显区别,脑缺血-再灌注状态有利于BC快速透过血-脑屏障。
- 肖兰张晓杰王峰徐静赵绪元
- 关键词：清开灵黄芩苷脑缺血-再灌注
- 竞争性RT-PCR法定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因的表达被引量：6
- 2003年
- 目的 :建立一种定量检测糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D(GPI PLD)基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,以研究GPI PLD与白血病等疾病的关系。方法 :首先用PCR定点诱变法构建GPI PLD的竞争性cDNA模板 ,该模板与靶cDNA具有相同的引物结合区 ,但在长度上要比靶cDNA少 2 0个碱基。把该竞争性cD NA模板在体外转录出的竞争性RNA作为RT PCR的内标准 ,与白血病细胞株K5 6 2细胞的总RNA在同一体系内进行逆转录和PCR扩增 ,二者的PCR产物因长度不同可经电泳区分开 ,然后对电泳图像进行光密度扫描 ,根据已知的竞争性RNA模板的量计算出GPI PLDmRNA的量 ,从而得到GPI PLD基因的绝对表达量。结果 :构建和制备了长度为 198bp的GPI PLD竞争性RNA模板 ,该模板与靶模板呈明显的竞争性RT PCR反应 ;测得K5 6 2细胞GPI PLD基因的表达水平为每纳克 (44 0± 2 0 )拷贝。结论 :成功地建立了一种定量检测GPI PLD基因表达水平的竞争性RT PCR方法 ,该方法具有灵敏、准确等优点。
- 张晓杰鲁纯平唐建华顾善兰禹虹
- 关键词：白血病
- 慢性白血病患者糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D基因表达的初步研究
- ＜正＞ 目的:探讨人糖基化磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D（GPI-PLD）cDNA结构的多态性,以及GPI—PLD基因表达与慢性白血病之间的关系。方法:利用RT-PCR技术从培养的3例人骨髓基质细胞中扩增出完整的GPI-PLD...
- 唐建华顾善兰张晓杰禹虹王依丹李文凯向新颖徐雅靖
- 文献传递
