徐军
- 作品数：9 被引量：20H指数：3
- 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 沉默畸胎瘤衍生生长因子-1基因对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的 探讨TDGF-1基因沉默对胰腺癌细胞株PANC1侵袭力的影响.方法 设计并合成3个（S1、S2、S3）靶向TDGF-1基因的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）,筛选出沉默效果最好的siRNA.以该siRNA的不同浓度（3.125、6.25、12.5 nmol/L）转染PANC1细胞,并设对照组和脂质体组.采用实时定量PCR和Western blotting检测TDGF-1 mRNA和蛋白表达,以软琼脂集落培养试验和Boyden小室检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,并将转染48 h的细胞接种裸鼠,观察癌细胞的体内侵袭.结果 siRNA转染组细胞的TDGF-1 mRNA和蛋白表达水平呈浓度和时间依赖性下降,且较脂质体组明显降低（P值均＜0.01）.对照组细胞集落形成数和穿膜细胞数分别为19.8±2.2和49.8±2.6;siRNA组呈浓度依赖性明显减少,12.5 nmol/L转染组分别为5.6±1.2和8.1±1.1.对照组、脂质体组和12.5 nmol/L转染组接种4周后裸鼠种植瘤体积分别为（2.228±0.026）cm3、（2.186±0.028）cm3和（0.728±0.023）cm3.对照组和脂质体组种植瘤侵犯周围肌层组织,转染细胞组未见侵犯.结论 采用RNA干扰技术沉默PANC 1细胞的TDGF-1基因表达可抑制癌细胞的侵袭力.
- 范钰吴莺徐军钟锡明
- 关键词：胰腺肿瘤肿瘤侵袭小分子干扰RNA
- 葡萄糖脱氢酶基因的重组和表达研究被引量：2
- 2007年
- 目的为获得较高活力的葡萄糖脱氢酶。方法根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物，以枯草芽孢杆菌WB600基因组DNA为模板，通过聚合酶链反应（PCR）获得该基因，与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109（DE3）进行表达，并在半自动生化分析仪上用速率法测定其活性。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示，重组菌能表达单体分子量为31.5kD的特异性蛋白。通过对重组基因表达条件的研究发现，诱导剂（异丙基硫代-β—D-半乳糖苷）浓度为0．5mmol／L，诱导2．5～3h后用240W超声破碎细胞，可实现该基因的较高表达。结论运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因，重组基因经大肠杆菌诱导表达，获得了较高活力的葡萄糖脱氢酶，经纯化后可为临床服务。
- 徐军周丽萍
- 关键词：葡萄糖脱氢酶基因
- VEGF基因沉默对胰腺癌细胞化疗敏感性和Akt信号通路的影响被引量：1
- 2011年
- 目的 观察靶向血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）基因小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对胰腺癌BxPC3细胞化疗药物敏感性的影响,并探讨其可能机制.方法 将培养后的BxPC3细胞分为单纯BxPC3细胞组、脂质体处理组、错配siRNA转染组和VEGFsiRNA转染组.以5、10、20、100、200 nmol/L的VEGF siRNA转染BxPC3细胞.采用实时定量RT-PCR和ELASA法检测细胞VEGF mRNA和蛋白的表达;MTT法检测吉西他滨对各组细胞生长的影响;蛋白质印迹法检测BxPC3细胞Akt蛋白的磷酸化.结果 VEGF siRNA转染后,BxPC3细胞VEGF mRNA和蛋白呈浓度和时间依赖性明显下调,但对BxPC3细胞的增殖无明显影响.用0.2 μmol/L吉西他滨处理细胞48 h后,BxPC3细胞组、错配siRNA组及5、10、20 nmol/L siRNA组细胞的生长抑制率分别为（16.9±0.3）%、（17.3±0.3）%、（28.8±0.4）%、（52.2±0.3）%、（75.4±0.4）%,抑制率与siRNA浓度相关（r=0.928）.同时,siRNA转染后细胞Akt蛋白的磷酸化被明显抑制.结论 VEGF基因在胰腺癌BxPC3细胞耐药中起着重要的作用,其机制可能与Akt蛋白磷酸化有关.
- 王晓燕周永静龚丹丹徐军徐岷范钰
- 关键词：胰腺肿瘤化疗敏感性AKT
- 重组葡萄糖脱氢酶基因表达条件的优化及其稳定性被引量：1
- 2008年
- 目的优化重组葡萄糖脱氢酶(GDH)基因表达条件,研究其稳定性。方法在摸索培养基性质、抗生素浓度、培养温度、表达时间等条件的的基础上确定最佳表达条件;同时在表达酶液中添加甘油、咪唑等以期提高其稳定性。结果当氨卞青霉素浓度为100mg/ml,LB培养基中,37℃培养条件下,细菌生长接近饱和后更换等体积新鲜LB培养基诱导过夜,可获得较高的蛋白表达量;同时在表达酶液中添加20%甘油或20%甘油+0.05M咪唑可使酶蛋白基本稳定。结论载体的拷贝数、稳定性和宿主菌的生长状态是影响GDH表达的因素;一定浓度的甘油可提高葡萄糖脱氢酶的稳定性。
- 徐军周丽萍
- 无张力疝修补术在治疗老年复发性腹股沟疝中的应用被引量：1
- 2004年
- 徐军祁卫东
- 关键词：腹股沟疝无张力修补术
- 葡萄糖脱氢酶法测定血清葡萄糖的方法学评价被引量：8
- 2006年
- 目的:通过方法学试验对葡萄糖脱氢酶法测定血清葡萄糖方法进行评价。方法:用已建立的方法进行重复性试验、回收试验、干扰试验、线性范围试验,并和HK法进行比较。结果:重复性试验批内CV值为1.33%,批间CV值为1.42%,总CV值为2.01%;回收试验中回收样品I、Ⅱ、Ⅲ的回收率分别为105%,93.5%和91.4%,平均为96.6%;干扰试验表明一般浓度的抗凝剂、防腐剂、尿酸、胆红素对葡萄糖的测定不产生干扰;比较试验,与HK法比较其相关性为Y=1.038X-1.172,r=0.994;线性范围试验表明葡萄糖浓度在20 mmol/L以下呈现良好的线性。结论:葡萄糖脱氢酶法是临床测定血清葡萄糖的较理想的方法。
- 周丽萍姜旭淦徐军
- 关键词：葡萄糖
- 巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因的重组和表达研究被引量：4
- 2007年
- 目的运用聚合酶链反应技术从巨大芽孢杆菌中获得葡萄糖脱氢酶基因,并表达该基因。方法根据巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物,通过PCR获得该基因,与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行诱导表达。结果重组基因表达产物经SDS-PAGE电泳鉴定显示特异性条带,并且酶活力达15u/mL,比活力为10u/mg。结论运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因,经诱导获得了较高产量的葡萄糖脱氢酶。
- 周丽萍徐军
- 关键词：巨大芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因
- Midkine在胰腺癌诊断中的作用研究被引量：3
- 2010年
- 目的:通过对胰腺肿瘤组织和对应的癌旁正常组织的Midkine(MK)mRNA定量检测、比较分析,为胰腺癌的早期诊断建立分子标志。方法:收集胰腺癌组织及癌旁组织人体标本,冷冻保存;提取组织总RNA。根据MK两端序列设计特异性引物,同时用β-肌动蛋白作为对照基因,逆转录PCR(RT-PCR)和荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)对MKmRNA分别进行定性和定量测定。结合统计学分析结果,判断分析MKmRNA含量和胰腺癌的相关性。结果:胰腺癌组织中MKmRNA表达明显高于癌旁组织(p<0.05)。结论:基于与胰腺癌的相关性,MK有可能作为胰腺癌早期诊断的分子标记。
- 徐军吴晨光林江周丽萍顾红兵
- 关键词：MIDKINE胰腺癌
- 肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因mRNA在人胰腺癌组织中表达的临床意义
- 2011年
- 目的:探讨人胰腺癌肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumo-associated calcium signal transducer-2,TROP-2)基因在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法:提取56例人胰腺癌及癌旁正常组织中总mRNA,采用实时荧光定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)法检测其中TROP-2 mRNA表达情况;并分析其表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期相关性。结果:以2^(-ΔΔCt)≥2为阳性标准,TROP-2在胰腺癌组织中阳性表达率为75.0%(42/56),而癌旁正常组织未见TROP-2 mRNA表达,两者差异有统计学意义(P<0.001)。TROP 2 mRNA过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期显著相关(均P<0.01),而与患者年龄和肿瘤分化程度无关(均P>0.05)。结论:TROP-2基因表达与胰腺癌进展密切相关,可能是反映胰腺癌侵袭、转移的重要指标之一。
- 王晓燕周永静龚丹丹徐军徐岷范钰
- 关键词：胰腺肿瘤
