周丽萍
- 作品数：34 被引量：121H指数：7
- 供职机构：江苏大学更多>>
- 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学化学工程更多>>
- 分子诊断学课程实践教育创新模式的探讨被引量：6
- 2009年
- 周丽萍钱晖张弛宇严永敏王卉放高路
- 关键词：分子诊断
- 大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌耐药基因分析被引量：4
- 2008年
- 目的了解现阶段产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC酶)的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐药特性及基因型分布,并作同源性分析。方法纸片扩散法(K-B)检测细菌对抗生素的敏感性;双纸片扩散确诊试验检测ESBLs;三维试验检测AmpC酶;聚合酶链反应(PCR)检测基因型;肠杆菌科基因间重复一致序列(ERIC)PCR作分子生物学分型。结果产酶菌株对亚胺培南、美罗培南、阿米卡星、头孢吡肟耐药性较低,对其他13种抗生素耐药性较高。在PCR扩增试验中,blaCTX-M、blaTEM、blaOXA、blaSHV、blaVEB-1型ESBLs基因及CIT、DHA型AmpC酶基因阳性率分别为75.2%,35.8%,11.0%,4.6%,0.9%,4.6%和4.6%;有46.8%的菌株同时携带多种耐药基因。用ERIC-PCR法将所检测的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌分成42型和22型。结论产ESBLs和AmpC酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的耐多药性值得关注;ESBLs及AmpC酶分别以CTX-M型及CIT型和DHA型为主;产酶菌株有散在的克隆流行,应注意监控,防止耐药菌株引起院内感染。
- 王震周丽萍庄建伟刘智成汪海青
- 关键词：超广谱Β-内酰胺酶头孢菌素酶同源性
- 葡萄糖脱氢酶连续监测法的研究被引量：7
- 2004年
- 目的建立葡萄糖脱氢酶连续监测法,优化其检测条件。方法按酶连续监测法测定要求,对克隆的枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶表达酶液进行测定,确定反应体系的底物浓度、最适pH、反应温度、延滞时间、测定时间、检测范围等。结果以葡萄糖和NAD+为底物时,用连续监测法检测葡萄糖脱氢酶是可行的。当葡萄糖、NAD+的终浓度分别为100mmol/L和2mmol/L时,在反应pH74,37℃,延滞时间30s,测定时间60s等条件下,检测上限可达10000U/L。结论连续监测法能用于测定葡萄糖脱氢酶,快速简便,结果可靠。
- 姜旭淦周丽萍徐顺高宋超邹昕
- 关键词：葡萄糖脱氢酶枯草芽孢杆菌连续监测法
- 重组葡萄糖脱氢酶基因表达条件的优化及其稳定性被引量：1
- 2008年
- 目的优化重组葡萄糖脱氢酶(GDH)基因表达条件,研究其稳定性。方法在摸索培养基性质、抗生素浓度、培养温度、表达时间等条件的的基础上确定最佳表达条件;同时在表达酶液中添加甘油、咪唑等以期提高其稳定性。结果当氨卞青霉素浓度为100mg/ml,LB培养基中,37℃培养条件下,细菌生长接近饱和后更换等体积新鲜LB培养基诱导过夜,可获得较高的蛋白表达量;同时在表达酶液中添加20%甘油或20%甘油+0.05M咪唑可使酶蛋白基本稳定。结论载体的拷贝数、稳定性和宿主菌的生长状态是影响GDH表达的因素;一定浓度的甘油可提高葡萄糖脱氢酶的稳定性。
- 徐军周丽萍
- 分子生物学实验开放性教学改革探索
- 本文就我校面向本科生开设的分子生物学实验的改革提出设想,提出开放性实验教学模式,并客观分析了改革初期将要面临的诸多困难,提出改进方案.
- 周丽萍王卉放姜旭淦郑铁生徐顺高马洁
- 关键词：开放性教学分子生物学实验教学教学改革
- 文献传递
- 雷氏普罗威登斯菌青霉素G酰化酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：4
- 2002年
- 利用PCR和分子克隆技术从雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)(ATCC29944)的基因组DNA中获得一个青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因并将其装入表达质粒pET24a。携带有重组质粒pETPGA的Escherichia coli基因工程菌BL21(DE3)/pETPGA实现了PGA的高效表达。对发酵条件的研究表明基因工程菌在24℃、添加5g/L甘油条件下以1.0mmol/L IPTG诱导1.5h酶活力即达到993.4U/L,比野生菌酶活力(15U/L)提高了66倍。
- 周政张爱晖周丽萍杨晟姜涌明袁中一
- 关键词：青霉素G酰化酶基因大肠杆菌克隆
- 多重聚合酶链反应快速鉴别葡萄球菌及mecA基因检测被引量：2
- 2006年
- 目的:建立快速鉴定葡萄球菌及检测mecA基因的多重聚合酶链反应(PCR)诊断方法。方法:以葡萄球菌16SrRNA、金黄色葡萄球菌的nuc基因以及耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)的mecA基因合成3对引物,采用多重PCR扩增法,快速鉴定葡萄球菌,同时判断MRS菌株。结果:107株葡萄球菌的16SrRNA基因扩增片段全部为阳性,与常规鉴定结果符合率为100%;nuc基因阳性48株,阴性59株,与金黄色葡萄球菌核酸酶试验一致;以PBP2a乳胶凝集试验结果为金标准,苯唑西林(含2%NaClMHA)及头孢西丁纸片扩散法的敏感性为98.7%和100%,特异性分别为75.0%和82.1%;PCR扩增法的敏感性和特异性均为100%。结论:多重PCR法能快速准确地从临床分离菌株中鉴别葡萄球菌,并可同步对mecA基因进行准确检测。
- 王震周丽萍刘智成庄建伟汪海青
- 关键词：葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌多重PCR
- 内质网应激在T细胞活化诱导凋亡中的作用被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨内质网应激在T细胞活化诱导细胞凋亡(activation-induced cell death,AICD)中的作用。方法:建立小鼠T淋巴瘤EL-4细胞和成年C57BL/6小鼠T细胞AICD的模型,流式细胞术测定发生AICD的细胞凋亡率;流式细胞术测定不同浓度CD3抗体对EL-4细胞AICD发生的影响;将小鼠AICD模型T细胞分为对照组、模型组、激动组(加入内质网应激激动剂二硫苏糖醇)、抑制组(加入内质网应激抑制剂4-苯基丁酸),流式细胞术测定各组细胞凋亡率。结果:EL-4细胞和C57BL/6小鼠T细胞发生AICD时,细胞凋亡率升高;随着CD3抗体浓度增加,EL-4细胞发生AICD的比例增加;激动组小鼠T细胞发生AICD的比例增加,抑制组小鼠T细胞发生AICD的比例降低;抑制剂组细胞凋亡水平较对照组降低。结论:增强内质网应激可促进T细胞发生AICD,抑制内质网应激可减少T细胞发生AICD。
- 严成金慧敏颜楠楠许洁肖腾飞周丽萍邵启祥夏圣
- 关键词：内质网应激T细胞
- 葡萄糖脱氢酶基因的重组和表达研究被引量：2
- 2007年
- 目的为获得较高活力的葡萄糖脱氢酶。方法根据枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因两端序列设计引物，以枯草芽孢杆菌WB600基因组DNA为模板，通过聚合酶链反应（PCR）获得该基因，与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109（DE3）进行表达，并在半自动生化分析仪上用速率法测定其活性。结果聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）显示，重组菌能表达单体分子量为31.5kD的特异性蛋白。通过对重组基因表达条件的研究发现，诱导剂（异丙基硫代-β—D-半乳糖苷）浓度为0．5mmol／L，诱导2．5～3h后用240W超声破碎细胞，可实现该基因的较高表达。结论运用基因工程手段获得了葡萄糖脱氢酶基因，重组基因经大肠杆菌诱导表达，获得了较高活力的葡萄糖脱氢酶，经纯化后可为临床服务。
- 徐军周丽萍
- 关键词：葡萄糖脱氢酶基因
- 重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究被引量：4
- 2005年
- 目的:将重组的葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达,优化表达条件,以期获得较高活力的葡萄糖脱氢酶.方法:将枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,经对发酵时间、诱导物浓度、诱导时间以及细胞破碎等条件的控制,实现葡萄糖脱氢酶的高表达.结果:重组质粒转化菌发酵2 h后进入对数生长期,诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导2.5～3 h后用240 W超声破碎细胞,表达的粗提酶活力比诱导前提高了近千倍.SDS-PAGE电泳显示重组菌能表达单体分子量为31.5KD的特异性蛋白.结论:表达质粒的拷贝数、宿主菌培养条件、细胞破碎方式等均能影响酶的表达量.
- 周丽萍姜旭淦徐顺高郑铁生王卉放
- 关键词：葡萄糖脱氢酶基因
