文玲
- 作品数：17 被引量：31H指数：3
- 供职机构：南华大学医学院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- Mcl-1在二烯丙基二硫诱导人白血病HL-60细胞G_2/M阻滞中的作用被引量：3
- 2010年
- 目的:探讨Mcl-1在二烯丙基二硫(DADS)诱导人白血病HL-60细胞周期阻滞过程中的作用。方法:CCK-8检测DADS抑制HL-60细胞的作用;流式细胞术观察DADS对HL-60细胞的周期阻滞效应;West-ern blotting分析DADS处理HL-60细胞后Mcl-1、PCNA(细胞核增殖抗原)、CDK1(周期依赖激酶1)表达情况;RNAi干扰Mcl-1观察Mcl-1对白血病细胞周期的影响;免疫共沉淀分析Mcl-1与PCNA、CDK1结合作用。结果:CCK-8比色结果显示,15、30、60、120、240μmol/L DADS处理HL-60细胞,细胞增殖抑制率分别为31.15%、55.88%、66.14%、75.29%、80.35%,呈浓度依赖性增加(P<0.05)。流式细胞术检测显示,60μmol/L和120μmol/L DADS作用HL-60细胞24 h和48 h后,呈时间和浓度依赖性诱导HL-60细胞G2/M期阻滞(P<0.05)。Western blotting分析发现60μmol/LDADS处理HL-60细胞后PCNA、Mcl-1、CDK1表达下调(P<0.05)。Mcl-1基因沉默24 h后G2/M期百分率增加到19.4%,与对照组比较有显著差异(P<0.05)。而Mcl-1基因沉默后加入60μmol/L DADS作用时,G2/M期百分率比60μmol/L DADS处理组增加6.0%(P<0.05)。免疫共沉淀发现,HL-60细胞中存在Mcl-1与PCNA、CDK1的相互结合,DADS处理HL-60细胞后Mcl-1与PCNA、CDK1的结合作用减弱。结论:DADS能诱导HL-60细胞增殖抑制和G2/M阻滞,其抑制增殖作用与PCNA表达下调有关。Mcl-1基因沉默可增强DADS对HL-60细胞G2/M期阻滞作用。
- 吉晓霞谭晖易岚唐章文唐仪文玲苏琦
- 关键词：MCL-1白血病G2/M期阻滞二烯丙基二硫SIRNA
- 二烯丙基二硫化物诱导胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的机制被引量：2
- 2010年
- 目的:以细胞周期作为抗癌药物新靶点的研究,可能是很有前途的。笔者的前期工作发现,二烯丙基二硫化物(diallyl disulfide,DADS)可抑制人胃癌BGC823细胞增殖,其增殖抑制与细胞周期G_2/M期阻滞有关;DADS可能是通过抑制细胞分裂周期蛋白25C(Cell division cycle protein 25C,Cdc25C)、cyclinB1表达使部分BGC823细胞停滞在G_2/M期,但G_2/M期阻滞的机制还未完全阐明。本研究进一步探讨DADS诱导人胃癌BGC823细胞周期G_2/M期阻滞的可能机制。方法:RT-PCR检测Chk1和Chk2在mRNA水平的改变;Western blot检测DADS处理BGC823细胞前后细胞周期相关蛋白ATM-RAD3相关基因(ATM-RAD3-related gene,ATR)、细胞周期检查点蛋白激酶1(checkpoint kinase1,Chk1)、细胞周期检查点蛋白激酶2(checkpoint kinase2,Chk2)表达和ATR、Chk1、Chk2的磷酸化程度:免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与Cdc25C结合情况。结果:RT-PCR检测显示,Chk1和Chk2的mRNA水平在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05)。Western blot检测显示,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变,但15mg/L DADS刺激BGC823细胞2h后,处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.05),而Chk2磷酸化程度在处理组与未处理组之间无显著性差异(P>0.05)。15mg/L DADS作用15～120min,ATR磷酸化程度明显增加,呈时间依赖性(P<0.05),而ATR表达无改变。免疫共沉淀分析表明,DADS能促进BGC823细胞Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论:DAD诱导人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞与Chk1的活化有关,DADS可能是通过激活ATR、Chk1,调节Cdc25C的表达引起人胃癌BGC823细胞G_2/M期阻滞。
- 凌晖吉晓霞文玲夏红谭晖何洁唐海林董琳苏琦
- 关键词：胃癌细胞二烯丙基二硫化物细胞周期蛋白
- Chk1 siRNA转染对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响
- 目的:观察Chk1 miRNA转染对人胃癌BGC823细胞生长及周期的影响。方法:本研究采用RNAi技术抑制BGC823细胞中Chk1表达,运用Western blot验证,然后采用MTT实验、流式细胞术分析Chk1基因...
- 凌晖文玲刘芳李艳兰陈真伟李振丰苏琦
- 关键词：RNA干扰
- 文献传递
- 二烯丙基二硫化物对人胃癌MGC803细胞G_2/M期检查点激酶Chk1/2的影响被引量：3
- 2009年
- 目的:观察二烯丙基二硫化物(DADS)对人胃癌MGC803细胞的细胞周期检查点激酶1(Chkl)和细胞周期检查点激酶2(Chk2)的影响。方法:RT-PCR检测MGC803细胞的Chk1和Chk2激酶在mRNA水平的改变;Western blotting检测Chk1、Chk2的表达和Chk1、Chk2的磷酸化程度,免疫共沉淀检测Chk1、Chk2与细胞分裂周期蛋白25C(Cdc25C)结合情况。结果:RT-PCR检测显示,Chkl和Chk2 mRNA水平在处理组与未处理组之间无明显差异(P>0.05)。Western blotting检测显示,MGC803细胞分别受30 mg.L-1DADS刺激1 h和2 h后,与未处理组相比,总Chk1和Chk2蛋白表达在细胞处理前后均无明显改变(P>0.05);但处理组细胞Chk1磷酸化程度明显增加,并呈时间依赖性(P<0.01),而Chk2在处理组与未处理组间磷酸化程度无明显差异(P>0.05)。免疫共沉淀分析表明,MGC803细胞中DADS能促进Chk1与Cdc25C结合,而对Chk2与Cdc25C结合无影响。结论:DADS可能是通过激活Chk1引起人胃癌MGC803细胞G2/M期阻滞。
- 凌晖吉晓霞文玲陆丽峰王莉周建国董琳夏红苏琦
- 关键词：MGC803细胞二烯丙基二硫化物
- Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响被引量：2
- 2010年
- 目的:观察Chk1/2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响。方法:采用RNAi技术在MGC803细胞中分别将Chk1和Chk2基因沉默,运用蛋白质印变法验证,然后采用MTT实验、流式细胞术分析Chk1和Chk2基因沉默对人胃癌MGC803细胞增殖及周期的影响。结果:蛋白质印迹法结果显示,转染靶向Chk1和Chk2siRNA24h的Chk1、Chk2蛋白相对灰度值分别为0.09±0.04和0.12±0.01,明显弱于未转染对照组(0.39±0.09)和脂质体转染组(0.38±0.17),P均<0.05,而未转染对照组和脂质体转染组之间比较差异无统计学意义,P=0.458。转染Chk1、Chk2siRNA的MGC803细胞Chk1和Chk2蛋白表达分别下降85.0%和83.4%。MTT实验证明,Chk1蛋白表达缺失导致MGC803细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为38.0%(t=26.797,P<0.05);Chk2蛋白表达缺失对细胞增殖无明显抑制作用(t=6.098,P>0.05)。Chk1基因沉默后细胞周期在G0/G1期发生停滞,但并不引发凋亡,而Chk2基因沉默后对细胞周期影响不明显。结论:Chk1基因沉默可明显抑制人胃癌细胞增殖,且其抑制增殖作用与诱导G0/G1期阻滞有关。
- 凌晖文玲陈真伟李振丰夏红苏琦
- 关键词：胃肿瘤RNA干扰细胞周期
- RORα miRNA真核表达载体构建及对人胃癌细胞增殖的影响被引量：6
- 2011年
- 目的构建RORα(Retinoid acid receptor related orphan receptorα,维甲酸相关孤核受体α)miRNA真核表达载体,分析其对人胃癌MGC803细胞RORα蛋白表达及细胞增殖的影响。方法构建针对设计RORαmiRNA表达的3对miRNA干扰序列,克隆入pcDNATM6.2-GW/EmGFP miRNA真核表达载体,在测序鉴定无误后将含RORαmiRNA转染人胃癌MGC803细胞,用Western blo检测MGC803细胞转染前后RORα蛋白的表达水平变化。MTT法检测对转染MGC803细胞增殖的影响。结果 Western blot结果证实,MGC803细胞转染RORαmiRNA后24h RORα蛋白表达水平明显低于转染阴性组(P<0.05)。MTT结果显示,转染RORαmiRNA后细胞增殖率(光吸收值)高于转染阴性组(P<0.05)。结论 miRNA靶向抑制RORα表达后,可促进人胃癌MGC803细胞增殖,提示RORα是一个潜在的胃癌基因及药物治疗的靶点。
- 凌晖陈真伟曾铁兵文玲苏琦彭娟张杨
- 关键词：胃癌微小RNA增殖
- 二烯丙基二硫对人胃癌SGC7901细胞Au-rora-A、Aurora-B表达的影响
- 2011年
- 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人胃癌SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响。方法体外培养SGC7901细胞,采用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学分析DADS对SGC7901细胞中Aurora-A、Aurora-B表达的影响。结果 RT-PCR显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B mRNA表达明显下调(P<0.05);Western blot显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A、Aurora-B蛋白表达水平呈时间依赖性下降(P<0.05);免疫细胞化学显示用15 mg/L DADS处理SGC7901细胞24、48 h后,Aurora-A和Aurora-B蛋白表达明显降低。结论 DADS可从基因和蛋白水平抑制SGC7901细胞Aurora-A、Aurora-B的表达。
- 李振丰凌晖陈真伟段海瑞文玲胡程
- 关键词：胃癌二烯丙基二硫AURORA-AAURORA-B
- microRNA干扰RORa表达对DADS诱导人胃癌细胞增殖与周期的影响
- 目的:维甲酸相关孤核受体α（Retinoid acid receptor related Orphan Receptorα,RORα）可能参与多种肿瘤的调控。二烯丙基二硫（diallyl disulfide, DADS）...
- 文玲
- 关键词：胃癌二烯丙基二硫微小RNA细胞周期
- 文献传递
- 二烯丙基二硫对人胶质瘤U251细胞增殖及RORα表达的影响被引量：1
- 2010年
- 目的探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide,DADS)对人胶质瘤U251细胞增殖及维甲酸相关孤核受体α(RORα)蛋白表达的影响。方法采用MTT比色实验、群体倍增时间分析DADS对人胶质瘤U251细胞的生长抑制效应;Western blot技术分析RORα蛋白在DADS处理U251细胞前后的表达改变。结果DADS浓度从15、22.5、30、37.5到45mg/L处理U251细胞,其吸光值比对照组低,而且随浓度增加逐渐降低(P<0.05);相反,随着浓度增加,DADS对细胞增殖的抑制率从32.88%、41.83%、49.50%、59.42%到68.53%逐渐增强(P<0.05);未处理的U251细胞群体倍增时间为21.86h,而DADS处理后的细胞,细胞群体倍增时间延长至36.69h(P<0.05);Western blot结果发现,DADS处理U251细胞24、48h后,RORα蛋白表达(0.69±0.13、1.37±0.25)较未处理组(0.22±0.16)明显上调(P<0.05),且48h处理组高于24h处理组(P<0.05)。结论DADS可抑制人胶质瘤U251细胞增殖,其抑制增殖作用可能与诱导RORα蛋白表达上调有关。
- 凌晖曾铁兵文玲张峰华刘芳彭娟张杨
- 关键词：胶质瘤二烯丙基二硫细胞增殖
- c-FLIP在DATS诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡中的作用被引量：4
- 2010年
- 目的:探讨二烯丙基三硫(diallyl trisulfide,DATS)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡及凋亡过程中c-FLIP的变化及意义。方法采用MTT、western-blot和细胞免疫组化分别检测DATS对SGC-7901细胞的增殖抑制率及c-FLIP的表达情况。光学显微镜观察凋亡形态,流式细胞术检测凋亡率。结果:MTT结果显示,不同浓度DATS(6、8、10、12、14、16mg.L-1)DATS处理SGC-7901细胞24、48小时后,生长抑制率分别为20.4%--79%和36%--90%,DATS抑制作用随浓度及时间逐渐增强(P<0.05)。细胞免疫组化和western-blot显示:9.5mg..L-1DATS处理SGC-7901细胞24、48小时后,与对照组相比,c-FLIP的表达下调(P<0.05)。光学显微镜:通过9.5mg..L-1DATS作用后24、48小时后,胃癌细胞出现了凋亡形态学改变。流式细胞术检测:经过9.5mg..L-1DATS处理SGC-7901细胞24、48小时后,细胞凋亡率逐渐升高。结论:DATS促进SGC-7901细胞凋亡的机制可能与抑制c-FLIP蛋白的表达有关。
- 陈真伟凌晖李振峰段海瑞胡程文玲朱亚平
- 关键词：二烯丙基三硫SGC-7901细胞凋亡
