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草鱼肝细胞系中CYP3A活性检测方法被引量：3: 2007年; 红霉素-N-脱甲基酶(ERND)是细胞色素P450 3A(CYP3A)依赖的酶类,可通过测定该酶催化代谢产物甲醛的量来反映其活性,从而评价CYP3A活性的高低。以草鱼肝细胞系(GCL)为模型,红霉素为底物,采用Nash比色法检测ERND产物甲醛含量,Lowry比色法测定细胞蛋白含量,建立鱼类细胞中CYP3A活性的简便检测方法。研究表明,底物以0.4 mmol/L作用60 m in后进行检测较为合适。细胞样品中ERND产物甲醛平均回收率为78.80%±4.37%,平均日内精密度为2.80%±1.40%,平均日间精密度为3.91%±1.45%,通过计算探针酶ERND活性可为鱼类细胞CYP3A活性的评价提供简便可靠的方法,从而为鱼类药物代谢酶体外诱导模型的研究奠定了基础。; 李聃杨先乐张书俊喻文娟陈昱; 关键词：细胞色素P4503A 鱼类细胞甲醛

诺氟沙星在大黄鱼血浆和肌肉中的RP—HPLC检测方法被引量：8: 2004年; 应用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)建立了诺氟沙星在大黄鱼血浆和肌肉组织中含量的测定方法。取血浆和肌肉样品，分别加入不同体积甲醇、乙腈、6%高氯酸和10%三氯乙酸，处理后样品10000r·min-1离心、0．45μm滤膜过滤后上HPLC。色谱条件：色谱柱，C18分析柱；流动相，甲醇：磷酸缓冲液：四丁基溴化铵[24．5：73．5：2(v／v／v)，磷酸调节pH值2．0]。DAD检测器，检测波长280nm，流速1．0mL·min-1，柱温40℃，自动进样量10μL。结果表明，采用与样品等量的甲醇和6％高氯酸进行前处理，可获得较高的抽提率和检测灵敏度。该方法的检测灵敏度为0．01μg·mL-1；在0．1～4．8μg·mL-1浓度范围内线性关系与重复性良好。血浆和肌肉平均回收率分别为100．4％±4．61％、95．57％±1．97％；平均日内(提取)精密度分别为0．38％±0．42％和0．25％±0．29%，日间精密度分别为0．56%±0．36％和0．85％±1．18％。用该法对肌肉注射给药(剂量10mg·kg-1)96h内大黄鱼血浆中的诺氟沙星血药浓度进行检测，结果表明其测定值与理论值基本一致，并初步揭示诺氟沙星在大黄鱼血浆组织中由给药后第0．5h的9．857±0．076μg·mL-1下降到96h的0．477±0．010μg·mL-1的代谢规律。; 杨先乐王民权杨勇叶金明李聃; 关键词：大黄鱼诺氟沙星血浆肌肉反相高效液相色谱法

水霉拮抗菌的筛选及其拮抗作用的初步研究被引量：29: 2008年; 为了获得水产动物水霉病病原菌的拮抗微生物,以水霉为靶标,对其拮抗菌进行了筛选,并研究了拮抗作用最强菌株的拮抗活性。实验结果表明:从发生过水霉病害的水体中分离得到了130株细菌,能抑制水霉菌落生长的有三株:LD038、LD057和LD106,其中以LD038的拮抗作用最强,经梅里埃ATB微生物自动鉴定系统鉴定为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)。培养基对LD038的拮抗活性影响显著,LD038在PDA平板上表现出的拮抗活性最强,大小依次为PDA>BHI>GY>CA>Sabouraud。进一步对菌株LD038体外拮抗活性进行了研究。平板抑制实验表明,LD038能抑制水霉菌丝生长和孢子萌发。琼脂扩散法中,LD038菌落周围产生的抑菌圈直径为20mm,而无菌水对照组中水霉菌丝蔓过滤纸纸片并长至平板边缘;D38菌线间孢子的萌发与孢子距菌线的距离有关,距LD038菌线22mm范围内,孢子的萌发完全被抑制。无菌发酵上清液实验表明,与对照组相比,LD038无菌发酵上清液对孢子的萌发和菌丝生长都表现出显著的抑制作用。其中孢子较菌丝对上清液更为敏感,5倍稀释上清液下的孢子萌发率仅为10%,且萌发后的菌丝生长也同样受到抑制,整个实验过程中菌丝均未形成网状,对照组中萌发形成的菌丝在16h后呈网状。无菌上清原液和2倍稀释上清液中孢子均未萌发。对菌丝而言,仅无菌上清原液能彻底抑制菌丝生长,与对照组相比,2倍和5倍稀释上清液显著延缓了菌丝的生长。当对照组中的菌丝铺满整孔时,2倍和5倍稀释上清液中的菌丝长度分别为0和2.6mm。显微观察表明LD038的无菌发酵上清液导致水霉菌丝形态发生变化,较正常菌丝短而粗大,且出现了黑色原生质聚集。本研究为水霉病害的生物防治提供了一定的理论基础和依据。; 张书俊杨先乐李聃李怡高鹏; 关键词：水霉拮抗菌生物防治黏质沙雷氏菌

草鱼肝细胞中诱导剂对EROD作用的剂量效应研究被引量：5: 2006年; 在研究GCL细胞中EROD催化底物反应时间的基础上分别以三种数学模型拟合,分析比较了诱导剂TCDD、PCB、PB、BaP、3-MC、BNF对GCL细胞EROD酶活的剂量-效应曲线,结果表明Log-Normal模型能较好的拟合药酶诱导前升后降的钟形效应曲线,所得方程参数值p100和EC100可用于药物代谢酶的诱导研究;Gentox模型拟合度相对较低且其EC50值显著高于半效应浓度;Logistic模型只能拟合曲线诱导上升部分而且EC50和p100与Log-Normal模型相比显著偏高。进一步研究结果显示诱导剂TCDD对GCL细胞作用时间越长,EC100越大,p100越小,但在作用48h后即达到较大诱导效应,延长时间并无显著加强作用。; 林茂杨先乐房文红张宁李聃; 关键词：药物代谢酶

施氏鲟水霉病病原的初步研究被引量：22: 2009年; 从患水霉病的施氏鲟(Acipenser schrenckii)幼鱼肌肉中分离获得一株优势水霉菌株XJ001。大麻籽上水霉XJ001培养物的形态观察表明,菌丝透明无间隔,分枝少;新孢子囊以层出方式产生或从旧孢子囊根部长出,游动孢子按水霉属方式释放;在7℃、15℃和25℃条件下不能产生有性器官,但能够产生大量的厚垣孢子。电镜观察发现第二孢孢子表面具有大量弯曲的长毛,其在25%GY培养液中呈现出间接萌发。根据形态及生理学特征将水霉XJ001鉴定为寄生水霉(Saprolegnia parasitica)。水霉XJ001的最适生长温度为25℃,对NaCl敏感,当PDA培养基中NaCl质量分数为1%和2%时,水霉生长抑制率分别为37.4%和75.6%;质量分数大于3%时,生长被完全抑制。用水霉XJ001对异育银鲫(Carassius auratus gibelio)进行人工感染,结果表明XJ001有较强的致病力,异育银鲫感染严重,体表出现棉花状白毛,感染率为83.3%,感染后的死亡率为100%,可见XJ001是施氏鲟水霉病的病原菌。; 张书俊杨先乐李聃高鹏; 关键词：施氏鲟致病力

草鱼肝细胞中诱导剂对EROD作用的剂量效应研究: 本文在研究GCL细胞中EROD催化底物反应时间的基础上分别以三种数学模型拟合,分析比较了诱导剂TCDD、PCB、PB、BaP、3-MC、BNF对GCL细胞EROD酶活的剂量-效应曲线,结果表明Log-Normal模型能较...; 林茂杨先乐房文红张宁李聃邱军强; 关键词：EROD 诱导剂药物代谢酶草鱼肝细胞; 文献传递

大口黑鲈原代肝细胞的培养及其应用于CYP450活性的诱导被引量：7: 2008年; 体外培养大口黑鲈（Micropterus salmoides）原代肝细胞，观察其在培养过程中的形态变化，同时检测培养上清液中的乳酸脱氢酶（LDH）、白蛋白（ALh）含量，从而判定肝细胞的增殖和代谢能力，进而应用于CYP450的诱导研究。结果表明：培养5d后，肝细胞连接成片，分裂增多；培养至7d，细胞渐至单层；14d后，细胞停止生长，出现老化迹象。培养至第3—4天的细胞上清液中LDH的渗出量呈上升趋势，在第4天时达到峰值，随着培养时间的延长，肝细胞的酶渗出量逐渐减少。ALh的分泌量在第3—5天呈上升的趋势，第4—8天维持在较高水平，在第5天达到最高，此后随着培养时间的延长，ALb的分泌量呈下降趋势，故选择培养至第5天的大口黑鲈肝细胞应用于CYP450酶系中的氨基比林-N-脱甲基酶（ANDM）的诱导研究。40μM利福平诱导24h后，ANDM活性最高。ANDM的诱导研究为鱼类细胞药物代谢酶体外诱导奠定基础。; 喻文娟李聃王翔凌张宁邱军强杨先乐; 关键词：大口黑鲈肝细胞原代培养乳酸脱氢酶白蛋白

草鱼肝细胞中细胞色素P450 3A的酶促动力学被引量：1: 2008年; 用分光光度计法和反相高效液相色谱法研究了草鱼肝细胞系(GCL)中 CYP3A 探针酶类红霉素-N-脱甲基酶(ERND)和6β-睾酮羟化酶(6β-TOH)的酶促反应。药物利福平(RIF)在浓度为40μM时对 GCL 细胞中 CYP3A 活性具有显著诱导作用,而苯巴比妥(PB)和地塞米松(DEX)无显著诱导作用(P<0.05)。在低浓度底物条件下,对照组和40μMRIF 诱导组 GEL 细胞中 ERND 的酶促动力学方程分别为1/V=234.08×1/[S]+2.6544和1/V=85.632×1/[S]+1.9458,6β-TOH 的酶促动力学方程分别为1/V=529.91×1/[S]+14.615和1/V=56.337×1/[S]+2.1017;酶动力学参数表明,RIF 诱导的 CYP3A 亲和力较强,催化效能较高。当底物浓度进一步增高,EYP3A 活性反而降低,致使动力学曲线偏离经典的米氏动力学曲线,该结果表明 GCL 细胞中 CYP3A 存在特殊的负协同效应,这一现象是对鱼类细胞色素 P450(CYP)酶促动力学的有利补充。; 李聃杨先乐张书俊胡鲲林茂邱军强; 关键词：细胞色素P450 酶促动力学利福平

鱼类CYP3A活性体外诱导细胞模型的研究: 细胞色素P450 3A(CYP3A)是动物肝脏与小肠中含量最多的P450酶类，参与大多数药物的生物转化。鱼类CYP3A活性的诱导往往会导致药物的相互作用，从而可能产生渔药残留或影响渔药疗效，严重威胁水产品安全。然而，关于...; 李聃; 关键词：鱼类细胞色素 CYP3A 酶促动力学; 文献传递

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