杨琦
- 作品数：6 被引量：15H指数：2
- 供职机构：湖南师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生化学工程更多>>
- 利用转座子构建靶向侵袭性抗肿瘤工程菌被引量：2
- 2015年
- 转座子是一类在基因组上可以自由跳跃的移动序列,同时也是对微生物进行基因修饰和插入突变的有效工具,但尚未见有利用转座子导入革兰氏阴性菌E.coli Nissle1917菌株的报道.本研究通过构建p R6K转座载体,对肠道益生菌E.coli Nissle1917菌株进行了转座插入诱变,将假结核耶尔森菌的侵袭素基因inv和单核细胞增多性李斯特菌的溶血素基因hly随机整合至E.coli Nissle1917菌株的染色体上,从而使非致病性大肠杆菌E.coli Nissle1917获得侵袭哺乳动物细胞的能力.通过细胞体外侵袭实验发现,本研究所构建的工程菌对B16,HCT-116等肿瘤细胞有较好的侵袭活性,同时与抗肿瘤蛋白Azurin一起作用B16细胞,抗肿瘤效果显著增强,为进一步运用以大肠杆菌E.coli Nissle1917作为DNA疫苗或者基因治疗的载体开辟了新的技术途径.
- 白利明唐斯佳文也杨琦孙运军胡胜标丁学知夏立秋
- 关键词：大肠杆菌转座子抗肿瘤
- 第三代测序细菌基因组DNA提取方法的比较被引量：6
- 2015年
- 为筛选有效提取细菌菌株总DNA的方法,分别采用SDS法、CTAB-SDS法、试剂盒法和改良试剂盒法对苏云金芽胞杆菌、粘细菌和放线菌进行总DNA的提取、电泳检测、NanoDrop 2000测定、PCR扩增.对放线菌和苏云金芽胞杆菌,用改良试剂盒法所提取的总DNA纯度较高,电泳条带清晰,DNA主带位于23 kb,单位体积菌液所提取到的总DNA较SDS法和CTAB-SDS法高,能满足下游的PCR扩增等分子操作.对待测样品所做的质检报告也证实样品合格,可用于后续建库、测序.而粘细菌提取到的总DNA由于它们的OD260/230在2.0以下,没有达到第三代测序样品的要求.改良试剂盒法所提取到的总DNA大多数可以满足第三代测序技术样品制备的要求.
- 穰杰李莉唐琼杨琦何恋丁学知夏立秋
- 关键词：DNA提取方法
- 刺糖多孢菌bldD基因过表达对多杀菌素合成及其孢子形成的影响被引量：3
- 2015年
- bld D基因是链霉菌中的全局性调控基因,调节菌体的形态分化与次级代谢产物的合成。本研究采用重叠延伸PCR将bld D基因置于红霉素强启动子(Perm E)的控制下克隆至大肠杆菌-链霉菌穿梭载体p UC-spn上,构建重组载体p UC-spn-Perm E-bld D;通过接合转移将其导入刺糖多孢菌中,获得遗传性能稳定的重组菌株S.spinosa-Bld D。平板培养观察发现,在BHI和TSB平板上,重组菌株的孢子形成受到明显抑制。摇瓶发酵结果显示,重组菌株多杀菌素产量相比对照菌株提高了1.35倍。因此,bld D基因的过量表达在一定程度上抑制刺糖多孢菌的孢子形成,并有效促进多杀菌素的生物合成,为研究其他正调控基因的过量表达促进多杀菌素的生物合成奠定了重要基础。
- 蔡妹刘红雪杨琦孙运军胡胜标余子全黄伟涛丁学知夏立秋
- 关键词：刺糖多孢菌多杀菌素
- 透明颤菌血红蛋白基因在刺糖多孢菌中整合表达促进多杀菌素的生物合成被引量：2
- 2012年
- 为解决刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)高密度深层培养过程中的供氧不足问题,促进多杀菌素的生物合成,采用重叠PCR技术将透明颤菌(Vitreoscillastercoraria)血红蛋白基因(vgb)可读框(ORF)置于红霉素抗性基因启动子(PermE)之下,并将其克隆到整合型载体pSET152上,构建成vgb表达载体pSET152EVHB;通过接合转移方式将其导入刺糖多孢菌SP06081中,利用载体上ΦC31整合性位点通过位点特异性重组将vgb定点整合到SP06081菌株染色体上,获得一株遗传性能稳定的重组菌株S078-1101;重组工程菌的PCR与Southern blotting检测显示vgb已整合到染色体上,一氧化碳结合差光谱分析表明在S078-1101工程菌中表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb);摇瓶发酵结果显示,在正常溶氧与中度限氧状态下,vgb的表达均可显著促进多杀菌素的生物合成(P<0.01).这说明vgb在刺糖多孢菌中的整合表达改善了菌体对溶氧的吸收性能,是一种有效的定向遗传改良手段.
- 罗玉双寇笑笑丁学知胡胜标唐滢李文萍黄璠杨琦陈汉娜夏立秋
- 关键词：刺糖多孢菌多杀菌素透明颤菌血红蛋白同源重组
- 刺糖多孢菌功能基因组研究
- 刺糖多孢菌作为多杀菌素的生产菌种具有潜在的重要应用价值,一直是研究的热点.本研究采用第三代基因组测序方法,对刺糖多孢菌全基因组序列进行测序,同时利用相关生物信息学软件进行基因结构与功能分析.测序结果表明,该菌株基因组是一...
- 穰杰李莉李云龙杨琦唐琼丁学知夏立秋
- 藠头凝集素的分离纯化和凝集活性分析被引量：2
- 2013年
- 藠头鳞茎经pH7.3的磷酸缓冲液抽提,80%饱和硫酸铵沉淀粗分离,Q Sepharose强阴离子交换色谱及Superdex 200 HR 10/30葡聚糖凝胶色谱分离得到藠头凝集素(Allium chinense lectin,ACL)。血细胞凝集实验显示:ACL对兔血红细胞具有高凝集活性,其最小凝集质量浓度为0.2μg/mL;在70℃热处理10min后其凝集活性保持不变,表明该凝集素具有较好的热稳定性。经100mmol/L HCl处理后ACL的凝集活性无显著变化,而在100mmol/L NaOH处理后,其凝血活性明显降低,由此表明ACL在极端碱性环境中较不稳定,但是在极端酸性环境中较稳定。甘露糖能抑制ACL对兔血红细胞的凝集作用,揭示了ACL可能与甘露糖存在特异性结合。
- 肖秀情丁学知夏立秋杨琦徐沙
- 关键词：藠头凝集素纯化高效液相色谱
