梅倩
- 作品数：14 被引量：16H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LRP16短发夹RNA慢病毒载体的构建及LRP16稳定抑制细胞的建立
- 2014年
- 目的:构建靶向LRP16基因的短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,鉴定其在HeLa细胞中对LRP16的抑制效果。方法:构建pWPT-U6-LRP16shRNA-CMV-GFP慢病毒载体,通过病毒感染、细胞筛选、Western印迹等步骤,获得LRP16基因稳定抑制的细胞株。结果:构建了具有LRP16干扰效果的慢病毒载体,感染HeLa细胞后获得了稳定沉默LRP16及对照的细胞株;经克隆筛选,在荧光显微镜下观察到近似100%感染细胞发出绿色荧光;Western印迹证实pWPT-U6-L374-CMV-GFP和pWPT-U6-L668-CMV-GFP均可显著抑制HeLa细胞株中LRP16蛋白的表达,其中pWPT-Gsi-L374-GFP的抑制效果更好。结论:构建了靶向人LRP16基因shRNA慢病毒载体及LRP16稳定抑制的HeLa细胞系。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩庆旺韩为东
- 关键词：LRP16HELA细胞慢病毒载体
- miR-455慢病毒表达载体的构建与鉴定被引量：3
- 2013年
- 目的:构建人源microRNA-455(miR-455)慢病毒载体,并鉴定成熟has-miR-455在细胞内的表达水平。方法:提取SiHa细胞中的人基因组DNA,设计并合成人miR-455的上下游引物,PCR扩增目的基因,将其中表达miR-455的结构经酶切后插入慢病毒转移质粒pWPT-GFP,构建成pWPT-GFP-pri-miR-455,在293T细胞中与pMD2G、pSPAX2包装产生慢病毒,并用含慢病毒的上清感染SiHa细胞。结果:测序结果证明插入质粒载体中的miR-455前体序列完全正确,慢病毒载体构建成功并获得相应的慢病毒;重组慢病毒质粒pWPT-GFP-pri-miR-455感染SiHa细胞后上调miR-455的表达近40倍。结论:构建了miR-455的慢病毒载体,并能在293T细胞中表达,产生的慢病毒能成功感染SiHa细胞。为进一步研究miR-455的功能,以及利用慢病毒进行基因治疗奠定了基础。
- 张康梅倩李祥赵亚力韩为东孟元光
- 关键词：慢病毒表达载体SIHA细胞
- 食管癌预后标志物及其应用
- 本发明属于基因工程及肿瘤学领域，涉及食管癌预后标志物及其应用，具体涉及一种与食管癌染色体9q32区域杂合性缺失相关的miRNA标志物及其应用，该引物为食管癌染色体9q32区域杂合性缺失相关的miRNA标志物的引物。
- 梅倩韩为东李祥孟元光施路郭明洲张康
- 文献传递
- 复发耐药消化道肿瘤地西他滨综合治疗方案
- 本发明涉及药物领域，具体涉及复发耐药消化道肿瘤地西他滨综合治疗方案、复发耐药消化道肿瘤地西他滨的组合。
- 梅倩陈美霞韩为东李祥张燕
- 文献传递
- LRP16转基因小鼠的繁殖与鉴定
- 2014年
- 目的繁殖和鉴定携带有外源LRP16基因的转基因小鼠,为体内研究LRP16的生物学功能提供动物模型。方法首先将构建好的LRP16转基因重组质粒转染到293T细胞,鉴定该质粒是否可以有效表达目的蛋白,随后利用原核显微注射方法将线性化的重组质粒注射入品系为FVB的小鼠受精卵中,获得F0代小鼠。应用PCR方法对F0代小鼠进行鉴定,并将阳性F0代小鼠继续繁殖。结果 LRP16转基因重组质粒在293T细胞中可以有效表达,经PCR鉴定获得3只阳性F0代小鼠,阳性率为6.23%,选取其中1只整合有LRP16基因的F0代雄鼠,通过其与野生型FVB小鼠杂交获得7只F1代子鼠,其中4只为阳性鼠,阳性率为57.14%。从F1代中再次选取其中1只阳性雄鼠与野生型小鼠杂交繁殖获得5只F2代子鼠,PCR鉴定结果显示2只为阳性,阳性率为40%。结论 LRP16基因成功整合到小鼠基因组中,并且能够稳定遗传,为后续在动物整体水平研究LRP16的功能奠定了基础。
- 王春萌柏苗苗伍志强李小雷李祥梅倩韩为东
- 关键词：LRP16基因转基因小鼠繁殖基因鉴定
- Gateway技术构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP
- 2014年
- 目的构建转基因重组质粒pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP,为转基因鼠的建立奠定基础。方法利用重叠PCR技术扩增attB1-LRP16-His-attB2,经BP反应,将LRP16基因插入到载体pDown上,pUp-EF1A、pDown-LRP16-His、pTail-IRES-eGFP和PRP.Des3d经LR反应,将LRP16转移到pRP.EX3d上,转化Stbl3细胞,用氨苄西林进行抗性筛选,经PCR鉴定后将阳性克隆送测序。结果测序及酶切结果验证获得正确的pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒。结论成功构建pRP.EX3d-EF1A-LRP16-His-IRES-eGFP重组质粒,可用于下一步LRP16转基因小鼠的构建。
- 柏苗苗王春萌伍志强梅倩李小雷李祥赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16GATEWAY技术LRP16
- LRP16结合poly(ADP-ribose)关键位点的识别
- 2013年
- LRP16作为macro domain家族成员,可识别、结合poly(ADP-ribose),参与DNA损伤修复的早期反应.但究竟LRP16通过其何种氨基酸位点识别、结合poly(ADP-ribose)(PAR)尚不十分清楚.本研究首先通过对LRP16蛋白的结构分析,查找LRP16结合PAR的候选氨基酸位点,然后利用丙氨酸扫描技术构建系列LRP16(点)突变体,并且进行原核蛋白表达与纯化,将获得的蛋白质进行斑点杂交实验,检测LRP16突变体蛋白与PAR的结合活性.测序结果显示,LRP16点突变基因序列成功插入到原核表达载体pGEX-6p-1中;斑点杂交实验显示,LRP16中第160位D和第161位I突变成A后,其与PAR结合能力明显减弱,而第181位G、183位V、184位D同时突变为A,LRP16与PAR的结合活性有部分减弱.结果表明,LRP16中第160位和第161位的氨基酸是其与PAR结合的关键位点.
- 柏苗苗王春萌伍志强梅倩李小雷李祥赵亚力韩为东
- 关键词：LRP16
- 上调miR-181a和miR-181b表达对HeLa细胞生物学特性的影响被引量：4
- 2012年
- 目的:探讨miR-181a和miR-181b表达改变对HeLa细胞生物学特性的影响。方法:收集18例宫颈癌手术标本及18例正常宫颈组织标本,提取总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测miR-181a和miR-181b的表达情况。选取人宫颈癌细胞系HeLa细胞为研究对象,转染miR-181a和miR-181b成熟体。应用实时定量PCR技术检测转染后HeLa细胞中miR-181a和miR-181b的表达情况;流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化情况;CCK-8实验及细胞生长曲线检测细胞增殖能力。结果:miR-181a和miR-181b在宫颈癌组织中低表达。转染microRNA成熟体使细胞中miR-181a和miR-181b表达增高;HeLa细胞凋亡增加,细胞增殖能力下降,周期阻滞。结论:上调miR-181a和miR-181b的表达能够促进HeLa细胞凋亡,抑制细胞增殖,导致细胞G0/G1期阻滞。miR-181a和miR-181b可能为宫颈癌临床靶向治疗的靶点选择和药物开发提供理论基础。
- 张康梅倩李祥赵亚力李小雷韩为东孟元光
- 关键词：MICRORNAHELA细胞凋亡增殖
- 过表达miR-455抑制宫颈癌细胞SiHa的生长被引量：6
- 2012年
- 研究表明,microRNA(miRNA)可作为癌基因或抑癌基因发挥功能、调控细胞增殖和凋亡等生物学行为,与肿瘤的发生发展密切相关.在本研究中,我们检测了miR-455在宫颈癌组织中的表达变化及其对宫颈癌SiHa细胞生物学功能的影响.Real-time PCR实验结果显示,miR-455在宫颈癌组织样本中较正常宫颈组织表达明显降低.瞬时转染miR-455 mimics使其在SiHa细胞中过表达.CCK-8及流式细胞术分析显示,过表达miR-455明显抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,导致细胞G1/S期阻滞.Real-time PCR分析显示,PI3KR1,BCL2L2 mRNA明显降低.上述研究结果表明,miR-455可显著降低SiHa细胞存活能力,是一个潜在的抑癌基因.
- 张康梅倩李祥赵亚力李小雷韩为东孟元光
- 关键词：MICRORNA宫颈癌细胞周期
- LRP16影响宫颈癌Siha细胞对化疗药物的敏感性
- 2015年
- 目的:探讨抑制LRP16的表达对宫颈癌Siha细胞的化疗药物敏感性的影响。方法:将抑制LRP16表达的小干扰RNA:negativecontrol-si RNA(NC)、si RNA-374(si374)转染入Siha宫颈鳞癌细胞系中,通过顺铂(DDP)和紫杉醇(TAX)的处理后,采用CCK-8检测不同浓度紫杉醇、顺铂作用宫颈癌细胞系Siha48 h后,计算出细胞被抑制一半时顺铂、紫杉醇的药物浓度(IC50);使用Hoechst33342染色观察细胞凋亡,采用流式细胞仪检测顺铂IC50作用Siha细胞48小时后的细胞凋亡情况,紫杉醇IC50作用Siha细胞之后的细胞周期分布情况。结果:CCK-8检测转染的Siha细胞增殖活性受到抑制,Hoechst33342染色观察转染的Siha细胞凋亡明显增加,流式细胞仪检测凋亡显示,si374+顺铂的早期凋亡率22.15±2.24,NC+顺铂12.45±2.72,流式细胞仪检测周期显示G2/M(%),si374+紫杉醇29.94±1.87,NC+紫杉醇17.66±2.32。结论:LRP16基因表达下调之后,抑制Siha细胞的增殖、促进其凋亡,使细胞周期滞留于G2/M期,从而提高Siha细胞的化疗敏感性。
- 于丹伍志强梅倩白桦韩为东孟元光
- 关键词：LRP16SIHA细胞周期
