王从珠
- 作品数：6 被引量：5H指数：2
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- 发文基金：上海市科学技术发展基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 凝血酶调节蛋白植物凝集素样片段的原核表达及抗体制备
- 2004年
- 目的 :制备凝血酶调节蛋白 (thrombomodulin ,TM)抗体。方法 :原核表达目的蛋白 ,将表达的融合蛋白纯化后免疫小鼠。以EVC30 4包板的cell ELISA检测抗体滴度 ,用Westernblot和免疫组化鉴定抗体特异性。结果 :目的蛋白在大肠杆菌中大量表达形成包涵体 ,将表达蛋白纯化并复性后免疫小鼠 ,3次免疫后得抗体效价为 1∶4 0 0 0 ,经加强免疫后抗体效价达到1∶80 0 0 ;特异性较好。结论 :在天然TM提取纯化困难的情况下 。
- 钱高潮王红郑佐娅王从珠杭勤李卫鹏盛慧明高丰厚李稻王鸿利
- 关键词：凝血酶调节蛋白原核表达抗体制备免疫后加强免疫植物凝集素
- 冠心病TM1418位单核苷酸多态性研究
- 2003年
- 钱高潮郑佐娅殷兆芳康文英王从珠王红李稻王鸿利
- 关键词：冠心病凝血酶调节蛋白单核苷酸多态性聚合酶链反应
- B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体构建及纯化被引量：2
- 2007年
- 目的:克隆人B型钠尿肽(脑钠素,B-type natriuretic peptide,BNP)基因,纯化其表达蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR技术从正常成人心脏组织cDNA库中扩增出人BNP基因,将其克隆进pUCm-T中并测定核苷酸序列。构建大肠埃希菌分泌性表达载体pGXE4T-2/BNP,用异丙基β硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,GSH-agarose亲和纯化表达蛋白,用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。结果:经PCR扩增成功获得96 bp的BNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的19%,用SDS-PAGE和W estern b lot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子量29 500。经亲和纯化后GST-BNP的纯度可以达到95%,500 m l菌液中得到纯化蛋白9.6 mg。多克隆抗体的效价为1∶32 000。结论:BNP基因的克隆、表达和纯化成功以及多抗的获得,为建立BNP检测方法奠定了基础。
- 李卫鹏郑佐娅王红王从珠杭勤赵卫国
- 关键词：基因文库克隆分子纯化
- 氨基末端脑利钠肽的原核表达与纯化及稳定性研究
- 2005年
- 目的从构建了人氨基末端脑利钠肽(aminoterm inal probrain natriuretic peptide,NTproBNP)基因的表达菌中抽取目的蛋白,并对其进行纯化、鉴定及稳定性的初步研究。方法取表达菌株BL21pGEX4T3NTproBNP,IPTG诱导表达,GSHagarose亲和纯化目的蛋白,提纯产物进行SDSPAGE电泳和Westernblot鉴定,并采用自动免疫分析仪检测其免疫反应性和稳定性。结果GSTNTproBNP融合蛋白表达水平高,可溶性好。SDSPAGE、免疫测定分析显示其相对分子量为34600,具有较高的特异免疫反应性和稳定性。结论NTproBNP能通过基因工程手段以GST融合蛋白的形式大量获取,在非变性条件下得到的GSTNTproBNP有较好的免疫反应活性和稳定性。
- 郑佐娅李卫鹏王红王从珠杭勤赵卫国
- 关键词：钠尿肽重组融合蛋白质类
- NT-proBNP的原核表达与纯化及稳定性研究
- 氨基末端脑钠肽(NT-proBNP)含有76个氨基酸残基,分子量为8600,由心肌细胞中的脑钠肽原(proBNP)在形成脑钠肽过程中酶切生成,位于proBNP的氨基端,故得名。研究表明:在充血性心力衰竭病人,血浆中的NT...
- 郑佐娅李卫鹏王红王从珠杭勤赵卫国
- 关键词：氨基末端脑钠肽原核表达基因工程血液学检验
- 文献传递
- 氨基末端B型钠尿肽基因的克隆和原核表达载体的构建及纯化被引量：3
- 2005年
- 目的克隆人氨基末端B型钠尿肽(NT-proBNP)基因,构建原核表达载体并纯化其表达蛋白。方法用聚合酶链反应(PCR)从正常成人cDNA库中扩增出人NT-proBNP基因,将其克隆进pUCm-T中测定核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pGEX-4T-3-NT-proBNP,IPTG诱导表达,GSH-agarose亲和纯化该表达蛋白。结果经PCR扩增成功获得228bp的NT-proBNP基因,测序正确,在大肠埃希菌中融合表达后,该蛋白的表达量占菌体总蛋白的23%,用SDS-PAGE和Westernblot鉴定大肠埃希菌中的表达产物,显示其相对分子质量为34600。经亲和纯化后的GST-NT-proBNP的纯度可以达到95%,得率为1.7mg/100ml。结论NT-proBNP基因的克隆、表达和纯化成功,为建立NT-proBNP检测方法奠定了基础。
- 李卫鹏郑佐娅王红王从珠杭勤赵卫国
- 关键词：氨基末端B型钠尿肽克隆纯化
