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王筱绘

作品数:3 被引量:5H指数:1
供职机构:重庆医科大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 2篇期刊文章
  • 1篇学位论文

领域

  • 2篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 2篇结合域
  • 2篇泛素
  • 2篇泛素化
  • 2篇P53
  • 1篇真核
  • 1篇真核表达
  • 1篇真核细胞
  • 1篇体检
  • 1篇突变体
  • 1篇细胞
  • 1篇免疫
  • 1篇免疫共沉淀
  • 1篇结构域
  • 1篇抗体
  • 1篇抗体检测
  • 1篇核表达
  • 1篇核细胞

机构

  • 3篇重庆医科大学

作者

  • 3篇王筱绘
  • 2篇段昌柱
  • 2篇白露
  • 1篇周丹琳
  • 1篇胡斌

传媒

  • 1篇中国生物制品...
  • 1篇中国生物化学...

年份

  • 1篇2013
  • 2篇2012
3 条 记 录,以下是 1-3
排序方式:
NIRF泛素化p53的作用过程中NIRF与p53结合域的测定被引量:5
2012年
NIRF(Np95/ICBP90-like RING finger protein)是2002年发现的一种核蛋白,其功能涉及细胞增殖调节、蛋白多聚泛素化降解、细胞癌变进程控制等领域.已有研究报道,NIRF能与p53相互作用,NIRF本身也是一个高度调节蛋白,在细胞正常的生理状态下发挥泛素化E3连接酶的作用,结合p53并将其降解,但NIRF与p53结合的蛋白结合域目前尚不清楚.本文研究证明,NIRF能与p53结合成复合体参与泛素化蛋白降解途径,并测定出NIRF与p53结合的区域.为了检测NIRF的蛋白结合域,将空载体和NIRF缺失突变体质粒分别转染于HEK293细胞,蛋白表达水平通过Western印迹用两种抗体分别检测.结果显示,所有的突变体都能在细胞中表达,并且两种抗体检测结果完全一致.同时,免疫共沉淀技术用于进一步分析实验结果.由于泛素化蛋白通常伴随蛋白酶体通路介导的降解,免疫共沉淀的蛋白纯化过程中用蛋白酶体抑制剂MG-132以抑制蛋白降解.本研究结果显示,NIRF通过PHD区域与p53形成复合体.该复合体可能参与蛋白分选、蛋白降解、DNA修复以及细胞凋亡等一系列重要的细胞活动,从而形成与细胞增殖相关的新的信号通路,在肿瘤的发生发展中可能发挥某种程度的作用.
王筱绘白露段昌柱
关键词:P53免疫共沉淀
NIRF泛素化p53作用过程中NIRF与p53结合域的测定
目的  Np95/ICBP90-like RING finger protein(NIRF)是新近发现的一种核蛋白,其包括802个氨基酸残基,蛋白分子内部含有UBL(ubiquitin-like domain)、PHD、...
王筱绘
关键词:抗体检测
文献传递
UHRF2不同结构域缺失突变体的真核表达被引量:1
2013年
目的构建UHRF2不同结构域缺失突变体,并在HEK293细胞中表达。方法根据UHRF2不同结构域位置特征,构建5种不同结构域缺失突变体;以重组质粒pCMV-3xFlag-UHRF2为模板,PCR法直接扩增△UBL、△RING和△YDG+△RING编码基因,重叠PCR法扩增△PHD和△YDG编码基因,定向克隆至pCMV-3xFlag真核表达载体中,构建重组表达质粒,转染HEK293细胞,Western blot鉴定重组蛋白的表达。结果 UHRF2的结构域缺失体△UBL、△PHD的上游和下游及上下游合并、△YDG的上游和下游及上下游合并、△RING和△YDG+△RING的PCR产物分别可见2 018、987、1 152、2 272、1 232、629、1 827、2 163和1 287 bp的特异条带;UHRF2各结构域缺失体的重组表达质粒经双酶切和测序鉴定,证明构建正确;重组质粒转染HEK293细胞表达的重组蛋白大小均与理论值相符。结论成功在HEK293细胞中表达了UHRF2不同结构域缺失突变体,为进一步研究UHRF2各结构域的功能及其与其他蛋白质的相互作用位点奠定了基础。
白露王筱绘胡斌周丹琳段昌柱
关键词:结构域真核细胞
共1页<1>
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