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胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达: 2006年; 目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。; 金彩霞李文林朱吉田棣张南胡以平; 关键词：逆转录病毒科干细胞

Hes1基因在小鼠肝干细胞分化中的功能研究: 本研究首次通过体外获得性表达Hes1基因，探究其在小鼠肝干细胞分化中的作用。实验结果显示：卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达逐步上调;胆管细胞分子标志CK19、GGT...; 田棣; 关键词：肝干细胞胆管上皮细胞胆管疾病; 文献传递

胰十二指肠同源盒基因-1启动子在肝干细胞分化研究中的应用: 2006年; 背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(Liverepithelialprogenitorcells,LEPCs)观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果获得PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体及报告载体标记的LEPCs。结论pPDX-1EGFP报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。; 金彩霞李文林朱吉张南田棣胡以平; 关键词：肝干细胞转分化绿色荧光蛋白

人胎肝干细胞在重症联合免疫缺陷小鼠损伤肝脏中的植入被引量：5: 2005年; 目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(Oct-4)的表达,然后植入经四氯化碳(CCl4)造成急性肝损伤的SCID小鼠体内,在移植后2、l0、17d分别对受体鼠肝脏冰冻切片进行荧光观察和H-E染色.结果:所建立的胎肝细胞系不仅表达二肽水解酶Ⅳ(DPPⅣ)、白蛋白(Alb)、细胞角蛋白(CK)19、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、CK18、肝细胞生长因子受体(c-met)、干细胞因子受体(c-kit)等肝干细胞相关标志,还表达干细胞转录因子Oct-4.在细胞移植后2 d,肝脏冰冻切片未见绿色荧光;移植后10 d和17d肝脏冰冻切片见散在的绿色荧光.对同一切片做H-E染色,发现绿色荧光部位为肝板内的多个成熟肝细胞.结论:从人胚胎肝脏中分离的干细胞能够植入SCID小鼠的损伤肝脏.; 苏娟李文林陶欣荣朱海英王新民李建秀田棣余宏宇Joseph T Lau胡以平; 关键词：肝干细胞胚胎重症联合免疫缺陷细胞移植

Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞(英文)被引量：1: 2008年; 背景与目的:采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。材料与方法:通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs),应用RT_PCR和Real-timePCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果:成功构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real_timePCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。结论:初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。; 田棣李文林攸璞金彩霞朱吉张南胡以平; 关键词：HES1 分化胆管上皮细胞

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