申健
- 作品数:2 被引量:7H指数:1
- 供职机构:苏州大学附属第一医院更多>>
- 发文基金:江苏省医学重点人才培养基金更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- 自噬在眼镜蛇神经毒素诱导A549细胞死亡中的作用被引量:7
- 2013年
- 背景与目的已有的研究表明眼镜蛇神经毒素具有抗肿瘤作用,而其在肺癌中的作用罕有研究。本研究观察cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞株的抗肿瘤作用,探讨自噬和P38-MAPK通路在这过程中的作用。方法应用MTT法观察cobrotoxin对A549细胞和HFL1人肺成纤维细胞的生长抑制作用以及用3-MA抑制自噬、SB203580抑制P38-MAPK通路后cobrotoxin对A549细胞的生长抑制作用;应用细胞集落平板克隆实验检测cobrotoxin对A549细胞的集落形成的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)测定单独cobrotoxin作用、cobrotoxin分别联合3-MA抑制自噬和SB203580抑制P38-MAPK通路活性后A549细胞内beclin-1、LC3、P62、P38及pP38等蛋白表达水平。结果不同浓度cobrotoxin对A549细胞的生长有明显抑制作用,对HFL1人肺成纤维细胞无明显抑制作用,3-MA、SB203580作用后cobrotoxin对A549细胞的抑制作用降低;不同浓度cobrotoxin可明显抑制A549细胞的集落形成;cobrotoxin作用后beclin-1、pP38蛋白表达水平明显提高,P62表达明显降低,II型/I型LC3比值增大,并有浓度依赖性,3-MA抑制自噬后beclin-1蛋白表达水平降低,P62表达增高、II型/I型LC3比值减小,SB203580抑制P38-MAPK通路后beclin-1、pP38蛋白表达水平降低,II型/I型LC3比值减小。结论 cobrotoxin对人肺A549腺癌细胞体外生长有抑制作用,可能通过活化P38-MAPK通路激活自噬参与抗肿瘤过程。
- 申健何靖康唐兴韩蓉李睿徐澄澄吴亚娟
- 关键词:眼镜蛇神经毒素自噬P38-MAPK
- 响尾蛇神经毒素诱导人大细胞肺癌 NCI-H661细胞凋亡机制研究
- 2015年
- 目的观察南美响尾蛇神经毒素(crotoxin)诱导人大细胞肺癌 NCI-H661细胞的凋亡,并初步探讨其作用机制。方法通过四唑盐还原法(CCK-8)检测 crotoxin 对 NCI-H661细胞的生长抑制率,应用细胞集落平板克隆实验观察 crotoxin 对 NCI-H661细胞集落形成的影响。实验分4组:阴性对照组、crotoxin 组(60μg/ ml crotoxin 作用24 h)、crotoxin + SB203580组(5μmol/ L SB203580预处理1 h 后,60μg/ ml crotoxin 作用24 h)、SB203580组(5μmol/ L SB203580预处理1 h 后,完全培养液培养),应用流式细胞术检测 crotoxin 对 NCI-H661细胞周期及细胞凋亡的影响,并检测以 SB203580抑制 p38MAPK 活性后细胞周期及细胞凋亡率的变化。结果当 crotoxin 浓度≥30μg/ ml 时对 NCI-H661细胞生长和集落形成有抑制作用,且抑制率随着作用时间和给药浓度的增加而上升;流式细胞术检测 crotoxin 对 NCI-H661细胞周期及细胞凋亡影响结果显示 crotoxin 组、crotoxin + SB203580组凋亡率分别为(16.70±1.38)%、(2.15±0.54)%,与对照组(1.47±0.29)%相比,前者差异具有统计学意义,后者差异无统计学意义(t =-18.763,P =0.000;t =-1.935,P =0.125);crotoxin 组、crotoxin + SB203580组 G1期细胞分别为(57.25±1.09)%、(48.04±1.03)%,与对照组(47.46±0.69)%相比,前者差异具有统计学意义,后者差异无统计学意义(t =-13.124,P =0.000;t =-0.809,P =0.464)。结论 crotoxin 对人大细胞肺癌NCI-H661细胞凋亡有促进作用,这一作用可能与其激发 p38MAPK信号通路活性有关。
- 李睿何靖康申健施臻李威于晓军
- 关键词:神经毒素类细胞凋亡