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肖高飞: 作品数：29 被引量：46H指数：4; 供职机构：江苏大学附属人民医院更多>>; 发文基金：镇江市科技支撑计划(社会发展)项目江苏省医学重点人才培养基金江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子基因启动子甲基化特异性PCR法的建立与初步应用被引量：1: 2009年; 目的建立甲基化特异性PCR(MSP)技术检测黏着斑激酶相关性鸟苷三磷酸酶调节因子(GRAF)基因启动子甲基化。方法设计针对GRAF基因启动子的MSP引物,建立MSP检测体系,对不同DNA模板进行检测,评价方法的特异性、重复性和灵敏度;对10例急性髓系白血病(AML)标本进行检测。结果建立的MSP方法仅能扩增出甲基化阳性模板,不能扩增出未甲基化阳性模板和未硫化处理的DNA模板;检测不同稀释度的甲基化阳性模板,其最大灵敏度可达2%;在不同时间进行MSP检测的结果均一致;对10例AML患者的初步检测发现7例存在着GRAF基因启动子甲基化。结论成功建立了检测GRAF基因启动子甲基化的MSP方法,有良好的特异性、灵敏度和重复性,可用于临床AML标本的批量检测。; 钱震林江钱军姚冬明王雅丽韩兰秀朱照辉肖高飞; 关键词：甲基化特异性PCR 甲基化

建立PCR-高分辨率熔解曲线分析法检测淋巴瘤MYD88基因突变被引量：1: 2013年; 髓系分化起始反应基因88（MYD88）位于染色体3p22，编码蛋白为Toll样受体（TLR）信号传导途径中的一个重要接头分子，结构上主要包括2个功能域：N端的死亡域（DD）和C端的Toll域（TIR），在天然免疫应答和炎症反应中发挥着重要的调控作用[1-2]。最近的研究发现39％活化B细胞（ABC）型弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）患者中存在MYD88基因的获得性突变[3]，其中位于TIR域的L265P突变发生率最高（29％）。高分辨率熔解曲线分析（High resolution melt—ing curve analysis，HRMA）是一种新型的突变分析技术，具有灵敏度高、特异性好、成本低廉、高通量检测的优点，已在临床上得到越来越多的应用[4]。; 薛娣林江肖高飞钱军钱炜邵睿姚冬明柴海彦李云王翠竹陈芹陈星星; 关键词：弥漫大B细胞淋巴瘤熔解曲线分析基因突变 MYD88 TOLL样受体信号传导途径

慢性髓系白血病中prame基因转录本的定量研究被引量：1: 2010年; 本研究旨在分析慢性髓系白血病(CML)患者中黑色素瘤优先表达抗原(prame)的基因转录本表达状况及其临床意义。用实时定量PCR(RQ-PCR)方法对30例CML患者和15例缺铁性贫血(IDA)患者骨髓单个核细胞中prame基因转录本水平进行检测。结果表明:15例缺铁性贫血患者骨髓单个核细胞(BMMNC)中prame转录本水平为0%-1.46%(中位0.19%),30例CML患者中BMMNC中prame基因转录本水平为0%-772.25%(中位8.28%),二组之间具有显著性差异(p<0.001)。CML患者中prame基因转录本含量与bcr-abl融合基因转录本水平显著相关(r=0.708,p<0.001);6例CML加速期(AP)和急变期(BC)患者中prame基因转录本水平明显高于24例慢性期(CP)患者(p=0.007)。动态检测2例CML患者在不同病程中prame基因转录本水平变化显示,AP及BC时prame基因转录本水平增高,经治疗后恢复至CP时prame基因转录本水平降低,与bcr-abl转录本变化趋势一致。结论:CML患者中prame基因转录本表达水平增高,且与病情发展相关,可用于病情监测。; 朱照辉钱军林江钱震姚冬明王雅丽陈芹肖高飞; 关键词：慢性粒细胞白血病实时定量PCR

高分辨熔解曲线分析法检测急性髓细胞白血病IDH2基因突变: 2012年; 目的建立高分辨熔解曲线分析(HRMA)技术检测急性髓细胞白血病(AML)中可溶性异柠檬酸脱氢酶2(IDH2)基因突变。方法针对IDH2突变位点设计PCR扩增引物,建立带有温度内标校准品的PCR扩增体系,对98例AML患者标本进行PCR扩增,用HRMA技术对PCR产物进行突变分析,并通过DNA测序技术对HRMA结果进行验证。结果对98例AML样本的PCR产物进行HRMA检测,发现5例存在异常熔解曲线,对此5例标本及随机选择的HRMA显示为野生型的35例IDH2标本进行DNA测序验证,结果表明,存在异常熔解曲线的5例标本为4例R140Q突变和1例R172K突变,其余35例经DNA测序证实为野生型IDH2;对不同浓度梯度的R140Q质粒HRMA检测结果表明其灵敏度为2%。结论成功建立HRMA技术检测IDH2突变,其可用于AML标本的临床检测。; 薛娣邵睿林江肖高飞钱军姚冬明柴海彦李云杨静王翠竹陈星星; 关键词：基因突变急性髓细胞白血病

基于drop-off ddPCR方法检测急性髓系白血病C-KIT基因N822位点突变及其临床应用: 2024年; 目的:建立急性髓系白血病(acute myeloid leukemia, AML)患者C-KIT基因N822位点突变的drop-off微滴式数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量检测方法,并评价其临床应用价值。方法:针对C-KIT基因第17外显子设计一对引物及探针,优化drop-off ddPCR反应条件及体系,评价该方法的特异性、灵敏度、重复性,使用所建立的方法对140例已行Sanger测序的AML初诊患者骨髓标本进行检测,并用二代测序(next generation sequencing, NGS)验证结果;用drop-off ddPCR对3例阳性患者化疗后C-KIT突变频率进行动态监测。结果:drop-off ddPCR检测C-KIT基因N822位点突变的最适退火温度为54℃,空白检测限为1.62拷贝数/μL,最低检测下限为10.12拷贝数/μL,线性良好。140例AML初诊患者样本中Sanger测序检出2例阳性(1.4%),而ddPCR共检出突变7例(5.0%),突变频率为0.29%~7.41%;进一步应用常规NGS方法对ddPCR阳性样本进行验证,共检出阳性3例(2.1%),等位基因频率为1.26%~8.00%。动态监测3例阳性患者C-KIT突变频率,结果显示治疗达完全缓解时C-KIT突变频率明显下降甚至降低至0。结论:本研究建立了检测C-KIT基因N822位点突变的drop-off ddPCR技术,具有良好的方法学检测性能,其灵敏度高于Sanger测序和NGS,有望用于阳性患者缓解后的可检测残留疾病监测及治疗指导。; 李婷金晔袁倩姚冬明向鹤麟肖高飞于迪冷加燕林江钱军; 关键词：C-KIT基因急性髓系白血病

四种基因甲基化特异性PCR引物设计探讨: 2009年; 目的:对甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)引物设计进行探讨。方法:使用Methyl PrimerExpress Software Version 1.0软件、"methprimer"和"MSPprimer"的网上在线软件设计的引物以及参照国外文献的MSP引物对CCAAT/增强子结合蛋白ζ(CEBPζ),CCAAT/增强子结合蛋白δ(CEBPδ)、脆性组氨酸三联体(FHIT)和死亡相关蛋白激酶(DAPK)基因启动子进行MSP扩增,然后对其MSP产物进行测序验证以比较MSP引物设计的可靠性。结果:对于CEBPζ,CEBPδ,FHIT和DAPK启动子基因所设计的MSP引物经MSP后均获得了所需要的目的条带,但经测序鉴定Methyl Primer Express和methprimer设计的CEBPδ,CEBPζ-1的MSP扩增产物为假阳性产物,而MSPprimer设计的CEBPζ-2的MSP产物为正确序列。结论:MSP引物设计的质量是保证MSP扩增成功的关键因素。; 林江姚冬明钱军许文荣钱震朱照辉陈芹王雅丽肖高飞; 关键词：甲基化特异性PCR 引物

急慢性髓系白血病患者中HAGE表达的定量研究: ＜正＞肿瘤/睾丸抗原（CTA）是一类肿瘤特异性抗原,在正常组织（睾丸和胎盘除外）中均不表达,而在多种肿瘤中广泛表达。CTA在肿瘤组织中表达的特异性促进了肿瘤靶向免疫治疗的研究。螺旋酶抗原（HAGE）是一个新的CTA分子,...; 陈芹林江钱军柴海彦王翠竹杨静李云姚冬明肖高飞; 文献传递

应用PCR-高分辨熔解分析法检测急性髓系白血病IDH1基因突变: ＜正＞可溶性异柠檬酸脱氢酶1（isocitrate dehydrogenase1,IDH1）基因位于染色体2q33.3,编码蛋白催化异柠檬酸氧化脱羧为α酮戊二酸,同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP+）形成为还原型烟...; 林江钱军姚冬明肖高飞柴海彦李云王翠竹纪润璧陈芹许文荣; 文献传递

SF3B1突变在中国人急性与慢性髓系白血病中是一个罕见分子事件: 目的:最近研究发现剪接因子3b亚基1(splicing factor 3b subunit 1,SF3B1)基因突变常见于骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)与慢性淋巴细胞白血病...; 杨静钱军林江姚冬明钱思轩钱炜王翠竹陈星星肖高飞马吉春邓兆群

建立HRMA技术检测弥漫大B细胞淋巴瘤中髓样分化因子88突变: 目的:髓样分化因子88(MYD88) L265P基因在一定比例的弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和慢性淋巴细胞白血病中检测到频发突变.本次研究的目的是通过高分辨率熔解曲线分析法(HRMA),快速,敏感,可靠的检测DLBC...; 王翠竹林江钱军邵睿薛娣钱炜肖高飞邓兆群杨静李云陈星星

肖高飞

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