范平
- 作品数：3 被引量：4H指数：2
- 供职机构：华中科技大学同济医学院附属协和医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MT2-MMP基因沉默对缺氧条件下培养的胰腺癌AsPC-1细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响被引量：2
- 2013年
- 目的 利用特异性siRNA沉默人胰腺癌AsPC-1细胞的膜型金属蛋白酶2（MT2-MMP）基因表达,观察其对缺氧条件下培养的细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响.方法 采用脂质体转染法将插入MT2-MMP特异性siRNA的真核表达质粒转染至人胰腺癌AsPC-1细胞株（siRNA组）,以转染过表达MT2-MMP质粒（过表达组）或阴性对照质粒（空载体组）的AsPC-1作为对照.实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测转染细胞的MT2-MMP mRNA和蛋白的表达.在缺氧条件（37℃、1％O2、5％ CO2、饱和湿度的三气培养箱）下培养后,应用CCK-8法检测转染细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Transwells小室检测细胞的侵袭能力.结果 成功获取MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞株和过表达的细胞株.缺氧条件下培养24h后,空载体组、过表达组、siRNA组细胞增殖的吸光度值（A490值）分别为0.68±0.08、0.80 ±0.08、0.52±0.07;细胞凋亡率分别为（6.2±1.5）％、（2.8±1.1）％、（21.4±3.9）％;每个视野（200倍）的穿膜细胞数分别为（115.8 ±23.2）、（256.4±38.6）、（45.8±18.2）个.siRNA组较空载体组的细胞增殖显著被抑制,穿膜细胞数显著减少,而细胞凋亡率显著增加（P值均＜0.05）.过表达组较空载体组的细胞增殖显著增强,穿膜细胞数显著增加,而细胞凋亡率显著降低（P值均＜0.05）.结论 MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞在缺氧条件下培养后细胞凋亡增加,增殖被抑制,侵袭力减弱.
- 朱世凯周玉范平王博吴汉青杨洪吉熊炯炘吴河水
- 关键词：基质金属蛋白酶类缺氧肿瘤浸润
- Toll样受体9和低氧诱导因子1α在胰腺癌中的表达及其意义
- 2012年
- 目的研究Toll样受体9（TLR9）和低氧诱导因子1仪（HIF-let）在胰腺癌组织中的表达，探讨其临床意义。方法采用实时定量PCR法、蛋白质印迹法及免疫组织化学法检测30例胰腺癌组织及其相邻癌旁组织、10例正常胰腺组织中TLR9和HIF-1et的表达，分析两者表达的相关性、与肿瘤临床病理特征的关系以及对患者生存时间的影响。结果胰腺癌TLR9mRNA及HIF-1etmRNA表达量分别为正常胰腺组织的2．32（1．41～3．22）倍和2．26（1．62～2．89）倍，癌旁组织表达量分别为正常胰腺组织的1．23（1．18～1．28）倍和1．36（1．17～1．55）倍，胰腺癌的表达量显著高于癌旁组织（t=2．642，P=0．023；t=4．076，P=0．001）。胰腺癌组织TLR9和HIF-let蛋白阳性表达率分别为73．3％（22／30）和70．0％（21／30），癌旁组织分别为33．3％（10／30）和36．7％（11／30），正常胰腺组织分别为20％（2／10）和10％（1／10），呈递减趋势（χ2=13．99，P=0．001；0=13．15，P=0．001）。胰腺癌组织TLR9mRNA与HIF．1etmRNA表达呈正相关（r=0．537，P=0．003），TLR9和HIF-1α蛋白阳性表达率亦呈正相关（r=0．511，P=0．001）。胰腺癌组织TLR9和HIF-1d表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴结转移呈正相关，与患者的生存时间呈负相关。结论胰腺癌组织TLR9和HIF-let基因均高表达，且与肿瘤细胞的恶性生物学行为及患者预后差有关。
- 吴汉青王博范平吴河水
- 关键词：胰腺肿瘤TOLL样受体9低氧诱导因子1Α
- siRNA沉默HIF—1α在缺氧状态下对胰腺癌细胞TLR4表达的影响被引量：2
- 2012年
- 目的观察体外乏氧培养条件下胰腺癌细胞系Panc－1中HIF－1α和TLR4的表达，探讨HIF－1α在低氧条件下对胰腺癌细胞TLR4的调控作用。方法低氧箱培养和CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境，RT—PCR、免疫荧光法和流式细胞法分别检测缺氧状态下HIF-1α和TLR4在mRNA和蛋白水平的表达。采用化学合成小干扰RNA（siRNA）介导的RNA干扰技术（RNAi）用siRNA转染Panc－1细胞。观察转染后HIF-1α沉默效果。结果低氧条件下，Panc－1细胞HIF－1α mRNA水平稳定，蛋白表达显著升高，而TLR4mRNA和蛋白的表达均显著升高。siRNA转染Panc－1后能够显著下调HIF－1α的基因表达，同时TLR4基因的表达上调也受到明显抑制。结论缺氧促使胰腺癌Panc－1细胞TLR4在蛋白水平表达升高，TLR4信号通路可能和HIF-1α信号通路存在相互联系，并且共同促进了胰腺癌的恶性进展。
- 何志强范平王博吴汉青张景辉吴河水
- 关键词：亚基
