董金杰 作品数:14 被引量:38 H指数:4 供职机构: 甘肃农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 国家高技术研究发展计划 甘肃省科技支撑计划 甘肃省中青年科技研究基金 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
稳定表达T_7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系的建立 被引量:1 2012年 根据GenBank中登录的T7RNA聚合酶基因参考序列,设计合成了1对特异性引物扩增对T7RNA聚合酶基因进行扩增,将测序正确的T7RNA聚合酶基因和真核表达载体pIRES2-EGFP双酶切后进行连接构建pIRES2-EGFP-T7RNA RNA质粒。再将构建正确的pIRES2-EGFP-T7RNA质粒经用脂质体法转染猪睾丸细胞,通过G418筛选和单细胞克隆化,同时构建pET-32a-RED原核表达质粒载体,用其检测T7启动子控制下的红色荧光蛋白的表达。结果表明,建立的ST/T7RNA细胞系经20次传代仍然能稳定表达T7RNA聚合酶。结果显示,成功建立能稳定表达T7RNA聚合酶的猪睾丸细胞系,为猪瘟病毒反向遗传操作平台奠定了基础。 祁光宇 刘萍 刘斌 王凡 武发菊 杜平 董金杰 黄银君 牟克斌 刘学荣O型口蹄疫mRNA疫苗的研制 口蹄疫是当今国际上最重要的动物传染病之一,能够侵染所有的偶蹄动物。疫苗免疫仍是防控口蹄疫的首要选择。由于口蹄疫病毒血清型多且容易发生变异,致使流行毒株和疫苗株之间抗原匹配性不高,影响疫苗免疫效力和疫病预防效果。mRNA疫... 董金杰关键词:口蹄疫病毒 免疫原性 用蔗糖密度梯度离心法检测与定量口蹄疫病毒抗原 胞培养得到的O型口蹄疫抗原超滤浓缩,用蔗糖密度梯度离心法纯化,采用紫外检测方法检测各梯度区带抗原并收集各吸收峰。通过琼脂扩散沉淀试验做初步鉴定后,进一步用透射电子显微镜确定病毒抗原。结果表明,口蹄疫病毒146S抗原存在于... 董金杰 刘力宽 牟克斌 黄银君 祁光宇 刘学荣 乔莉萍 安芳兰 董文教 武发菊 陈苗苗 常艳燕文献传递 FMDV vp1基因在烟草中表达及转基因烟草的免疫效果 被引量:1 2005年 通过三亲杂交法,构建克隆有阿克苏(Akesu/58) O 型口蹄疫病毒vp1 基因的双元表达载体pBin FMDVVP1。采用农杆菌介导法转化NC89烟草叶盘,经卡那霉素筛选,共获得49株抗性植株。对抗性植株总DNA进行目的基因的PCR检测,有40株阳性植株。对阳性植株总RNA进行目的基因的RT PCR检测,有21株阳性植株。将7株ELISA和Western blot检测阳性植株叶片提取物分别与弗氏佐剂乳化,在0、15、30 和45d 腹膜腔接种Balb/C小白鼠,于第4次免疫后第9d进行血清抗体检测;第12d用104SM50 LD的同源强毒进行攻击;攻毒后24h采血,通过乳鼠病毒血症试验判定攻击Balb/C小白鼠的发病和保护情况。结果表明:双元表达载体pBin FMDVVP1构建正确;vp1基因转入NC89烟草并获得表达;7组中有2组Balb/C小白鼠血清抗体呈阳性,攻毒保护率分别为100%和63%。证明2株转基因烟草表达的VP1蛋白具有较好的免疫原性,所免疫的2 组Balb/C小白鼠对同源强毒攻击有一定的抵抗能力。 王宝琴 张永光 王小龙 王永录 潘丽 王文秀 董金杰 吕建亮关键词:口蹄疫病毒 烟草 免疫 新型猪瘟疫苗的研究进展 2010年 文章对新型猪瘟疫苗的研究现状进行了概述,为进一步研制和开发猪瘟疫苗提供参考。 董金杰 刘学荣 董文教 刘萍 安芳兰 武发菊 刘力宽 牟克斌 黄银君 黄银君关键词:猪瘟 病毒 新型疫苗 口蹄疫疫苗抗原质量监测和成品效力检测研究进展 被引量:2 2017年 口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染动物疫病,目前防治该病的主要手段仍是接种疫苗,因此疫苗质量是防治该病成功与否的关键。为防止不合格产品进入市场,需采取有效的质量监控方法对抗原质量和成品效力进行监测,本文就疫苗中间品和成品检测方法做一简述。 董金杰 陈苗苗 王凡 智晓莹 牟克斌 黄银君 王超英 张云德 刘萍关键词:口蹄疫 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其免疫活性初探 本实验拟将口蹄疫病毒主要免疫原基因VP1和能非特异性增强免疫应答能力的白细胞介素-18(IL-18)基因,同时插入到真核表达载体,为口蹄疫新型分子疫苗研究探索新的思路.结果表明,疫苗pcDNAVI可引发机体产生体液免疫,... 董金杰关键词:口蹄疫病毒 真核表达载体 分子疫苗 核酸疫苗 基因免疫 文献传递 塞内卡病毒研究进展 塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)作为猪水疱性疾病的新发病原体,已经在不同国家和地区迅速传播。它能引起与口蹄疫相似的临床症状,并导致严重的经济损失。近两年来,中国,巴西美国和报告的SVA病例不断增加。然而,... 王会宝 董金杰 王超英 吕宏亮关键词:免疫应答 文献传递 口蹄疫灭活疫苗146S含量检测方法概述 被引量:4 2017年 口蹄疫(Food and Mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Food and Mouth Disease Virus,FMDV)引起的偶蹄类动物的急性、热性、接触性、烈性传染病。世界范围内预防口蹄疫发生的有效方法是疫苗免疫,疫苗生产过程中,各环节过程控制至关重要,其中准确定量完整的口蹄疫病毒粒子(146S)尤为关键,因为146S抗原的含量直接决定了口蹄疫灭活疫苗的质量,所以准确,快速, 董金杰 董金杰 陈苗苗 牟克斌 王超英 牟克斌关键词:口蹄疫病毒 灭活疫苗 VIRUS 偶蹄类动物 烈性传染病 疫苗免疫 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒VP1基因真核表达载体的构建及其免疫活性的初步分析 被引量:1 2005年 提取亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒总RNA,用特异性引物通过RTPCR反应获得了约750bp的核酸片段,将其与pGEMTEasy载体连接,并转化大肠埃希氏菌JM109。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序,证明所克隆的片段含有完整的VP1基因;将重组质粒与表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后连接,构建成重组表达质粒,转化宿主菌DH5α,筛选阳性克隆。测序结果证明,目的基因正确插入到表达载体中,命名为pcDNAV;用同样方法将IL18基因插入pcDNAV中,命名为pcDNAVI。用pcDNAVI免疫豚鼠,2周后加强免疫1次,每周用ELISA检测豚鼠血清中的抗体水平。结果表明,pcDNAVI可引发机体产生体液免疫。 董金杰 王永录 张永光 伏小平 潘丽 方玉珍 蒋守田 王宝琴 王文秀关键词:VP1基因 真核表达载体 免疫活性 体液免疫 核酸疫苗