赵小强
- 作品数：10 被引量：34H指数：4
- 供职机构：郑州大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生文化科学更多>>
- T7启动子介导体外构建Nucleostem in特异性短发夹状干扰RNA被引量：4
- 2006年
- 目的体外构建合成针对Nuc leostem in(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNA i)为手段的白血病基因治疗可行性。方法从Nuc leostem in基因的三个变异体cDNA共同序列中筛选出2个3′端为AA的21个碱基片段作为shRNA合成的对应序列,9个碱基的5′-UCUCUUGAA-3′作为Loop环。以23个碱基的5-′GGATC-CTAATACGACTCACTATA-3′作为T7启动子(T7 Promoter)序列,构建shRNA的体外合成双链DNA模板,一条链5′端无AA,顺序为启动子、shRNA正义信息链、Loop环、shRNA反义信息链,共70个碱基;另一条是该链的互补链,5′端带有AA,共72个碱基。在T7 RNA聚合酶(T7 RNA polym erase)作用下合成shRNA,纯化后通过凝胶电泳比较灰度值确定shRNA浓度;shRNA作用于HL-60细胞,通过观察细胞形态变化和NS-mRNA抑制率验证干扰效果。结果体外合成的两条shRNA电泳无降解和弥散现象,浓度分别为5.24μmol.L-1和3.35μmol.L-1;干扰HL-60细胞48 h后,细胞密度和聚集程度下降,细胞之间大小相差悬殊,经shRNA-NS-2作用的HL-60细胞一部分由圆形变成了梭形并有明显的伪足;与对照组相比NS-mRNA抑制率分别达到37.82%和71.88%。结论体外成功构建和合成了两条针对Nu-c leostem in基因的shRNA,且抑制该基因表达的作用明显,shRNA-NS-2使HL-60细胞形态发生了改变。所合成的shR-NA-NS-2可作为进一步研究该基因和探索白血病的基因治疗的工具。
- 岳保红朱晓燕孙玲赵小强陈艳丽王清霞刘帅张钦宪
- 关键词：T7启动子核干细胞因子体外构建DNA模板
- c-myc特异性siRNA对HL-60细胞作用的研究被引量：8
- 2006年
- 目的研究针对c-myc基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对白血病细胞株HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖状态,免疫细胞化学染色法检测c-myc蛋白表达的改变。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其增殖抑制作用于转染后48h、72h最明显,增殖抑制率分别为53.2%和51.5%;免疫细胞化学染色结果显示c-myc蛋白阳性率从空白组(76.67±4.35)%下降至(23.33±3.56)%。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增殖及c-myc蛋白表达有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。
- 赵小强孙玲刘小转岳保红陈艳丽
- 关键词：SIRNAC-MYCHL-60细胞
- RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响被引量：1
- 2006年
- 目的研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断(siRNA)对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48h、72h最明显,增生抑制率分别为53.2%和51.5%;S期细胞比值由(56.1±4.7)%降至(17.8±3.2)%,细胞阻滞在G0/G1期。结论针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病治疗提供新的途径。
- 孙玲赵小强岳保红陈艳丽刘小转
- 关键词：C-MYC基因
- 特异性c-myc siRNA对HL-60细胞的抑制作用
- 目的：RNA干扰/(RNA interference，RNAi/)是指双链RNA/(double-strand-ed RNA，dsRNA/)分子在mRNA水平封闭相应序列基因的表达使其沉默的过程，是一种序列特异性的转录后...
- 赵小强
- 关键词：HL-60细胞C-MYC基因SIRNA
- 文献传递
- 核干细胞因子特异性短发夹状RNA对HL-60细胞分化抗原和生物学性质的影响被引量：8
- 2006年
- 目的研究核干细胞因子(nuc leostem in,NS)特异性短发夹状RNA(shRNA)阻断NS基因表达对HL-60白血病细胞分化抗原及生物学性质的影响,探讨NS的生物学功能和与急性白血病的关系以及用于基因治疗的可能性。方法特异性转染试剂和合成的NS短发夹状RNA(NS-shRNA)体外直接转染HL-60细胞,采用RT-PCR判断基因阻断效果,MTT法测定转染后细胞增殖能力,流式细胞仪(FCM)测定细胞分化抗原,形态学观察细胞形状和生长状态,血细胞分析仪测定细胞大小、粒度。结果合成的2条NS-shRNA均能明显阻断NS基因表达,抑制率分别为37.82%和71.88%;NS-shRNA能显著抑制HL-60细胞的增殖并存在时间和浓度依赖性,以48 h和10 nmol/L浓度最佳。转染后:分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化趋势;细胞聚团性减弱,碎片增多,一部分细胞形态变成梭形和长尾形,染色后细胞核紧密,凹陷,髓过氧化物酶(MPO)和α-醋酸萘酚酯酶(α-NAE)活性增强;大小和粒度分析小体积细胞和核碎裂细胞增多。结论NS-shRNA通过阻断NS基因表达,对HL-60细胞有抑制增殖和促分化作用,改变了细胞的生物学性质,使细胞恶性程度有所减弱,并有可能诱发凋亡,在白血病的基因中具有潜在的临床价值。
- 岳保红朱晓燕张功员孙玲赵小强王清霞刘帅张秋堂张钦宪
- 关键词：核干细胞因子短发夹状RNA分化抗原生物学性质分化
- C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响被引量：7
- 2006年
- 目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。
- 陈艳丽刘延方岳保红赵小强马鸿雁孙玲
- 关键词：C-MYCSIRNAHL-60细胞凋亡
- 核干细胞因子基因在急性白血病细胞表达的检测和意义被引量：17
- 2006年
- 目的检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在急性白血病细胞的表达情况,探讨NS基因与急性白血病发病机制之间的关系。方法从NS基因的3个变异体中筛选出共同序列设计特异性引物,应用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)对白血病细胞系K562、HL60和急性粒细胞白血病(M1、M2a和M3),急性单核细胞白血病(M5a和M5b),急性淋巴细胞白血病(ALL)进行NS基因表达水平的检测,以健康人和良性贫血患者骨髓单个核细胞作为对照。PCR产物片段为418bp。结果K562、HL60明显高表达NS基因,它与内参相比灰度值分别为0·735±0·260、0·449±0·190;急性白血病病例有相似的结果。M1+M2a、M3、M5a、M5b、ALL的灰度值分别为0·687±0·210、0·408±0·160、0·866±0·270、0·448±0·190、0·403±0·190;对照组健康人和良性贫血不表达或极微弱表达NS基因;同一细胞类型白血病,细胞分化停滞在早期阶段的表达NS基因的水平明显高于细胞分化停滞在后期的白血病,如K562高于HL60;M1、M2a高于M3;M5a高于M5b(P<0·01)。结论NS基因在急性白血病细胞中呈高表达状态,这与白血病的发生、发展有一定关联;不同分化阶段的白血病细胞表达NS基因水平存在着差异。NS基因在急性白血病细胞的表达情况也显示了癌细胞和干细胞在某些方面的相似性,可能是一个潜在的基因治疗靶位。
- 岳保红孙玲赵小强陈艳丽王清霞刘帅张钦宪
- 关键词：干细胞因子
- DPYD基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病风险及化疗预后的关系
- 目的： 探讨二氢嘧啶脱氢酶(DPD)基因(DPYD)多态性与儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的发生风险及化疗预后的相关性。 方法： 收集2011年1月至2014年12月在郑州大学第一附属医院血液科被诊断为ALL的1...
- 赵小强
- 关键词：急性淋巴细胞白血病发病机制基因多态性临床预后
- 后湖黄册库研究
- 后湖黄册库是明太祖朱元璋时期建立于南京后湖小岛之上的专门用来贮藏全国黄册和鱼鳞图册等赋役档案的中央专用档案库房,是主要为明王朝征收赋税和征发徭役等事务服务的一个专门机构。后湖黄册库由于地理位置优越、库房建造别具特点适合保...
- 赵小强
- 关键词：档案库房明朝时期
- 文献传递
- 阳离子脂质体VEGF反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响被引量：1
- 2005年
- 目的观察阳离子脂质体VEGF反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的作用。方法应用阳离子脂质体VEGFASODN转染HI60细胞48h后,观察细胞形态,电泳法检测DNA梯状带和流式细胞仪AnnexinVFITC/PI检测细胞凋亡。结果VEGFASODN组VEGFmRNA的表达完全抑制,VEGFMSODN组和空白对照组的VEGFmRNA的表达没有明显变化,细胞生长受抑制可见细胞固缩,DNA电泳出现典型的梯状条形带,流式细胞仪分析细胞凋亡率可达23.28%,明显高于VEGFMSODN组的8.21%和空白对照组。结论VEGFASODN可抑制白血病细胞VEGFmRNA的表达,导致白血病细胞的凋亡,VEGF基因与白血病细胞的凋亡有关。
- 王一浩孙玲褚彬马鸿雁岳保红陈艳丽赵小强刘少君
- 关键词：血管内皮生长因子反义寡核苷酸白血病凋亡
