马春芳
- 作品数：15 被引量：42H指数：4
- 供职机构：南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目南京军区医学科技创新课题国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 用免疫磁珠法检测抗白念珠菌烯醇化酶抗体被引量：1
- 2013年
- 目的建立检测人血清抗白念珠菌烯醇化酶(Eno)IgG类抗体的免疫磁珠法,并评估其在念珠菌血症诊断中的价值。方法将Eno重组蛋白耦联至磁性微珠上,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗人IgG为二抗,优化免疫磁珠法的反应条件,考察其精密度和特异性。收集经血培养确诊的念珠菌血症患者(n=113)、念珠菌定植者(n=50)、细菌菌血症患者(n=30)和健康人对照者(n=100)血清,用免疫磁珠法测定抗Eno抗体,并与ELISA法结果进行比较。结果免疫磁珠法测定抗Eno抗体的批内、批间变异系数(CV)分别为8.2%和14.2%,重组Eno抗原对相应抗体的阻断率为91.6%。以吸光度(A)值0.29为cut off值时,诊断念珠菌血症的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为80.5%、92.3%、90.1%和84.5%。免疫磁珠法的敏感性和特异性与ELISA法比较无统计学差异,但检测流程从37℃2.5 h缩短至常温1 h。结论免疫磁珠法检测抗Eno IgG类抗体简便、快捷、可靠,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。
- 胡毓安史利宁李芳秋年娜马春芳孔小祥
- 关键词：烯醇化酶抗体免疫磁珠法念珠菌血症
- 烟曲霉免疫优势抗原硫氧还蛋白还原酶GliT的鉴定及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估
- 目的 GliT(thioredoxin reductase GliT,TR)的鉴定,及其特异性抗体在非粒缺IA患者中早期诊断价值的初步评估。方法用生物信息学技术分析TR的同源性;用基因克隆和原核表达技术获得重组TR;经质...
- 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋
- 念珠菌优势抗体检测方法的建立及临床诊断价值评估被引量：9
- 2013年
- 目的侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis,IC)是免疫功能损伤或低下患者常见的感染和死亡原因,近年来检测IC患者血清中特异性抗体的血清学诊断方法成为研究热点。本文旨在建立检测念珠菌烯醇化酶(Enolase,Eno)、果糖二磷酸醛羧酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)特异性抗体的ELISA方法,评估其在IC早期诊断中的应用价值。方法利用基因重组技术获得的Eno、Fba1重组蛋白作为包被抗原,建立测定人血清相应抗体的ELISA,并对方法的敏感性、特异性进行考查。结果建立了检测IC患者血清抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA,cut-off值分别为吸光度(A)值0.370和0.610。ELISA结果显示,IC患者血清中的抗Eno、抗Fba1抗体水平明显高于健康对照和非IC患者对照(P<0.001)。抗Eno和抗Fba1对诊断IC的敏感性和特异性分别为72.3%(73/101)和98%(196/200),87.1%(88/101)和96%(192/200),联合检测可提高敏感性至91.0%。且与细菌感染及其他真菌感染患者(如曲霉病)无交叉反应。IC患者中40.6%(41/101)可以在血培养阳性前检测到抗Eno、49.5%(50/101)可以在血培养阳性前检测到抗Fba1。结论建立了检测抗Eno、抗Fba1抗体的ELISA法,检测念珠菌菌丝相分泌蛋白IgG抗体特异性和灵敏度良好,在念珠菌感染诊断中具有潜在临床应用价值。
- 马春芳陆静芬孔倩倩韩丹丹廖红李芳秋
- 关键词：念珠菌烯醇化酶ELISA
- 抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT抗体对侵袭性曲霉病的诊断价值被引量：3
- 2013年
- 目的建立检测抗烟曲霉硫氧还蛋白还原酶GliT(TRG)抗体的ELISA法,评价其对侵袭性曲霉病(IA)的诊断价值。方法选择非中性粒细胞缺乏症IA患者42例、中性粒细胞缺乏症IA患者34例、血培养为其他真菌或细菌的非IA患者155例及体检健康者200例作为研究对象。用重组TRG作为包被抗原建立检测血清抗TRG抗体的ELISA法,检测研究对象血清抗TRG抗体水平,并与半乳甘露聚糖(GM)试验比较。建立兔IA模型观察抗TRG抗体产生的情况。结果 ELISA法检测抗TRG抗体的cut off值为0.514。非中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.827(0.571,1.234),抗TRG抗体阳性率为81.0%(34/42);中性粒细胞缺乏症IA患者抗TRG抗体A值为0.445(0.250,0.924),阳性率为41.2%(14/34)。非中性粒细胞缺乏症IA患者、中性粒细胞缺乏症IA患者组血清抗TRG抗体水平高于健康人+非IA患者对照组[0.191(0.134,0.293)],U分别为2 669.5、855,P均<0.01。对于非中性粒细胞缺乏症IA患者,抗TRG抗体ELISA检测法的敏感性高于GM试验(81.0%vs 52.3%,χ2=6.72,P<0.01);对于中性粒细胞缺乏症IA患者,GM试验的敏感性高于抗TRG抗体ELISA检测法(85.3%vs 41.2%,χ2=6.72,P<0.01)。2者联合检测,可使诊断非中性粒细胞缺乏症和中性粒细胞缺乏症IA的敏感性分别提高至88.1%(37/42)和91.2%(31/34)。血清抗TRG抗体在IA初期阶段持续升高,抗真菌治疗有效后,抗TRG抗体水平逐渐降至正常。兔IA模型显示感染烟曲霉1周后即出现抗TRG抗体,且抗体滴度快速增高。结论抗TRG抗体是辅助诊断非中性粒细胞缺乏症IA患者的潜在的标志物。
- 史利宁陆静芬马春芳孔倩倩李芳秋
- 关键词：侵袭性曲霉病中性粒细胞缺乏症
- 白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的制备抗白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)单克隆抗体,用以研究胞壁蛋白Fba1在侵袭性念珠菌感染(IC)中的致病作用。方法取重组白念珠菌Fba1蛋白免疫BALB/c小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA测定单克隆抗体的效价,western blot和免疫荧光技术鉴定其特异性,用IsoStrip鉴定其抗体类型。结果筛选到1株稳定分泌抗Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞,抗体类型为IgG2a,轻链为κ型。鉴定结果表明,ELISA效价为1×106,能与念珠菌裂解物中天然Fba1和基因重组Fba1特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单克隆抗体与白念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌均发生反应。结论建立了1株持续分泌高效价抗念珠菌属特异性Fba1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,为研究Fba1在IC中的致病作用提供了实验材料。
- 李芳秋陆静芬史利宁胡毓安王颖马春芳孔倩倩
- 关键词：念珠菌单克隆抗体
- 霍奇金淋巴瘤的靶向治疗药物SGN-35被引量：2
- 2011年
- 霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma,HL)是最常见的恶性肿瘤之一,目前尚无完善治疗手段。近年来免疫疗法成为治疗HL的热点。SGN-35是一种能靶向治疗霍奇金淋巴瘤的新型抗体-药物偶联物(antibody-drug conjugate,ADC),由药物、抗体以及偶联抗体和药物的接头(linker)3个部分组成。ADC通过其抗体部分与肿瘤细胞表面的抗原特异性结合,将具有细胞毒性的药物运载到肿瘤细胞,经过内化进入靶细胞,释放出药物发挥治疗作用。文中综述SGN-35各组成部分的特点、作用机制及应用前景。
- 马春芳李芳秋
- 关键词：靶向治疗霍奇金淋巴瘤
- 抗曲霉硫氧还蛋白还原酶单克隆抗体的制备及鉴定被引量：2
- 2014年
- 目的制备烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase,TR)GliT单克隆抗体(单抗)并进行鉴定。方法取重组烟曲霉TR蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,筛选分泌抗TR抗体的杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化。用ELISA法测定抗体效价,IsoStrip鉴定抗体类、型,用western blot、免疫荧光分析技术和免疫组化染色鉴定单抗的特异性。结果筛选到1株稳定分泌抗TR单抗(Anti-TR1)的杂交瘤细胞,抗体亚类为IgG1,轻链为κ型。ELISA法测定效价为5×105,能够与烟曲霉分泌蛋白及菌丝中天然TR特异性结合,还可与基因重组TR特异性结合。免疫荧光检测表明,该株单抗与烟曲霉、黄曲霉和黑曲霉菌丝均发生反应,是曲霉属特异性的抗体。病理组织免疫组化染色结果显示,该抗体可与曲霉菌丝产生特异性反应。结论获得了1株持续分泌高效价抗曲霉属特异性抗TR单抗的交杂瘤细胞株,为进一步的研究奠定了基础。
- 史利宁胡毓安陆静芬廖红马春芳李晓军李芳秋
- 关键词：曲霉单克隆抗体
- 白色念珠菌烯醇化酶双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立被引量：1
- 2014年
- 目的：建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶（enolase,Eno）的双抗体夹心ELISA法,并应用于不同真菌培养上清液的检测,探讨其在侵袭性念珠菌感染中潜在的诊断价值。方法：将白色念珠菌Eno单抗作为包被抗体,HRP标记的羊抗Eno作为检测抗体,利用重组白色念珠菌Eno蛋白作为标准品评价该方法的精密度、线性范围、最低检测下限等性能指标。用建立的双抗体夹心ELISA法定量检测不同真菌培养上清和白色念珠菌在不同温度下培养上清中Eno水平。结果：Eno浓度为20 ng/ml和5 ng/ml时,批内和批间精密度分别为6.61%、9.19%和6.98%、13.81%,最低检出下限为1.25 ng/ml,线性范围为1.25-50.00ng/ml。白色念珠菌37℃培养24 h时的上清中Eno含量为3.06 ng/ml,培养120 h时Eno水平上升到33.43 ng/ml,Eno水平与白色念珠菌菌丝含量呈正相关。本方法与近平滑念珠菌有微弱交叉反应,与热带念珠菌、光滑念珠菌、季也蒙念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母均无交叉反应。结论：成功建立了定量检测白色念珠菌Eno的双抗体夹心ELISA法,在侵袭性念珠菌感染研究中具有潜在的应用价值。
- 胡毓安史利宁李芳秋李伟马春芳
- 关键词：侵袭性念珠菌病白色念珠菌烯醇化酶ELISA
- 检测3种侵袭性真菌感染相关抗体的蛋白质芯片法被引量：2
- 2013年
- 目的用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba1)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价。方法用重组Eno、Fba1和TR作为固相抗原构建蛋白质芯片。对芯片制备及血清中相应抗体测定的反应条件进行优化。对方法的重复性、稳定性及特异性进行考察,并测定临床确诊的侵袭性念珠菌病(IC)、侵袭性曲霉病(IA)患者血清中的相应抗体。结果蛋白质芯片以硝酸纤维素膜为固相载体,以Tris-HCl为载样液,重组Eno、Fba1、TR最适点阵浓度分别为0.5 mg/mL、0.04 mg/mL和1.0 mg/mL,用含50 g/L脱脂奶粉的PBS溶液封闭,待测血清稀释度为1∶10。抗Eno抗体和抗Fba1抗体诊断IC的敏感性和特异性分别为67.6%(71/105)和96.5%(299/310),64.8%(68/105)和90.3%(280/310);联合检测抗Eno抗体和抗Fba1抗体,可将敏感性提高至81.0%。抗TR抗体诊断IA的敏感性为71.4%(30/42),特异性为98.1%(366/373)。结论建立了同时检测两种真菌的3种不同抗体的蛋白质芯片方法,敏感性尚可,可用于高危人群的筛查。
- 马春芳李芳秋胡毓安史利宁韩丹丹廖红李伟
- 关键词：蛋白质芯片抗体侵袭性念珠菌病侵袭性曲霉病
- 白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p的原核细胞表达及鉴定被引量：6
- 2012年
- 目的原核细胞表达白念珠菌H3K4甲基转移酶N末端肽段Set1-208p,鉴定重组蛋白质的抗原性。方法用比对软件对白念珠菌H3K4甲基转移酶与其他物种甲基转移酶进行比对。选择与人类无同源性的抗原特异性片段,以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,PCR扩增Set1-208p的编码基因,以pET28a(+)为载体,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白质表达。用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊侵袭性白念珠菌感染(IC)患者血清进行抗原性鉴定。结果成功克隆了白念珠菌抗原特异性H3K4甲基转移酶片段Set1-208p基因并诱导表达,获得了纯化的重组肽段,所得蛋白质分子量(Mr)约为29 000,带有His标签,经western blot鉴定,诱导的重组蛋白可与IC患者血清特异性反应。结论成功诱导表达了具有良好抗原反应性的Set1-208p重组蛋白质,为建立相应的抗原、抗体ELISA检测方法提供基础。
- 孔倩倩廖红李芳秋马春芳史利宁胡毓安
- 关键词：白念珠菌基因克隆原核细胞表达
